姜黄及其3种近源品种的姜黄素类成分薄层色谱鉴别及HPLC特征图谱分析△

黄博，伍丕娥，周娟，卿艳，卢道会，赵文吉，李敏*

（1.成都中医药大学中药鉴定教研室，四川 成都 611137；2.四川省食品药品监督检验所，四川 成都 611731）

中药科技

姜黄及其3种近源品种的姜黄素类成分薄层色谱鉴别及HPLC特征图谱分析△

黄博1，伍丕娥2，周娟2，卿艳2，卢道会1，赵文吉1，李敏1*

（1.成都中医药大学中药鉴定教研室，四川 成都 611137；2.四川省食品药品监督检验所，四川 成都 611731）

目的：鉴别分析姜黄及其3种近源品种（蓬莪术、温莪术、广西莪术）的姜黄素类成分。方法：以姜黄对照药材，姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素对照品为对照进行薄层色谱鉴别；以姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素对照品为对照物质，采用HPLC对10批姜黄进行特征图谱研究，建立HPLC特征图谱共有模式，进行相似度比较，并将姜黄与3种近源品种进行相似度比对。色谱条件：采用月旭AQ-C18（200mm×4.6mm，5μm）色谱柱，以乙腈－水为流动相进行梯度洗脱，流速1mL·min－1，检测波长270nm，柱温30℃。结果：供试品色谱中，姜黄与3种莪术的斑点位置、颜色、数量有明显差别；建立了姜黄的HPLC特征图谱，确定了7个共有峰，10批姜黄药材样品的平均相似度在0.97，姜黄与3种近源品种的相似度均低于0.8，特征图谱差异明显。结论：姜黄及其3种近源品种的薄层色谱及HPLC特征图谱差异明显，且方法简便、准确、专属性强，可作为姜黄及其3种近源品种的鉴别，同时也为姜黄对照药材标定技术标准的建立提供了科学依据。

姜黄；蓬莪术；温莪术；广西莪术；薄层色谱法；高效液相特征图谱

姜黄素是姜科植物姜黄根茎提取物中的一种酚类化合物，具有抗炎性反应、抗血小板聚集、抗凝血、抗氧化、抗肿瘤、抑制平滑肌细胞增殖、降血脂等多方面的药理作用［1］。姜黄素也是天然黄色色素，具有良好的染着性和分散性，广泛应用于食品及纺织行业［2-4］。在我国用姜黄属植物根茎入药的主要有姜黄Curcuma longaL、温莪术Curcuma wenyujinY.H.Chen et C.Ling、蓬莪术 Curcuma phaeocaulis Val.和广西莪术Curcuma kwangsiensisS.G.Lee et C.F.Liang 4种，这4种姜黄属植物根茎中均含有姜黄素。20世纪20年代以来，各国学者对这4种药材做了大量的研究，主要集中在化学成分分离鉴定和含量测定方面。笔者首次建立了姜黄的HPLC特征图谱，通过TLC和HPLC鉴别并有效区分了国产4种姜黄属植物的根茎，为姜黄及其3种近源品种（温莪术、蓬莪术、广西莪术）的分析、鉴别提供了可靠依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器

瑞士卡玛CAMAG Linomat 5半自动点样仪；CAMAG REPROSTAR薄层照相仪；Millipore Milli-Q超纯水系统，岛津十万分之一电子天平，Brasson超声波清洗仪；KQ-100超声波清洗仪。安捷伦1200液相色谱系统：包括1200泵，DAD检测器，waterse 2695液相色谱仪，waterse 2998检测器。硅胶G薄层铝箔板（天津斯利达，20cm×10cm）。

1.2 材料

姜黄对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：121108-200502），姜黄素对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110823-200603），去甲氧基姜黄素对照品（成都思科华生物技术有限公司，按98.0%计算），双去甲氧基姜黄素对照品（成都思科华生物技术有限公司，按98.0%计算）。甲醇、乙醇、乙酸乙酯等试剂均为分析纯（国药集团化学试剂有限公司），HPLC用甲醇、乙腈均为进口色谱纯试剂。

姜黄、温莪术、蓬莪术、广西莪术的样品收集情况见表1，经成都中医药大学李敏教授鉴定为正品。

表1 姜黄及3种近源品种样品收集情况

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

取姜黄、蓬莪术、温莪术、广西莪术粉末各0.2 g，加无水乙醇20mL，振摇，放置30 min，滤过，滤液作为供试品溶液。另取姜黄对照药材，同法制成对照药材溶液。再取姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素对照品，加无水乙醇制成每1mL含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷 －甲醇 －甲酸（96∶4∶0.7）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，姜黄在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点或荧光斑点，姜黄与3种莪术的斑点位置、颜色、数量有明显差别（图1）。

2.2 HPLC特征图谱方法研究

2.2.1 供试液的制备 取姜黄与3种莪术细粉0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中。精密加入甲醇10mL，称定重量，加热回流30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心。精密量取上清液1mL，置20mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀静置，取上清液用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。

图1 姜黄及其近源品种薄层色谱图

2.2.2 对照品溶液制备 取姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素对照品适量，精密称定，分别加甲醇制成每1mL含姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素0.5 mg的溶液作为对照品溶液。

2.2.3 梯度洗脱条件 参照《中国药典》2010年版一部中姜黄含量测定的流动相及相关文献，对流动相进行了筛选。最终确定采用乙腈－水梯度洗脱，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈为流动相A，水为流动相B。流动相梯度洗脱条件见表2。0.996，0.971，相似度大于0.9，说明姜黄药材特征图谱相似度高。

