超高效液相色谱法检测饮料中纳他霉素的含量

张 慧，吴 颖，*，朱 蕾，路 勇，张卫民，姜 洁

(1.北京市产品质量监督检验所，北京100026; 2.北京市食品安全监控中心，北京100041)

超高效液相色谱法检测饮料中纳他霉素的含量

张 慧1，吴 颖1，*，朱 蕾1，路 勇2，张卫民2，姜 洁2

(1.北京市产品质量监督检验所，北京100026; 2.北京市食品安全监控中心，北京100041)

建立用超高效液相色谱测定饮料中纳他霉素含量的方法。用甲醇溶液提取样品中的纳他霉素，UPLC分析，外标法定量。采用BEH Shield RP18色谱柱，检测波长为303nm，以乙酸铵和乙腈为流动相，进行等度洗脱。该方法操作简单快捷，方法准确度和稳定性好。

超高效液相色谱，纳他霉素，检测

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

纳他霉素标准品 Dr.Ehrenstorfer公司;乙腈、乙酸铵 色谱级，Dikma公司;实验用水 超纯水。

Waters ACQULITY UPLC超高效液相色谱仪配有光电二极管矩阵(PDA)检测器;高速冷冻离心机 德国SIGMA公司;旋涡混合器;色谱柱ACQULITY UPLC BEH Shield RP18(2.1mm×50mm，1.7μm)。

1.2 实验方法

1.2.1 样品前处理 称取饮料类样品5g(精确至0.01g)，用甲醇定容至25mL，超声10min，10000r/min冷冻离心10min，取上清液过0.25μm滤膜，待仪器进样使用。

1.2.2 色谱分析条件 采用BEH Shield RP18色谱柱，分别选取流动相甲醇－水、乙腈－水、乙腈－5mmol乙酸铵、乙腈－10mmol乙酸铵、乙腈－20mmol乙酸铵，同时对不同流速、不同控制温度进行实验。

1.2.3 标准溶液配制、线性范围及最低检出限 精密称取1mg(精确到0.1mg)纳他霉素标准物质，用甲醇定容至10mL，得100mg/L标准品储备液，置于4℃冰箱中密封保存。准确量取储备液，用甲醇∶水=1∶1稀释定容，配制纳他霉素的浓度梯度为0.1、0.5、1、2、5mg/L的标准溶液。并测定出最低检出限。

1.2.4 样品回收率实验 选用在空白样品中添加那他霉素的浓度为0.25、1.0mg/kg，每个加标水平重复6次，测定果汁类产品的回收率。

表1 精密度实验Table 1 Precision experiment

2 结果与讨论

2.1 样品前处理

饮料类样品采用甲醇提取，由于纳他霉素在甲醇中溶解度高，可以保证较好的提取效果。

2.2 超高效液相色谱条件的选择

经过实验后，流动相采用乙腈－20mmol乙酸铵。流速分别选取0.25、0.3、0.4mL/min，实验发现，流速的影响很小，最后确定0.3mL/min的流速，这样柱压不会过高，同时也避免因流速过低而产生的扩散现象。

选取柱温分别为25、30、35、40℃的条件下，随着温度的升高，保留时间不断前移，最后选择35℃的柱温，在此温度下，纳他霉素色谱峰保留时间稳定，不会造成因保留时间漂移而导致连续进样中产生一系列的无效数据。

综上所述，超高效液相色谱操作条件确定为:流速:0.3mL/min;柱温:35℃;进样体积:10μL;流动相: A为20mmol/L乙酸铵溶液，B为乙腈;流动相比例为A∶B=75∶25等度洗脱;检测波长:303nm。纳他霉素标准物质色谱图如图1所示。

图1 纳他霉素标准物质液相色谱图Fig.1 UPLC chromatogram of natamycin standard

2.3 标准曲线绘制、线性范围及最低检出限

纳他霉素的浓度为0.1、0.5、1、2、5mg/L，以峰面积分值(Y)为纵坐标，纳他霉素溶液浓度(X)为横坐标绘制标准曲线，结果纳他霉素标准曲线为Y=2.66 ×105X－2.39×104(R2=0.999)，线性范围为0.25～5mg/L，标准曲线图如图2所示。

