296例血清免疫固定电泳检测结果分析

刘玉梅 黄琳淋 赵有利 石 翀

多发性骨髓瘤 （Multiple Myeloma，MM）属造血系统肿瘤，是浆细胞异常过度增生所致的恶性肿瘤。异常浆细胞即骨髓瘤细胞浸润骨髓及软组织，产生单克隆免疫球蛋白（M蛋白），引起骨骼破坏、贫血、肾功能损害和免疫功能异常等。MM按免疫球蛋白分型可分为IgG、IgA、IgM、IgD、IgE、游离轻链（Kappa或Lamda）及游离重链等7型［1］。MM患者由于某个克隆发生异常增生，分泌大量单一均质的M蛋白，经血清蛋白电泳后扫描，可在β或γ区出现浓染、狭窄而界限分明的特征性M蛋白条带（M带），不同类型的MM显示M带位置不同［2］。扫描后M蛋白呈底部狭窄、高尖的蛋白峰。免疫固定电泳（Immunofixation Electrophoresis，IFE）通过蛋白电泳和免疫沉淀两个过程，使 M蛋白在固相支持物凝胶片上直接与抗血清作用，在原位形成抗原抗体复合物，结果直观可靠，可对MM进行诊断和分型。本实验旨在比较血清总蛋白测定、血清蛋白电泳和IFE对MM诊断、分型的价值。

1 资料与方法

1.1 标本来源

收集兰州大学第二医院2006年3月～2011年7月门诊及住院患者的血清标本296例，检测结果均为血清蛋白水平异常或血清蛋白电泳有异常条带，临床建议行IFE检测的血清标本。MM临床确诊依据国家现行诊断标准［3～5］。

1.2 试剂和仪器

血清蛋白电泳、IFE均采用法国Sebia公司Sebia Hydrasys半自动电泳仪，试剂、抗体均为原装配套。血清总蛋白使用日立7600－010全自动生化分析仪及配套试剂测定。

1.3 检测方法

1.3.1 血清总蛋白测定：采用G－cell双缩脲法上机测定。血清总蛋白＞80g／L者判断为阳性。

1.3.2 血清蛋白电泳：取10μl血清于加样梳上，放入保湿盒内5min，自动电泳，固定、干燥、染色，进行扫描数据处理后，观察结果。若α2至γ区出现浓染、狭窄而界限分明的M蛋白带，扫描后呈底部狭窄，高尖的蛋白峰（带高≥2倍带宽）则判断为阳性。

1.3.3 血清IFE：样品稀释：IgG以1∶6稀释，其它（IgA、IgM、κ、λ）以1∶3稀释。加样：取血清10μl加样于配套点样梳上，平衡5min后加样于2人份或4人份琼脂糖凝胶板上，在20W、恒定电流下进行电泳，直至42Vh为止，20℃恒温约9min。加抗血清：在每份标本的6个电泳区域上各加固定溶液、抗IgG、IgA、IgM、抗κ、λ型血清各8～12μl。孵育5min后，用厚滤纸吸去抗血清，烘干。染色：将烘干的胶片置于染缸内用酸性结晶紫染色，然后用0.5%柠檬酸脱色液进行脱色。再65℃10min烘干后观察结果。IFE后α2或γ区沉淀带浅染，呈弥散分布，判断为阴性。如在电泳条带参考泳道（ELP）、G、A、M重链和／或κ、λ轻链上出现浓染、狭窄而界限分明的沉淀带，即为M带，判断为IFE阳性。

1.4 统计学处理

用SPSS 11.5统计软件对血清总蛋白定量、血清蛋白电泳和血清IFE的临床诊断的敏感性、特异性进行统计分析，采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 三种方法对MM的诊断价值比较

296例血清样本均进行血清总蛋白定量、血清蛋白电泳和血清IFE检测，被临床确诊为MM患者109例。血清总蛋白阳性者（264例）中101例诊断为MM，但32例阴性病例中，有2例诊断为MM。血清蛋白电泳阳性者（158例）中97例诊断为MM，但138例阴性病例中，亦有2例被诊断为MM；血清IFE检测阳性（M带）者（114例）中109例被确诊为MM，但5例假阳性者中3例为多克隆高球蛋白血症，1例为淋巴瘤，1例为意义未明的单克隆丙种球蛋白血症（MGUS）。三种方法临床诊断的敏感性、特异性见表1。

