半自动生化分析仪测定总蛋白试剂盒(双缩脲法)通用性研究

王刚林，陈海燕

(重庆医疗器械质量检验中心·重庆市医疗器械质量与安全控制工程技术研究中心，重庆 401147)

体外诊断试剂(盒)的临床应用越来越广泛，所检测出的结果已成为临床医生诊断疾病的辅助依据，有时甚至成为确诊疾病的重要依据。目前，体外诊断试剂大多归口于医疗器械管理，由于没有统一的国家标准或行业标准，没有统一的国家标准物质，质量监督管理部门难以对其产品进行质量监控。笔者从检测原理角度分析认为，采用紫外分光光度法[1]测定的临床生化类体外诊断试剂可以按产品执行统一的质量标准。为了考察分析的正确性，笔者选取常用的总蛋白试剂盒进行验证，报道如下。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

BASIC半自动生化分析仪(法国Secomam公司);KHB Biohit可调移液器(芬兰百得实验室仪器＜中国＞有限公司);HSG-ⅡC-4型恒温水浴锅(江苏金坛中大仪器厂)。总蛋白试剂盒(四川迈克科技有限责任公司，批号为1011071;中生北控生物科技股份有限公司，批号为110411;上海荣盛生物科技有限公司，批号为20110825;重庆百克生物科技有限公司，批号为20110601);70.0 g/L总蛋白标准液(四川迈克科技有限责任公司，批号为1011071;中生北控生物科技股份有限公司，批号为110411;上海荣盛生物科技有限公司，批号为20110825;重庆百克生物科技有限公司，批号为20110601);质控血清(中生北控生物科技股份有限公司，批号为022541)。

1.2 试验方法

总蛋白试剂盒(双缩脲法)由硫酸铜、碘化钾、氢氧化钠和酒石酸钾钠4种成分组成，临床主要用于测定人血清中总蛋白的浓度。在碱性溶液中，肽键与铜离子结合，生成蓝紫色化合物，在540 nm波长处的吸光度与肽键的数量呈正比关系，可以据此计算蛋白质含量[2]。采用半自动生化分析仪，以质控血清(或血清)测定不同厂家生产的总蛋白试剂盒。

2 结果

2.1 质控血清测定

采用中生北控生物科技股份有限公司生产的质控血清(质控血清总蛋白X±2 SD范围为52.6～61.6 g/L)，分别取上述4个厂家生产的总蛋白试剂盒，按其相应的使用说明书进行试验，平行测定5次，取平均值。由表1可见，4个厂家的产品测定均值均在质控血清值范围内。

表1 验证试验结果

2.2 线性关系考察

取上述4个厂家的总蛋白试剂盒，分别用与试剂盒配套的标准品按其使用说明书进行试验。取6支试管，其中1支为空白管，另5支为样品管，按说明书要求分别加入不同量的总蛋白标准液、生理盐水和双缩脲试剂，混匀，置37℃反应10 min。在540 nm波长处以空白管调零，分别测定各管的吸光度，计算出相应的 r值。结果见表1。

2.3 精密度试验

取4个厂家生产的总蛋白试剂盒，分别按其相应的使用说明书中操作方法进行操作，同时测定同一份血清标本，测定20次，计算批内精密度。结果见表1。

2.4 标准品准确度试验

以中生北控生物科技股份有限公司生产的总蛋白标准液(70.0 g/L)作为标准品，以上述另外3个厂家生产的总蛋白标准液作为样品，分别按标准品使用说明书进行操作，平行测定5次，取平均值。结果见表1。

3 讨论

本试验结果表明，采用同一质控血清测定不同厂家的总蛋白试剂盒，测定值均在质控血清值范围内，且结果比较集中、偏差不大，线性关系良好，样品的批内精密度均小于1%。以中生北控生物科技股份有限公司生产的总蛋白标准液为标准品测定的准确度结果较好，能满足体外诊断试剂不准确性的要求。

对4个厂家同一产品的试验结果表明，采用半自动生化分析仪测定不同厂家的总蛋白试剂盒，方法可行。同时，本试验也为该类产品制订统一的国家质量检测标准提供了依据。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:化学工业出版社，2005:附录ⅣA.

[2]中华人民共和国卫生部医政司.全国临床检验操作规程[M].第3版.南京:东南大学出版社，2006:337.