热休克蛋白B1在胰腺癌组织中的表达及临床意义

刘清华 赵晨燕 张晶 陈颖 倪灿荣 朱明华

·论著·

热休克蛋白B1在胰腺癌组织中的表达及临床意义

刘清华 赵晨燕 张晶 陈颖 倪灿荣 朱明华

目的检测热休克蛋白B1(HSPB1)在胰腺癌组织中的表达，分析其与肿瘤临床病理特征间的关系。方法选取47例胰腺癌、13例癌旁组织、3例慢性胰腺炎组织标本，用组织芯片构建仪制备组织芯片，应用免疫组织化学SP法检测HSPB1的表达。以阳性细胞所占的比例和染色强度两者评分乘积为标准进行结果判断。结果胰腺癌、癌旁和慢性胰腺炎组织中HSPB1的阳性表达率分别为80.9%(38/47)、12.5%(2/16)，两者差异具有统计学意义(χ2=24.058，P=0.000)。胰腺癌组织HSPB1的表达与患者性别、年龄及肿瘤部位、组织学类型、神经浸润均无关(P值均>0.05)。结论HSPB1参与了胰腺癌的发生、发展，这一过程可能是早期的分子事件。

胰腺肿瘤； 热休克蛋白质类； 芯片分析技术； 免疫组织化学

热休克蛋白(heat shock protein, HSPs)是细胞受到刺激后产生的一类高度保守的蛋白质。热休克蛋白B1(HSPB1)又称HSP27，属于小分子量HSP。近年来，关于HSPB1与恶性肿瘤的关系日益受到重视。本研究采用组织芯片技术和免疫组织化学染色法探讨HSPB1在人胰腺癌组织中的表达，分析其与肿瘤临床病理特征的关系。

材料和方法

一、组织标本

收集我院2003年病理科存档的临床资料完整的石蜡标本63例，其中胰腺导管腺癌47例，慢性胰腺炎3例，癌旁正常胰腺组织13例。病理诊断结果经两名以上病理医师确认。47例胰腺导管腺癌中男性 28例，女性19例；年龄34～75岁，中位年龄60岁；高分化腺癌10例，中分化腺癌30例，低分化腺癌7例；伴有神经浸润者26例，无神经浸润者21例。

二、组织芯片构建

根据HE切片确定具有代表性的病变部位( 癌和癌旁组织)，然后参照Kononen等[1]方法用组织芯片构建仪(Beecher Instruments, Silver Spring公司)制备组织芯片。即应用构建仪器在1个新的空白蜡块( 45 mm×20 mm)中穿孔(直径2 mm)，在选取组织的蜡块中穿取组织(直径2 mm)，准确放入空白蜡块的小孔内，按次序操作，直至将所有组织标本种植于空白蜡块中，并加以记录，最后进行连续切片。组织芯片蜡块含有198个位点，无组织芯脱落。

三、SP免疫组化染色

兔抗人HSPB1多抗(ab5579)购于美国Abcam公司，工作浓度1∶100；SP试剂盒和DAB显色液均购自北京中杉生物技术公司，按说明书操作。采用PBS缓冲液代替一抗作空白对照，用非免疫血清代替一抗作阴性对照。蛋白阳性染色为淡黄色至棕黄色，定位于细胞质或细胞核。参考Ohuchida等[2]标准，从阳性细胞所占的比例和细胞染色强度两个方面分别计分：无阳性细胞为0分，<20% 1分，20%～75% 2分，>75% 3分；无着色为0分，淡黄色1分，黄或深黄色2分，褐或棕褐色3分。两者计分乘积，0分为阴性(-)，1～3分为弱阳性(±)，4～6分为中等阳性(+)，>6分为强阳性(++)。

四、统计学处理

所有数据均应用SPSS11.0软件进行统计处理。组间HSPB1表达的差异用χ2检验， 胰腺癌HSPB1表达与临床病理特征之间的关系用Spearman相关分析。P<0.05为差异具有统计学意义。

结 果

一、胰腺癌、癌旁及慢性胰腺炎组织中HSPB1的表达

47例胰腺癌组织中HSPB1阳性表达38例，阳性率为80.9%；16例慢性胰腺炎和癌旁组织中2例呈低表达，阳性率为12.5%，两者差异具有统计学意义(χ2=24.058，P=0.000，图1)。

