高效液相色谱法测定小儿至宝丸中橙皮苷含量

马 仑，韩慧琴

(1.河北省张家口市第四医院，河北 张家口 075061; 2.河北省张家口市药品检验所，河北 张家口 075061)

小儿至宝丸是2005年版《中国药典(一部)》[1]收载品种，处方由陈皮、紫苏叶、广藿香、薄荷等25味药组成，具有疏风镇惊、化痰导滞的功能，用于小儿风寒感冒、停食停乳、发热鼻塞、咳嗽痰多、呕吐泄泻的治疗。方中陈皮的主要成分橙皮苷具有较强的抗炎作用，还能抑制胃肠平滑肌收缩，缓解胃肠积滞[2]。为更好地控制小儿至宝丸的质量，笔者采用高效液相色谱法，对橙皮苷的含量测定方法进行了研究，现报道如下。

1 仪器与试药

Waters 2695-2996型高效液相色谱仪(美国);Shimadzu UV-2450型紫外-可见分光光度计(日本);Mettler AE 163型电子天平(瑞士)。橙皮苷对照品(含量测定用，中国药品生物制品检定所，批号为110721-200512);小儿至宝丸(北京同仁堂股份有限 公 司 ，批 号 分 别 为 8015172，8015167，8015002，8015165，7015441);阴性样品自制;乙腈和甲醇为色谱纯，水为去离子水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Capcell pak-C18柱(150 mm×4.6 mm，5μm);流动相:甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液(12∶14∶74);流速:1.0 mL/min;检测波长:284 nm;柱温:25℃;进样量:10μL。

2.2 溶液制备

取橙皮苷对照品0.011 31 g，置50 mL容量瓶中，加甲醇适量，超声使溶解，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀。精密量取5 mL，置50 mL容量瓶用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。取小儿至宝丸适量，剪碎，混匀，取约1 g，精密称定，置100 mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定质量，加热回流30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失质量，摇匀，滤过，取续滤液过0.45μm微孔滤膜，即得供试品溶液。按处方比例制备缺陈皮药材的阴性样品，按供试品溶液的制备方法操作，即得阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验:分别吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液各10μL注入液相色谱仪，记录色谱图。结果见图1。可见，对照品溶液有较好峰形，供试品溶液中的橙皮苷峰能与其他杂质峰获得较好分离，分离度大于1.5。阴性对照品溶液在与对照品溶液峰相应的保留时间未出现杂质峰，无干扰，表明方法专属性强。

线性关系考察:分别精密吸取对照品溶液(质量浓度为0.226 2 g/L)10，5，2μL 和稀溶液(质量浓度为0.022 62 g/L)10，5，1 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录色谱图，以橙皮苷峰面积积分值对橙皮苷对照品进样量(μg)进行线性回归，得回归方程 Y=1 784 168X+7 555.5，r=0.999 98(n=6)。结果表明，橙皮苷进样量在0.02～2.2μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

精密度试验:取同一对照品溶液，连续进样5次。结果橙皮苷峰面积的 RSD为0.98%(n=5)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，照上述方法和色谱条件，分别在 0，1， 2，3，4，10，15，20，24 h 时进样测定。结果橙皮苷峰面积的 RSD为1.3%(n=9)，表明供试品溶液在24 h内稳定。

重复性试验:取同一批样品(批号为8015172)适量，研细，混匀，取0.8，1.0，1.2 g各3份，精密称定，依法制成供试品溶液，按上述色谱条件测定。结果样品的平均含量为1.243 mg/g，RSD为0.68%(n=9)。

加样回收试验:精密称取已知含量的样品(橙皮苷含量为1.243 mg/g)0.5 g，每2份为1组，分别用质量浓度为0.007 63，0.012 71，0.013 81 g/L的橙皮苷对照品甲醇溶液代替甲醇，按2.2项下的方法操作，制成供试品溶液，按拟订的色谱条件测定，计算回收率。结果见表1。

图1 高效液相色谱图

表1 加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

取5批小儿至宝丸，按2.2项下的方法操作，制成供试品溶液，按拟订的色谱条件测定，计算样品含量，结果在1.24～1.97 mg/g之间。

2.5 耐用性试验

取同一批样品(批号为8015002)适量，研细，混匀，精密称定适量，按2.2项下方法操作，制成供试品溶液，选用不同厂家的色谱柱[Capcell PakC18柱(150 mm×4.6 mm，5μm)Waters SymmetryshieldTMRP18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm)]按上述色谱条件进行测定。结果的RSD为0.4%，表明该方法耐用性好。

3 讨论

本试验在参考文献[3-6]的基础上对色谱条件进行适当调整，选用甲醇-乙腈 -0.1%磷酸溶液(12∶14∶74)为流动相，结果峰纯度、峰形、分离度均比较好。

橙皮苷为黄酮类化合物，分子中含有酚羟基，显酸性，为了使峰形对称，不出现拖尾现象，流动相中加入了小浓度磷酸，结果表明峰形对称、分离度高。

本方法简便、准确、灵敏、重现性好，可用于小儿至宝丸的质量控制。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社，2005:132.

[2]张冬松，高慧媛，吴立军.橙皮苷的药理活性研究进展[J].中国现代中药，2006，8(7):25-26.

[4]张进祥，段吉平.HPLC法测定当飞利肝胶囊中水飞蓟宾的含量[J].中国实验方剂学杂志，2009，15(9):6.

[5]康四和，周 锐，聂 晶.HPLC测定小儿消积止咳口服液中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的含量[J].中成药，2010，32(12):2 088-2 090.

[6]韩 海.反相液相色谱法测定胃肠康颗粒剂中橙皮苷的含量[J].时珍国医国药，2006，17(3):367-368.