非小细胞肺癌患者呼出气冷凝液VEGF检测的临床意义

姜剑松

(南通大学第二附属医院呼吸内科,江苏南通,226001)

近年来,我国肺癌的发病率及病死率已跃居恶性肿瘤的首位[1],手术治疗、化疗及放疗对患者的5年生存率未见明显提高。提高5年生存率的关键在于肺癌的早期诊断,寻找和研究在早期阶段就能检测到与肺癌发生和进展相关的肿瘤标志物,已成为近年来的研究热点。呼出气冷凝液(EBC)分析作为一种简单、完全无创的检测方法,可提示气道炎症和其他呼吸系统疾病,如肺癌的发生发展[2-3]。血管内皮生长因子(VEGF)是目前已知作用最强的促血管内皮生长因子,与多种肿瘤的血管生成、肿瘤生长及转移有关。近年来,肺癌中VEGF表达的研究报道较多,其在肺癌组织和血清中的表达增加与肺癌恶性程度、有无淋巴结转移及预后不良有关[4]。目前对EBC中VEGF检测的研究尚不多见,本研究通过检测NSCLC患者和健康对照组EBC和血清中VEGF水平,探讨NSCLC患者EBC中VEGF检测的临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2011年6月—2012年7月于本科住院治疗的40例(A组)NSCLC患者为研究对象,其中男28例,女12例,平均年龄(61.2±9.6)岁;其中鳞癌12例,腺癌28例;按照2009年国际抗癌联盟(UICC)新修订的肺癌 TNM分期标准进行分期,Ⅰ期9例,Ⅱ期7例,Ⅲ期18例,Ⅳ期6例;有淋巴结转移的18例,无淋巴结转移的22例;有吸烟史的23例,无吸烟史的17例。所有患者均经病理或细胞学明确诊断。另选择本院同期住院的稳定期慢性阻塞性肺病(COPD)20例为COPD组(B组),其中男14例,女 6例,平均年龄(60.4±11.6)岁。同期从门诊体检中心选择20例健康体检者作为健康对照组(C组),其中男11例,女9例,平均年龄(59.7±10.5)岁。

1.2 方法

1.2.1 EBC的收集及保存:采用德国Eric Jaeger公司生产的EBC收集器(HAAK EK20 E-coScreen)收集EBC。首先将收集器预冷20 min,检查前受试者需漱口清洁口腔,戴鼻夹,通过咬口器平静呼吸。将呼出气直接呼入-20℃冰浴的收集管中,经单向活瓣平静呼吸20 min后,呼出气经冷凝变为雪状物,取出收集管,待标本融化后可以采集到1～3mL的EBC,移至离心管内,-70℃低温保存待测。

1.2.2 血清的收集和保存:健康对照组血液标本由本院体检中心提供。NSCLC患者在入院后清晨空腹抽取外周静脉血5 mL。稳定期COPD患者室温下标本静置1h,3500 r/min离心10 min,分离血清,将血清放入2 mL离心管中,置于-70℃低温冰箱保存待测。

1.2.3 VEGF检测:采用ELISA法测定EBC及血清中VEGF浓度。试剂盒为VEGF ELISA Kit(购自武汉贝茵莱生物科技有限公司),严格按照试剂盒说明书操作,检测EBC及血清中VEGF浓度。

2 结 果

2.1 3组EBC及血清VEGF水平比较

NSCLC组EBC和血清VEGF水平高于COPD组及正常对照组(P<0.05);COPD组EBC和血清VEGF水平高于正常对照组(P<0.05),见表 1。

表1 3组EBC及血清中VEGF的测定值(pg/mL,)

表1 3组EBC及血清中VEGF的测定值(pg/mL,)

与COPD组比较,＊P<0.05;与对照组比较,#P<0.05。

组别 n EBC-VEGF 血清VEGF肺癌组 40 11.7±6.1＊# 310.5±23.9＊#COPD组 20 6.3±4.9# 217.1±14.7#对照组 20 3.6±1.2 162.5±16.5

表2 NSCLC患者EBC及血清VEGF水平与临床病理特征的关系(pg/mL,)

表2 NSCLC患者EBC及血清VEGF水平与临床病理特征的关系(pg/mL,)

