高效液相色谱法测定小青龙颗粒中甘草酸铵含量

黄富宏 ，王 健，茅 渊，梁显扬，卢小兰

(1.江苏省扬州市第一人民医院，江苏 扬州 225000;2.江苏省扬州市食品药品检验所，江苏 扬州 225000;3.江苏省扬州市苏北人民医院，江苏 扬州 225000)

小青龙颗粒为传统的中药制剂，主要由麻黄、桂枝、白芍、干姜、细辛、炙甘草、法半夏、五味子组成。具有解表化饮、止咳平喘功效，用于风寒水饮、恶寒发热、无汗、喘咳痰稀等[1]。高效液相色谱法测定甘草酸铵含量有文献报道，但对小青龙颗粒中甘草酸铵进行含量测定尚无文献报道。笔者采用高效液相色谱法对小青龙颗粒中主要成分之一甘草酸铵进行含量测定，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent1200型液相色谱仪;Sartorius CP225D型电子分析天平;KH-500B型超声波清洗器 (昆山禾创超声仪器有限公司)。甘草酸铵对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110731-201013);甲醇(色谱纯);水(重蒸馏水);小青龙颗粒(湖北纽兰药业有限公司，批号为20091101;广东在田药业有限公司，批号为10107001;吉林罗邦药业有限公司，批号为20081202)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Alltima C18柱(150 mm×4.6 mm，5μm);流动相:水-乙腈-冰醋酸(65∶35∶2.5);流速:1.0 mL/min;柱温:室温;检测波长:254 nm。

2.2 溶液制备

精密称取甘草酸铵对照品0.019 02 g，置50 mL容量瓶中，加甲醇-磷酸(13∶7)制成每1 mL含0.380 4 mg的溶液，作为对照品溶液。取样品约2.4 g(2份)，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密量取甲醇-磷酸(13∶7)25 mL，超声处理20 min。过滤，取续滤液用微孔滤膜(0.45μm)过滤，即得供试品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验:按处方中药味的比例，配制不含甘草的群药，按其工艺制成阴性对照样品，再按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液并测定。结果在甘草酸铵对照品相同保留时间处未显色谱峰。高效液相色谱图见图1。

线性关系考察:分别精密吸取 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，7.5 mL对照品溶液，置25 mL容量瓶中，再加甲醇-磷酸(13∶7)稀释至刻度，摇匀，在上述的色谱条件下，进样2次，每次10μL。将峰面积和质量浓度进行回归处理，得回归方程为 Y=0.128 7 X+0.202 5，r=1.0(n=6)，线 性 范 围 为15.2～114.1μg/mL。

图1 高效液相色谱图

精密度试验:取同一对照品溶液，连续进样5次，测定峰面积。结果峰面积的 RSD为0.98%(n=5)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:按供试品溶液的制备方法制得供试品溶液，每隔2h进样1次，共测12h。结果的 RSD为1.0%，表明峰面积基本无变化，说明供试品溶液在12 h内稳定。

加样回收试验:取约1.2 g小青龙颗粒样品，共6份，分别加入0.053 3 g/L的对照品溶液3，5，7 mL，依法测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1 甘草酸铵加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

通过对照品溶液标准曲线计算，样品平均质量浓度为0.584 mg/g。称取小青龙颗粒约2.4 g，精密称定，置100 mL具塞锥形瓶中。精密量取甲醇-磷酸(13∶7)25 mL，称重，超声20 min。放冷，补重，过滤，取续滤液用微孔滤膜(0.45μm)过滤，作为供试品溶液。依法测定含量，结果见表2。

表2 不同厂家样品的含量测定结果

3 讨论

文献报道的甘草酸铵检测波长有238，250 nm不等[2-3]。本试验中应用紫外分光光度计测定甘草酸铵的紫外吸收光谱图，结果在254 nm处有最大吸收，故选择254 nm为检测波长。试用了甲醇-水、乙腈-磷酸、乙腈-磷酸二氢钾等多种流动相体系，结果表明，乙腈-0.017 mol/L磷酸(35∶65)最佳，各成分能得到基线分离，且保留时间适中。考察甲醇、乙醇和甲醇-磷酸(13∶7)对样品中甘草酸铵提取的影响。结果表明，甲醇-磷酸(13∶7)能够更好地提取样品中的甘草酸铵，所以采用甲醇-磷酸(13∶7)作为样品的提取溶剂。考察了超声10，20，30 min对甘草酸铵的含量影响。结果10 min提取量为20 min的90%，而提取30 min的甘草酸铵含量与提取20 min的基本相同，所以选择提取时间为20 min。

小青龙颗粒收载于2010年版《中国药典(一部)》[3]，3厂家的成分，性状，功能主治一样，成分为麻黄，桂枝、白芍、干姜、细辛、甘草、法半夏、五味子、辅料为蔗糖。不同厂家、不同批次样品之间的含量差异较大，可能与投料所用的甘草流浸膏有关。对小青龙颗粒的质量，特别是对甘草流浸膏的质量进行控制很有必要，有关工作还有待于进一步研究。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版杜，2010:505.

[2]刘 源.高效液相色谱法测定利肺片中甘草酸含量[J].中国药业，2012，1(21):27-28.

[3]张 克.HPLC法测定盖艾康胶囊中甘草酸含量[J].中医研究，2011，4(24):20.