表2 流动相的梯度

图2 10批姜黄特征色谱指纹图谱共有模式（对照图谱）

2.2.4 色谱条件 采用月旭 AQ-C18（200mm×4.6mm，5μm）色谱柱；以乙腈为流动相A，水为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为270nm；柱温为30℃；流速为1.0mL·min－1；记录时间：50 min。2.2.5特征图谱的建立 取不同产地的姜黄（S1～S10）粉末（过二号筛），精密称定，按选定的方法制备供试品溶液，精密吸取10μL，分别注入液相色谱仪，按确定的色谱条件测定，记录50 min的HPLC图，采用国家药典委员会 “中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A）”进行数据分析处理，将10个样品的图谱一起匹配并生成对照图谱，再将10个样品测得的色谱峰与参照图谱进行自动匹配，生成姜黄特征图谱共有模式（即对照图谱，图2），计算1～10号样品与对照图谱的相似度，分别为0.952，0.931，0.983，0.935，0.973，0.984，0.996，0.974，

2.2.6 特征峰的标定 特征峰的标定是在共有峰标定的基础上进行的，将药材的指纹峰锁定在8～40 min共有特征区进行统计，采取相对保留时间从10批样品图谱中选定7个主要共有峰作为姜黄对照药材的特征峰（图2）。经过与混合对照品色谱图（图3）比对，确定S1号峰为双去甲氧基姜黄素，S2号峰为去甲氧基姜黄素，S3号峰为姜黄素。10批姜黄中7个特征峰的相对保留时间见表3。

图3 混合对照品色谱图

表3 特征峰的相对保留时间

姜黄药材特征图谱分析结果表明，10批姜黄药材特征图谱中呈现与参照物色谱峰相同的色谱峰，且相对保留时间均符合《中国药典》规定。

2.2.7 姜黄及其近源品种特征图谱比较 取姜黄、温莪术、蓬莪术、广西莪术的供试品溶液，按上述色谱条件进行实验，结果表明蓬莪术有6个特征峰，温莪术有8个特征峰，广西莪术有6个特征峰，其中蓬莪术和温莪术在18～19 min出现了姜黄所没有的特征峰，广西莪术在22～28 min仅有两个特征峰。姜黄与3种近源品种莪术的相似度均低于0.8，特征图谱差异明显，结果见图4。

图4 姜黄及其近源品种特征图谱比较

3 结论

4种姜黄属植物的根茎（姜黄、温莪术、蓬莪术和广西莪术）中均含有姜黄素类成分，但含量差异较大。通过薄层色谱法观察斑点的颜色、数量、位置可以快速地鉴别姜黄与其3种近源品种，试验表明该鉴别方法专属性强，重现性好，准确、灵敏、可行。首次建立了姜黄的HPLC特征图谱，采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版及B版对其进行相似度评价，选取了7个特征峰构成了姜黄的特征图谱，结果表明其特征图谱相似度高，获得的HPLC特征图谱能代表姜黄的基本特征，可明显区别于蓬莪术、温莪术、广西莪术。综上所述，利用TLC和HPLC可以有效地区分姜黄及其3种近源品种，结果准确、专属性强，可以应用于姜黄及其近源品种的鉴别中，同时也为姜黄对照药材标定技术标准的建立提供了科学依据。

［1］阳巍，廖端芳，庹勤慧.姜黄素抗动脉粥样硬化研究进展［J］.国际病理科学与临床杂志，2012，32（1）：55-58.

［2］牛生洋，郝峰鸽，许秋亚，等.姜黄色的提取及应用研究进展［J］.河南科学学院学报，2008，36（4）：58-61.

［3］张保军，李春林.天然姜黄素及其在果蔬饮料中的应用［J］.饮料工业，2002，5（6）：38-40.

［4］张晓冲.姜黄素生理功能及其药用前景［J］.中国医药指南，2012，10（2）：62-63.

Analysis Curcum inoids in Curcumae Longae Rhizoma and Its Three Near-source Species by TLC Identification and HPLC Fingerprint Chromatogram

HUANG Bo1，WU Pei-e2，ZHOU Juan2，QING Yan2，LU Dao-hui1，ZHAOWen-ji1，LIMin1
（1.Pharmacy School Chengdu university of TCM，Chengdu 611137，China；2.Sichuan Institute For Food and Drug Control，Chengdu 611137，China）

Objective：Researching Curcumae longae rhizoma and its three near-source species and Identificate the kinds of the curcuminoids.MetherdsTLC was used to identificate curcuminoids in Curcumae longae rhizoma and its three near-source species，with Curcumae longae rhizoma，Curcumine，Demethoxycurcumin，Diplo-demethoxycurcumin as reference substance.We established a HPLC fingerprint chromatogram to identificate the difference from near-source species.Results：The distinction of Curcumae longae rhizoma，and its three near-source species are obviously difference and can be identificated by TLC and HPLC fingerprint chromatogram.ConclusionThe identification methods were proved to be available and effective.

Curcumae longae Rhizoma；Curcuma phaeocaulis；Curcuma wenyujin；Curcuma kwangsiensis；TLC；HPLC

“十一五”国家科技支撑计划重大新药创制项目——“中药标准物质研制和开发的技术平台”——“标准物质标定标准和稳定性技术规范”（姜黄，2009ZX09308-001-3）

*［通讯作者］李敏，E-mail：028limin＠163.com

2012-05-02）