表1 三种方法对MM的临床诊断价值

2.2 MM患者M蛋白在血清蛋白电泳图中的位置

正常人血清IFE后β或γ区沉淀带多为浅染，呈弥散分布，见图1，如在同一水平位置上，蛋白电泳条带的G、A、M重链和／或κ、λ轻链上出现浓染、狭窄而界限分明的沉淀带，即为M带，判断为血清IFE阳性。IgG型、IgM型MM患者血清的M蛋白均在γ区，见图2；IgA型MM患者血清M蛋白多在β区或β－γ区，见图3；轻链型MM患者M蛋白各球蛋白区域都可出现。109例MM患者M蛋白在血清蛋白电泳图中的分布情况见表2。

表2 109例MM患者M蛋白在IFE图中的位置情况

图1 正常血清IFE例图

图2 γ区IgGλ型MM

图3 β区IgAλ型MM

3 讨 论

MM起病多徐缓，患者可有数月至数十年的无症状期。在此期间，可有血沉增快、高球蛋白血症或原因不明的蛋白尿，为“临床前期”。MM的临床表现复杂多样，主要为骨痛、贫血、发热、感染、出血、肾功能不全、关节痛、消化道症状、神经系统症状、骨骼变形及病理性骨折等等，但这些症状均无特异性。MM患者多以骨病、肾病等继发病就诊，常被误诊为骨折、肾小球肾炎等。近年来，MM发病有增高趋势［6］，但有统计资料显示，MM 误诊率达54.0%～69.1%［7］，致使许多患者错过了最佳治疗时期。因此对其早期正确诊断至关重要。

本文296例患者大多有血清总蛋白增高，血清蛋白电泳异常，其中109例确诊为MM，因血清总蛋白定量和血清蛋白电泳测定方法简便，费用低廉，常作为临床MM的筛查实验。一旦筛查到血清总蛋白增高，血清蛋白电泳异常患者即行常规IFE检测。血清蛋白电泳有异常条带的患者并非MM的原因在于：一方面血清蛋白电泳不能区别α2区或β区急时相反应蛋白或脂蛋白增高引起的峰和M峰，比如大多数肾病、肾小球肾炎病人α2区或β区多出现高尖的峰，血清蛋白电泳不能确定是否为M蛋白，另一方面，血清蛋白电泳对M蛋白的检出率明显低于IFE，尤其对IgA型和轻链型MM，其蛋白电泳有时不出现M带，容易漏检。IFE可检测到所有特异的M蛋白。

本文109例 MM患者中，IgG型、IgM型 MM患者血清中M蛋白多在γ区，检出率达100.00%，与文献报道［8］基本相符；IgA型 MM患者的血清中M蛋白多在β区或β－γ区；轻链型MM患者M蛋白在β区、β－γ区和γ区均有出现。当单克隆成分出现在非γ区，例如M带隐藏在其它条带中或者出现不典型的小M带时，IFE亦可明确是否为真正的单克隆M蛋白。所以，IFE对MM的检出率和特异性均明显高于总蛋白定量和血清蛋白电泳，而且通过IFE可以直观地判断MM的类型，是临床诊断MM的重要方法。

1 李 勇.副蛋白血症的实验室研究状况［J］.国外医学·临床生物化学与检验学分册，2001，22（3）：158～159.

2 Hussein MA，Juturi JV，Lieberman I.Multiple myeloma：present and future［J］.Curr Opin Oncol，2002，14（1）：31～35.

3 陈协群，张永清.多发性骨髓瘤的诊断与疗效标准［J］.国际输血及血液学杂志，2007，（4）：297～299.

4 王淑娟，朱立华.多发性骨髓瘤及其实验室诊断［J］.中华检验医学杂志，2004，27（4）：50～53.

5 张之南，杨天楹，郝玉书.血液病学［M］.北京：人民卫生出版社，2003：341～359.

6 卢娉霞，陈 莺，张敬喜.免疫固定电泳在多发性骨髓瘤免疫分型中的应用［J］.实验与检验医学，2009，27（3）：267～268.

7 International Myeloma Working Group.Criteria for the classification of monoclonal gammopathies，multiple myeloma and related disorders：a report of the International Myeloma Working Group［J］.Br J Haematol，2003，121（5）：749～757.

8 崔 凡.免疫固定电泳检查在M蛋白分型鉴定中的应用［J］.临床和实验医学杂志，2010，9（8）：587～588.