二、胰腺癌组织HSPB1的表达与其临床病理特征的关系

47例胰腺导管腺癌中，HSPB1阳性表达率与患者性别、年龄及肿瘤部位、组织学类型、神经浸润均无相关性(表1)。

图1慢性胰腺炎(a)、胰腺癌(b、c)组织中HSPB 1表达(SP ×400)

表1 胰腺癌组织HSPB1表达与肿瘤临床病理特征的关系

讨 论

热休克蛋白是生物细胞在受到刺激时产生的一类特殊蛋白质,它具有生物活性和免疫协同功能,可保护机体或细胞不受或少受伤害,对维持机体自身的稳定性起着重要作用。HSPB1是热休克蛋白家族中的小分子热休克蛋白亚家族(sHSP亚家族)的重要一员，定位于7q21，含3个外显子，分子质量为27 000，由205个氨基酸组成，其中15、78和82位是丝氨酸，具有保守性，是HSPB1发生磷酸化的主要位点。HSPB1可形成分子质量为400 000～800 000的寡聚体，该寡聚体的聚合与解离因其不同的生物学功能而异。在外界环境刺激下可发生向核和核仁的移位[3]。目前已有多项研究证实HSPB1与肿瘤具有密切的关系。Berrieman等[4]报道，HSPB1表达阳性的小细胞肺癌患者的预后不良。Yang等[5]报道，HSPB1蛋白在长春新碱耐药的胃癌细胞株SGC7901/VCR中表达明显增加，且与患者化疗疗效及预后有关。然而在食管癌、恶性纤维组织瘤等肿瘤中HSPB1的高表达则是预后良好的重要指标[6]。Leonardi等[7]亦发现，HSB1在口腔正常黏膜中的表达水平高于其在癌前病变和鳞癌组织中的表达，分化差的组织较分化好的组织表达下调。以上研究结果提示HSPB1在不同肿瘤中可能起着不同的作用。

Melle等[8]应用显微微切割技术对9例胰腺癌和10例正常胰腺组织进行蛋白质组学分析时发现胰腺癌组织高表达HSP27,并进一步证实HSP27在胰腺癌患者血清中高表达。Bünger等[9]亦发现HSP27在胰腺癌患者血清中高表达。本结果显示，HSPB1在胰腺癌组织中高表达，在慢性胰腺炎及癌旁组织中低表达，提示HSPB1参与了胰腺癌的发生、发展过程。但胰腺癌HSPB1的表达与患者性别、年龄及肿瘤部位、组织学类型、神经浸润等均无明显相关，提示HSPB1可能是胰腺癌发生的早期分子事件。

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DetectionofHSPB1expressioninpancreaticcanceranditsclinicalsignificance

LIUQing-hua,ZHAOChen-yan,ZHANGJing,CHENYing,NICan-rong,ZHUMing-hua.

ZHUMing-hua,Email:mhzhu2000@hotmail.com

ObjectiveTo investigate the expression of HSPB1 in pancreatic cancer and its relationship with clinicopathological characterization.MethodsPathological specimens from 47 cases of pancreatic cancers, 13 cases of para-cancerous normal pancreatic tissues and 3 cases of chronic pancreatitis tissues were selected, and tissue microarray construction instrument was used to prepare tissue microarray, then the expression of HSPB1 was determined by immunohistochemistry SP method. The scores of the proportion of positive cells and staining intensity were multiplied to make the judgment.ResultsThe expression of HSPB1 in malignant, para-cancerous and chronic pancreatitis tissues was 80.9%(38/47), 12.5%(2/16), respectively; and the difference between the two groups was statistically significant (χ2=24.058,P=0.000). The expression of HSPB1 in pancreatic cancer tissue was not significantly related to sex, age, location, differentiation degree and nerve infiltration of tumor (P>0.05).ConclusionsThe expression of HSPB1 is related to development and progression of pancreatic cancer, and may be an early molecular event.

Pancreatic neoplasm; Heat-shock proteins; Microchip analytical procedures; Immunohistoche mistry

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2012.03.009

国家自然科学基金(30770996，81172310)

200433 上海，第二军医大学长海医院病理科

朱明华，Email:mhzhu2000@hotmail.com

2012-01-04)

(本文编辑：屠振兴)