高效液相色谱法测定龙胆泻肝汤颗粒中龙胆苦苷含量

许 仲 ，叶胜体 ，张 妥

(1.广东省阳江市药品检验所，广东 阳江 529500; 2.广东省阳江市中医医院，广东 阳江 529500)

龙胆泻肝汤颗粒是广东省阳江市中医医院自拟处方制成的中成药制剂，具有清热解毒、泻肝经实火、清利肝胆湿热的功效，主治头晕止赤、肋痛口苦、尿赤涩痛、湿热带下等诸症。其质量标准为阳江市中医医院自拟，但其中没有含量测定项。为确保药品质量，保证用药有效，笔者为其增加了龙胆苦苷的含量测定项，该方法灵敏度高、专属性强、重现性好、结果准确。现报道如下。

1 仪器与试药

安捷伦1200型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司);AB135-S型电子分析天平(德国梅特勒公司)。龙胆苦苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110770-200510);龙胆泻肝汤颗粒(广东省阳江市中医医院，批号分别为 20090608，20090721，20090824);甲醇(分析纯、色谱纯)，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[1]

色谱柱为Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm);流动相为甲醇-水(21∶79);流速为1.0 mL/min;柱温为40℃，检测波为270 nm;进样量为10μL。理论板数按龙胆苦苷峰计算大于3 500，分离度为2.01。

2.2 溶液制备

取龙胆苦苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含40μg的溶液，即得对照品溶液。取本品，研细，精密称定约15 g，置具塞锥形瓶中，加入甲醇25 mL，密塞，称定质量，超声处理(功率250 W，频率33 kHz)20 min，冷却，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。取不含龙胆苦苷的阴性样品适量，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

阴性干扰试验:分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液，按上述色谱条件进样。结果见图1，表明龙胆泻肝汤颗粒中其他成分对龙胆苦苷的测定无干扰。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:精密称定龙胆苦苷对照品10.12 mg，置25 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀;再精密量取上述溶液配制成20.42，32.67，40.84，49.01，61.26 μg/mL 的溶液。分别取上述溶液10μL注入色谱仪，记录色谱图，以龙胆苦苷进样量(μg)为横坐标(X)、峰面积为纵坐标(Y)进行线性回归，得回归方程 Y=12.548X+25.109，r=0.996 9(n=5)。结果表明，龙胆苦苷进样量在20.42～61.26μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:精密吸取对照品溶液10μL(质量浓度为40.1μg/mL)，分别进样5次。结果龙胆苦苷峰面积平均值为525.6，RSD为0.7%(n=5)，表明该方法精密度良好。

重复性试验:取本品内容物(批号为20090608)各5份，分别精密称定，依溶液制备方法制成5份供试品溶液，进样10μL测定。龙胆苦苷平均含量为41μg/mL，RSD为1.2%(n=5)，表明该方法重复性良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，于开机 2 h后的 0，2，4，6，8 h分别进样10μL，测定峰面积。结果的 RSD为0.9%(n=5)，表明供试品溶液在8 h内稳定性良好。

加样回收试验:取同一批已知含量的样品(批号为20090608，含龙胆苦苷6.82 mg/100 g)，分别加入一定量的龙胆苦苷对照品，按供试品溶液制备方法制备溶液，按拟订的色谱条件测定，计算回收率。结果见表1。

2.4 样品含量测定

取3批样品，按供试品溶液制备方法和色谱条件进行测定。结果批号为20090608，20090721，20090824的每100 g样品含龙胆苦苷分别为 6.82，6.86，6.22 mg，平均为 6.63 mg。故拟订龙胆泻肝汤颗粒含龙胆以龙胆苦苷计，每100 g不得少于6.63 mg。

表1 龙胆苦苷加样回收试验

3 讨论

用不同比例的甲醇-水作流动相进行试验，结果表明，以甲醇-水(21∶79)为流动相时龙胆苦苷的峰形好，保留时间适中，柱效高，与其他干扰峰能很好地分离。总的来说，该方法灵敏度高、专属性强、重现性好。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社，2005:17.