车前草几种提取物的抗菌活性研究

陈红云，申元英

（大理学院公共卫生学院，云南大理 671000）

车前草几种提取物的抗菌活性研究

陈红云，申元英*

（大理学院公共卫生学院，云南大理 671000）

目的：比较车前草不同提取物的抗菌活性。方法：采用分光光度比浊法，用车前草的8种溶剂室温提取物对3种细菌进行抗菌活性研究，8种溶剂分别是自来水、超纯水、无水乙醇、甲醇、乙醚、石油醚、三氯甲烷和苯。结果：车前草提取物C、D、E、G、H均有抗菌活性（P＜0.05），提取物A、B没有抗菌活性（P＞0.05）。结论：车前草的不同有机溶剂提取物均有良好的体外抗菌活性。

车前草；抗菌活性；最小抑菌浓度

上个世纪以来，随着抗生素的发现和工业化生产，使细菌引起的传染病得到了极大的控制。但是抗生素的滥用状况也不容乐观，由此产生了大批的耐药菌，致使半合成和改良抗生素的耐药周期越来越短，给临床治疗带来了困难〔1〕。因此，尽快研究和开发新的天然来源的或具有新作用机制的抗生素成为世界各国药物学家、微生物学家研究的热点。车前草（Plantago asiatica L.）属车前科（Plantaginaceae）植物，在民间多用干燥全草入药，始载于《神农本草经》，列为上品。具有清热利尿、祛痰、凉血、解毒等功效，用于水肿尿少，热淋涩痛，暑湿泻痢，痰热咳嗽，吐血衄血，痛肿疮毒等诸症〔2〕。本研究在杨亚军等〔3-5〕研究报道的基础上，采用车前草多个溶剂的8种提取物对3种细菌进行抗菌活性研究，从而比较车前草不同提取物的抗菌活性，为细菌性感染的治疗及车前草的开发应用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 药材 车前草于2011年7月采集于云南省大理市苍山脚下，海拔高度为1 981 m的将军洞，样品经有关专家鉴定为车前草植物〔6〕。草药经洗净，除去泥沙及杂草，于室内自然阴干得干燥植株全草，用摇摆式高速中药粉碎机粉碎成长短不规则状粗粉（过40目筛），储藏于4℃冰箱，备用。

1.2 仪器 隔水式恒温培养箱（上海一恒科技有限公司），高压蒸汽灭菌器（MLS-3780，三洋电机株式会社），双人单面超净工作台（AIRTECH，苏净集团安泰公司制造），无菌瓶（高温121±0.5℃，高压0.2± 0.05 Mpa灭菌的试剂瓶）。

1.3 试剂 MH琼脂（生化试剂杭州天和微生物试剂有限公司，批号：110908），MH肉汤（生化试剂杭州天和微生物试剂有限公司，批号：110806）。

1.4 供试菌株 供试菌株为金黄色葡萄球菌（ATCC 25923）、大肠杆菌（ATCC 25922）、铜绿假单胞菌（ATCC 27853）由大理学院基础医学院病原生物学综合实验室提供。

2 实验方法

2.1 提取物制备 取8份车前草粗粉各50 g，分别加入自来水、超纯水、无水乙醇、甲醇、乙醚、石油醚、三氯甲烷和苯200 mL，20～25℃浸润提取，每次24 h，共提取4次，合并提取液，减压干燥的干粉，依次编号为提取物A、B、C、D、E、F、G、H号提取物。储存于无菌瓶中4℃以下保存备用〔7-9〕。

2.2 供试菌株活化 将供试菌株菌种于MH琼脂平板上，置37℃恒温培养箱培养24 h活化，待用。

2.3 菌液制备 挑取活化好的琼脂平板上形态相同的菌落，用灭菌生理盐水校正菌液浓度，使其相当于0.5麦氏标准比浊管，再用MH液体培养基稀释后，备用，稀释后的菌液在15 min内接种完〔10-11〕。