临床病理 生理特征 n EBC-VEGF P值 血清VEGF P值性别 男 28 11.1±4.8 >0.05 306.1±19.6 >0.05女12 10.3±5.2 312.4±21.3年龄 <60岁 15 9.8±5.7 >0.05 315.8±25.7 >0.05≥60岁 25 10.2±4.6 312.5±23.0吸烟史 有 23 11.5±5.9 >0.05 302.5±18.3 >0.05无17 10.8±4.7 296.7±26.8病理类型 鳞癌 12 9.5±5.8 >0.05 302.3±28.6 >0.05腺癌 28 10.3±6.1 313.5±36.2 TNM分期 Ⅰ期 9 5.6±3.2 <0.05 282.3±30.9 <0.05Ⅱ期 7 10.5±3.7 308.4±28.6Ⅲ期 18 14.2±4.0 342.6±25.7Ⅳ期 6 18.7±3.6 375.5±17.6淋巴结转移 有 18 17.4±5.1 <0.05 347.8±21.1 <0.05无22 8.3±4.6 283.6±35.1

2.2 NSCLC组EBC中VEGF水平与临床病理特征的关系

EBC和血清 VEGF水平与NSCLC患者的TNM分期及淋巴结转移呈正相关(P<0.05),与肺癌病理类型及患者性别、年龄吸烟史无密切关系(P>0.05),见表2。

3 讨 论

EBC检测技术与传统方法相比,具有以下优势:①EBC的收集过程完全无创,不影响气道功能或导致炎症;②可在短期内重复进行;③可作为肺部疾病特异性的检测手段;④检测方法简便,费用低,速度快,患者易于接受,便于推广。通过EBC检测肺癌肿瘤标志物,对于肺癌的早期诊断、病情评估、疗效评价和预后判断具有重要意义。研究表明,肿瘤的生长、转移及转移部位的生长依赖于组织血管新生[4]。目前已分离纯化出30多种促血管内皮生长因子及相关因子,如VEGF、碱性纤维母细胞生长因子、酸性纤维母细胞生长因子、转化生长因子等,其中以VEGF作用最强、特异性最高。VEGF通过增加内皮细胞的有丝分裂及迁移,重塑细胞外基质和增加血管的通透性,以此调节病理性血管的生成[5],影响肿瘤血管内皮细胞的增殖和迁移等过程[6],因此VEGF可以作为肺癌诊断和组织学分类的标志物。大量研究表明肺癌患者血清及癌组织中VEGF有高水平的表达,其在肺癌中的表达增加与肺癌恶性程度、易发生淋巴结转移及预后不良有关。Jin等[7]研究发现癌组织VEGF的高表达与病理分级、淋巴结转移和临床分期相关(P<0.01)。

目前国内外对EBC中VEGF检测的研究尚不多。Dalaveris等[8]检测30例肺癌患者和15例对照组的EBC和血清的VEGF水平,结果发现血清和EBC的VEGF水平具有显著的相关性(r=0.52,P=0.019)。EBC-VEGF可监测肺癌的病情进展。Gessner等[9]对 17例 NSCLC患者、15例经两个疗程化疗的NSCLC患者、稳定期和急性加重期COPD患者各15例及12例健康对照组的EBC水平进行比较,结果发现NSCLC患者EBC-VEGF水平显著高于其他各组。经过两疗程化疗并且肿瘤原发病灶缩小>25%的肺癌患者,其EBC-VEGF显著低于COPD急性加重期。以上研究表明VEGF参与了NSCLC的发生发展过程,检测EBC-VEGF的水平对肺癌诊断及预后评估具有一定价值。

本研究采用ELISA方法检测EBC及血清中的VEGF,结果显示,EBC和血清中的VEGF水平在肺癌组均高于COPD组及健康对照组,EBC和血清中VEGF水平在COPD组均高于健康对照组,说明EBC-VEGF可作为肿瘤标志物用于肺癌的辅助诊断及肺部良恶性疾病的鉴别诊断。检测VEGF的结果还显示,EBC和血浆VEGF水平随肺TNM分期呈增高趋势,Ⅳ期患者VEGF水平最高,有淋巴结转移的的肺癌患者其VEGF水平显著高于无淋巴结转移者。说明VEGF促进了肺癌生长转移,VEGF水平越高,转移的可能性越大,预后也越差。因而EBC-VEGF可作为肺癌转移监测和预后评估的指标。

综上,检测EBC中VEGF是一种方便、无创的辅助诊断NSCLC的方法,并对病情进展、转移监测及预后评估有一定提示作用。

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