高效液相色谱法测定调经种玉丸中川续断皂苷Ⅵ含量

钱 芳，张 芹

(江苏省中医院药剂科，江苏 南京 210029)

调经种玉丸由当归、川芎、续断、白芍、熟地、杜仲等中药组成，具有养血、调经种子的功能，用于月经不调、不孕不育等症。为更好地控制调经种玉丸的质量，本试验中采用高效液相色谱法测定调经种玉丸中川续断皂苷Ⅵ的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

Waters 2695型高效液相色谱仪，2998型二极管阵列检测器，EmpowerⅡ色谱工作站(美国 Waters);1/10万电子分析天平(BP-211D型，德国Sartorius);KQ-1000E型医用超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);101-1A型电热鼓风干燥箱(南通沪通制药机械设备厂);HH-4数显型恒温水浴锅(江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司)。川续断皂苷Ⅵ对照品(中国药品生物制品检定所，批号为111685-200401);调经种玉丸(江苏省中医院制剂部，批号分别为100222，100223，100224);所用中药材均购自江苏省药材公司，并由本室专家鉴定;高效液相色谱所用试剂为色谱纯，水为超纯水，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱:Hedera C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm);流动相:乙腈-水(28∶72);检测波长[1]:212nm;柱温:30℃;流速:1.0mL/min。分别吸取川续断皂苷Ⅵ对照品溶液、供试品溶液及阴性对照品溶液各20μL，注入高效液相色谱仪中，按上述条件测定，供试品溶液与对照品溶液在相同位置有较大吸收，阴性对照品溶液无干扰。见图1。

图1 高效液相色谱图

2.2 溶液制备

精密称取经五氧化二磷减压干燥器中干燥12 h的川续断皂苷Ⅵ对照品适量，加甲醇溶解制成每1 mL含川续断皂苷Ⅵ78μg的对照品溶液。称取调经种玉丸粗粉2 g，加70%甲醇50 mL回流30 min，蒸干，加水30 mL溶解，乙醚振摇提取3次(每次25 mL)，弃去乙醚液，用水饱和的正丁醇振摇提取3次(30，30，20 mL)，合并正丁醇液，用氨试液洗涤3次(每次20 mL)，正丁醇液蒸干。加流动相乙腈-水(30∶70)定容至10 mL，摇匀，微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得供试品溶液。除续断外，按处方比例称取其他各药材，按工艺制成不含续断制剂，照供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

分别精密吸取质量浓度为78μg/mL的对照品溶液2，5，10，20，40，60 μL，注入高效液相色谱仪中测定。经线性回归，得回归方程 Y=188 685X-2 642，r=1.000 0(n=6)，川续断皂苷Ⅵ进样量在0.156～4.68μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

精密度试验:取同一对照品溶液，精密吸取20μL，注入高效液相色谱仪，重复测定6次。结果峰面积的 RSD为1.90%(n=6)，表明仪器精密度良好。

重复性试验:精密称取同一个批号的样品(100224)6份，依法制备供试品溶液并测定。结果川续断皂苷Ⅵ含量的 RSD为0.86%(n=6)，表明方法重现性良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，按上述色谱条件，于0，2，4，6，8，12 h时分别进样测定。结果色谱峰面积的 RSD为1.23%(n=6)，表明供试品溶液在12 h内稳定。

加样回收试验:称取已知含量的调经种玉丸样品(100224)约1 g，精密称定，共9份，分别加入对照品，依法制备供试品溶液，精密吸取20μL，注入高效液相色谱仪，测定，计算。结果见表1。

表1 川续断皂苷Ⅵ加样回收试验结果(n=9)

2.4 样品含量测定

取3个批号的样品，每批2份，按2.2项下方法制备供试品溶液，进样测定。结果批号分别为100222，100223，100224的样品中川续断皂苷Ⅵ平均含量为0.735，0.744，0.741 mg/g。

3 讨论

2010年版《中国药典(一部)》续断中的川续断皂昔Ⅵ测定所采用的流动相为乙腈-水(30∶70)，由于调经种玉丸处方中有十多味药材，杂峰多，不能很好地分离，故将流动相比例调整为乙腈-水(28∶72)，主峰能完全分开。

供试品处理时，考察了不同浓度的甲醇作为提取溶剂及不同提取方法(回流提取、超声提取)的提取效果，以70%甲醇回流提取较佳。同时还考察了此方法的不同提取时间和不同溶剂倍量。

进行样品中川续断皂苷Ⅵ含量测定时，样品预处理用皂苷类测定常用的水饱和正丁醇液萃取，然后用氨试液洗涤，结果用高效液相色谱法测定时，样品杂质峰过多而干扰测定，后参考文献[2]方法，待测组分与其他组分能很好地分离。

本试验对调经种玉丸中的川续断皂苷Ⅵ建立了含量测定方法，具有简便、快速、准确、专属性强的特点，可作为调经种玉丸的质量控制方法。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:309.

[2]瞿发林，过 伟.舒筋活络酒质量标准的研究[J].解放军药学学报，2009，25(4):318-320.