2.4 最低抑菌浓度（MIC）测定 取无菌小试管15支为一组，共30组。其中第13、14、15管分别为“原液对照管”、“MH肉汤对照管”、“供试菌生长对照管”。每支试管加入肉汤2 mL。配制8种不同提取物原液浓度为250 mg/mL，用移液器吸取药液1 mL放入第1管内，混匀后吸取1 mL放入第2管，依次逐管进行稀释到第12管，最后第12管混匀后取出1 mL弃之。除第13、14管外，每支管加入菌液1 mL，置37℃恒温培养箱内，培养24 h后观察结果。在对照符合要求的条件下，凡无肉眼可见的细菌生长的药物最低浓度即为药物对该供试菌的MIC〔12-13〕。

2.5 数据统计方法 数据资料采用统计学软件Epidata 3.1版录入，检验数据资料的有效性，SPSS 16.01进行统计分析，统计数值P＜0.05，有统计学意义。

3 结果

车前草各提取物在各管中的浓度见表1，各提取物对供试菌的作用见表2。

表1 车前草各提取物在各管中的浓度（mg/mL）

表2 车前草各提取物对供试菌的MIC（mg/mL）

由表2结果显示：车前草各种提取物对供试菌的抑制作用为，车前草提取物C、D、E、G、H均有抗菌活性（P＜0.05），提取物A、B没有抗菌活性（P＞0.05），其中提取物F对铜绿假单胞菌没有抗菌活性（P＞0.05）。

4 讨论与结论

本次实验采用不同的溶剂对车前草的干品进行有效成份的提取，结果发现，车前草的自来水和超纯水提取物无抗菌活性，而车前草的不同有机溶剂提取物均有良好的体外抗菌活性。此次试验结果与孔阳等〔14〕研究者采用滤纸片扩散法对车前草乙醇提取物的抗菌实验结果一致。

通过车前草不同的有机溶剂提取物对3种菌株的MIC值大小不同，并且对同一菌株也有大小不同的MIC。说明不同有机溶剂提取的车前草中提取物是由不同种的化学成分组成，它们对不同菌株的抗菌机制有所不同。其抗菌结果差异和作用机制有待进一步研究。本次实验为体外抗菌实验，至于在体内能否有抗菌效果，还需要通过动物模型进行体内实验研究。

志谢 大理学院基础医学院病原微生物学综合实验室的王涛老师，以及公共卫生学院的张文、林丽佳同学在研究中给予帮助和支持！

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〔5〕张彤，柳淑玉，柳晨，等.车前草的药理作用及临床应用进展〔J〕.时珍国医国药，2005，16（1）：67-67.

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〔12〕陈奇，卞如濂，陈修.中药药理研究方法学〔M〕.北京：人民卫生出版社，2006：274-277.

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Study on the Antibacterial Activity of Plantago asiatic L.

CHEN Hongyun,SHEN Yuanying*
（College of Public Health，Dali University,Dali，Yunnan,671000，China）

Objective:To compare the antibacterial ability of extracts that was extracted by different dissolvent from plantain. Methods:Tap-water,ultra-pure water,ethanol,methanol,ether,petroleum ether,chloroform and benzene were used to extract the antibacterial ingredients of plantain at room temperature;three kind bacteria were medium containing different extracts,and Spectrophotometry assays were performed to measure the antibacterial ability of extracts.Results:The antibacterial ability of extracts according to C,D,E,G,H（P＜0.05）priority was ingredient extracted.Ingredients extracted by Tap-water,ultra-pure water display non-antibacterial ability（P＞0.05）.Conclusion:Organic solvents were more effective as dissolvent to extract antibacterial ingredients of plantain.

Plantago asiatica L.antimicrobial activity;MIC

Q949.36［文献标志码］A［文章编号］1672-2345（2012）03-0021-03

2011-12-20

2012-01-11

陈红云，硕士研究生，实验师，主要从事分子流行病学的研究.

*通信作者：申元英，教授.

（责任编辑 毛本勇）