称取一定量果汁溶液，加入纳他霉素标准溶液配制成浓度含量为0.33、0.95、5.00mg/kg三个不同浓度样品溶液，按照色谱条件，水平重复8次，以S/N≥10计的测定最低检出限可以达到0.25mg/kg和相对标准偏差为0.1%～0.4%;实验结果如表1所示。

图2 标准曲线图Fig.2 Standard curve

2.4 样品回收率实验

选用在空白样品中添加那他霉素的浓度为0.25、1.0mg/kg，每个加标水平重复6次，测定果汁类产品的平均回收率和标准偏差，结果如表2所示，样品加标谱图见图3。

表2 回收率实验(n=6)Table 2 Recovery rate experiment(n=6)

图3 样品加标液相色谱图Fig.3 UPLC chromatogram of the simple adding standard

3 结论

本研究建立了超高效液相检测果汁类样品中纳他霉素含量的方法，实验结果表明，该方法操作简单快捷，便于实验室应用，准确度和稳定性好。

［1］梁琪.绿色食品用添加剂与禁用添加剂［M］.北京:化学工业出版社，2005:15－18.

［2］刘树立，王春艳，邹忠义.纳他霉素的研究现状及其在肉类工业中的应用［J］.肉类工业，2007(11):35－38.

［3］FletourisD J，Botsoglou N A，Mantis A J.Rapid spectrophotometric method for analyzing natamycin in cheese and cheese rind［J］.Journal of AOAC International，1995，78(4):1024－1029.

［4］蔡秀云，王普，杨仲毅.纳他霉素HPLC检测波长的优化［J］.中国抗生素杂志，2008，33(12):765－766.

［5］刘亚风，刘朝晖，杨冀州.固相萃取－液相色谱法检测肉制品中纳他霉素残留量［J］.肉品卫生，2004(6):12－13.

［6］周莉莉，祝建华，张卉，等.乳制品中那他霉素的超高效液相色谱－串联质谱法快速测定［J］.分析测试学报，2010，29 (1):77－79.

［7］张慧，吴颖，路勇，等.超高效液相色谱－串联质谱法测定苹果中的赤霉素、脱落酸、甲萘威、多效唑和烯效唑残的残留量［J］.食品工业科技，2010(10):383－385.

Determination of natamycin in various drinks by ultra performance liquid chromatography

ZHANG Hui1，WU Ying1，*，ZHU Lei1，LU Yong2，ZHANG Wei－min2，JIANG Jie2
(1.Beijing Products Quality Supervision and Inspection Institute，Beijing 100026，China; 2.Beijing Municipal Center for Food Safety Monitoring，Beijing 100041，China)

A method for the determination of natamycin in various drink was established by ultra performance liquid chromatography.The sample was extracted with methanol as extraction solvents.The analyte was determined by UPLC and quantified by the external standard curve.The separation was performed on a BEH Shield RP18 column by isocratic elution with a system of water(containing 20mmol/L ammonium acetate buffer)－acetonitrile as mobile phase.The method was simple，accurate and suitable for the identification and quantification.

ultra performance liquid chromatography;natamycin;determination

TS207.3

A

1002－0306(2012)08－0086－03

纳他霉素(natamycin)又称作游霉素、匹马菌素、匹马利星，它是一种多烯大环内酯类抗真菌剂，其抗菌机理是与细胞膜上的甾醇化合物反应，破坏微生物细胞膜的架构或改变细胞膜的渗透性，使微生物体内的酶类和代谢产物溢出细胞外，导致微生物正常的生理平衡被破坏而失活［1］。纳他霉素对大部分霉菌、酵母菌和真菌都有高度抑制作用，此外，由于纳他霉素是白色、无气味、无味道的粉末状，对食品的口感和风味没有影响，常作为防腐剂使用，应用于各类饮料中。目前报道的关于纳他霉素的检测方法有生物检测法［2］、紫外分光光度法［3］、高效液相色谱法［4－5］、超高效液相色谱－串联质谱［6］。目前应用最多的是液相色谱法，生物检测法和紫外分光光度法不能排除基质干扰，难以精确定量，应用范围窄。超高效液相色谱作为液相色谱法的一种，具有超高分离度、超高速度、高灵敏度等特点［7］，用于纳他霉素的检测研究较少，此方法的开发可大大减少样品分析时间。

2011－08－17 *通讯联系人

张慧(1981－)，女，助工，研究方向:分析检测。