乳腺癌中HER-2异常表达的临床病理学意义

黄文涛

（上海交通大学附属第六人民医院病理科，上海 200233）

乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一，我国的乳癌每年发病率大约是20/10万，在女性恶性肿瘤中位列第三位，且呈逐年上升的趋势。最新研究表明[1]，人表皮生长因子受体2（HER-2）在25%～30%的原发性浸润性乳腺癌中有基因扩增和蛋白的过度表达。HER-2的高表达可提高乳腺癌细胞的转移潜能，被认为是乳腺癌独立的预后指标之一。近年来随着医疗技术的进步,以HER-2为靶点的靶向治疗药物应用于HER-2高表达的乳腺癌患者，显著减少了肿瘤转移和复发率, 提高了患者的生存质量。因此在临床病理诊断中，准确检测HER-2的表达具有重要的治疗和预后价值。本文收集了155例浸润性乳腺癌病例，对其进行HER-2的免疫组织化学（IHC）和荧光原位杂交（FISH）检测，分析乳腺癌中HER-2异常表达的临床病理学意义。

1 材料与方法

1.1 组织标本

收集本院病理科诊断的2009年至2011年间浸润性乳腺癌标本155例，均为女性，术前未接受过放疗、化疗。患者年龄27～84岁，平均年龄56岁。所有标本均为4%中性甲醛固定石蜡包埋组织。

1.2 IHC检测方法

采用免疫组织化学EnVision方法。兔抗人多克隆抗体C-erbB-2（HER-2，Dako公司），工作浓度1∶500。采用PBS代替一抗做阴性对照，已知强阳性乳腺癌标本做阳性对照，操作流程按说明书进行。IHC结果判断参照乳腺癌HER-2检测指南[2]：0+（无染色或＜10%细胞膜染色），1+（＞10% 瘤细胞有不完整胞膜染色），2+（＞10% 瘤细胞有轻度至中度完整胞膜染色），3+（＞10% 细胞膜有完整胞膜强染色者）。

1.3 FISH检测方法

1.3.1 主要试剂和设备

HER2/CSP17 探针试剂盒购自北京金菩嘉医疗科技有限公司。实验步骤:按试剂盒说明书进行。

1.3.2 结果的判定

计数30个细胞核内橘红色的HER-2 荧光信号和17号染色体着丝粒的绿色荧光信号, 计算30个细胞核中红色信号与绿色信号总数之比值。比值＜1.8为阴性，提示无基因扩增，比值＞2.2时为HER-2基因扩增，若比值介于1.8～2.2之间，则需要再计数30个细胞核中的信号重新计数。

1.4 统计学处理

选用SPSS11.0统计学软件进行数据处理，用kappa检验进行统计学分析，P＜0.05具有统计学意义。

2 结 果

2.1 IHC检测结果

IHC阳性信号定位于肿瘤细胞胞膜，部分病例伴有胞质内着色。155例浸润性乳腺癌标本中，HER-2蛋白表达0+有8例，59例为1+，75例为2+，13例为3+，其表达率分别为5.2%、38%、48.4%及8.4%。

图1 HER-2基因扩增（FISH法 ×1000）

2.2 IHC和FISH检测HER-2表达的比较

155例乳腺癌标本中，FISH法检测HER-2有扩增（阳性）42例（图1），无扩增（阴性）113例（图2）。8例IHC（0+）中有8例FISH阴性，59例IHC（1+）者中有53例FISH阴性，75例IHC（1+）者中有52例FISH阴性，13例IHC（3+）者中12例为FISH阳性。4组中IHC和FISH符合率分别为100%、89.8%、69.3%和92.3%。一致性检验证明两者结果符合率为80.6%，存在一致性（Kappa=0.363，P=0.000）。其相互关系详见表1。

图2 HER-2基因无扩增（FISH法 ×1000）

表1 FISH与IHC检测结果比较

3 讨 论

HER-2基因是表皮生长因子受体家族成员之一。HER-2基因位于染色体17q21，编码相对分子量为185000的跨膜蛋白，在结构域上有胞外区、跨膜区和胞内区，具有酪氨酸激酶活性。HER2基因扩增将导致转录上调，增加蛋白合成并激活癌基因，从而诱发肿瘤发生[3]。研究发现，具有Her-2基因扩增的患者应用受内分泌（他莫昔芬）治疗后的死亡率明显增高，提示此类患者可能不适合应用内分泌治疗[4]。2002年美国FDA批准了一种全新的分子靶向药物Herceptin，在临床治疗中应用此类靶向药物，对那些具有HER-2基因扩增的患者具有良好的治疗效果，而对于低度扩增或者是不扩增的患者疗效不显著。因此临床用药前，准确检测Her-2基因表达具有重要的临床病理意义。

临床病理诊断中，检测HER-2蛋白与基因的常用方法是免疫组织化学（IHC）和荧光原位杂交法（FISH）。IHC法具有简便、廉价、快速等特点，能在蛋白水平观察HER-2的表达，并与形态相结合观察其定位。另一方面，由于IHC 还有自身缺陷，如组织固定使抗原丢失，固定液种类和储存时间对染色强度的影响，不同批号抗体之间的差异等都将影响IHC检测的准确性。FISH法具有快速、检测信号强、杂交特异性高和可以多重染色等特点，可直观地观察细胞核内特异性染色体或基因异常，并可与形态学结合，是肿瘤诊断的一个重要辅助手段。但FISH结果会受到一些因素的影响，如标本长时间固定、烤片温度过高、蛋白消化不当等，都会造成荧光信号减弱或无信号。固定液的使用也非常重要，FISH的标本应选用4%中性甲醛固定，经乙醇等其他固定液实验效果不佳[5]。因此在临床病理检测HER-2表达时，宜将IHC和FISH方法结合，可取长补短，增加检测的准确率。在本研究中，IHC0+的患者有8例，FISH 检测均为阴性，符合率100%。IHC1+的患者有59例，FISH 检测阴性率89.8%（53/59）。既往研究发现[6]IHC0/1+的病理与FISH检测的符合率可达95%以上，与本研究结果基本一致，对于少数IHC1+病例有FISH阳性，分析原因可能与乳腺癌基因的低拷贝数有关。IHC3+的患者有13例，FISH 检测阳性率92.3%（12/13），前期研究表明[7]IHC3+的病例与FISH检测的符合率达90%以上，与本研究结果相吻合。另外有1例IHC3+，FISH检测阴性，可能与17号染色体非整体性有关。乳腺癌患者17号染色体非整体性是乳腺癌的遗传学特征，即癌细胞中17号染色体数多于或少于2个。而这种非整体会造成一部分患者的IHC假阳性结果，这样的患者在使用Herceptin时效果并不理想。FISH检测技术加入了17号染色体着丝粒探针作为对照探针，因此能明确检测出患者肿瘤细胞的倍体性，避免了Her-2扩增是由于17号染色体非整体性造成的假阳性结果。本研究两组间的检测差异主要在IHC2+组，IHC2+的患者有75例，FISH 检测阳性率仅有30.7%（23/75）。前期研究也显示[8]IHC2+的乳腺癌病例中基因扩增的比率为8%-32%，与本组数据一样存在明显差异。因此，在临床病理诊断中，IHC检测为2+的病例，如需应用靶向药物治疗时，建议加做FISH检测。

综上所述，Her2在乳癌患者的诊疗过程中起着关键的作用，它可以用于评估患者预后，并能指导临床靶向药物的选择。因此，准确检测乳腺癌中HER-2的表达具有重要的临床病理学意义。

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