丹香冠心注射液的细菌内毒素检查法的建立及探讨

李秀珍，刘风琴，吕光宇，李 文

(德州市药品检验所，山东 德州253000)

丹香冠心注射液为丹参、降香中药提取液的复方制剂，具有活血化瘀、理气开窍的功用。用于心绞痛及心肌梗死等疾病的治疗。已经广泛应用于临床。我国现行药品标准对这种复方针剂药品的热原检查尚无明确要求［1］。但在临床使用中时有患者出现各种热原反应，为了控制药品质量，确保用药安全，我们通过试验，建立和探讨以细菌内毒素法检查丹香冠心注射液的可行性。现报告如下。

1 材料

1.1 仪器 试管恒温仪(湛江安度斯生物有限公司);漩涡混合器(北京北德科学器材有限公司)。试验中其他除使用无热原吸头外，所用玻璃器皿经250℃烘烤1 h以上。

1.2 试剂与试药 丹香冠心注射液(上海中西制药有限公司，批号:0912052，1005050，1011021，规格:2 mL);鲎试剂TAL(批号:1105231，λ =0.25 EU·mL－1，0.1 mL/支，湛江安度斯生物有限公司)，细菌内毒素工作标准品(批号:1108040，10 EU/支，湛江安度斯生物有限公司)，细菌内毒素检查用水(BET水)(批号:1105160，5 mL/支，湛江安度斯生物有限公司)。

2 方法与结果

2.1 鲎试剂灵敏度复核试验 按照《中国药典》2010版(二部)附录细菌内毒素灵敏度复核项下进行试验［1］，结果所用鲎试剂灵敏度均在0.5～2.0 λ范围内，符合要求。

2.2 本品最大有效稀释倍数(MVD)的计算

2.2.1 细菌内毒素限值(L)的确定 我国静脉用药细菌内毒素致热阈值K=5.0 EU·mL－1，M为人每公斤体重每小时最大剂量，丹香冠心注射液最大剂量16 mL，中国人均体重按60 kg计算，根据公式 L=K/M=5/(16/60)=18.75 EU·mL－1。

2.2.2 MVD 值的计算 MVD=CL/λ，C=1.0 mL·mL－1对应于灵敏度 0.5，0.25，0.125，0.062 5 EU·mL－1的鲎试剂，最大有效稀释倍数(MVD)分别为 37.5、75、150、300 倍。

2.3 干扰试验

2.3.1 干扰预试验 取供试品适量，加BET水分别稀释成18、37.5、75、150、300 倍稀释液(为了更加科学严谨的分析预试验结果，加入18倍浓度)，记为NPC液，用上述稀释液制备含有2 λ浓度细菌内毒素的样品溶液，记为PPC液，使用0.25 EU·mL－1的TAL试剂，分别与NPC液和PPC液反应，每个浓度重复2管，同时使用BET水制备阴性对照管(NC)和阳性对照管(PC)，结果见表1。

表1 供试品干扰预试验结果

由表1可知，供试品存在干扰，为抑制作用，经75倍稀释后可消除干扰。

2.3.2 干扰试验 取3批样品用BET水稀释至75倍，再以该稀释液和 BET 水分别制备 2.0 λ、1.0 λ、0.5 λ、0.25 λ 4 个浓度的细菌内毒素溶液，每个浓度平行做4管，同时各做2管阴性对照(NC)［2］，结果见表 2。

表2 供试品干扰试验结果

Es=lg－1(Xs/4)，Et=lg－1(＞Xt/4)，由表2可计算出 Es在0.5 ～2.0 λ 范围内，且 Et在 0.5 ～2.0 Es之间，表明用细菌内毒素检查法检查丹香冠心注射液中的热原是可行的。

取本品，用BET水至少稀释75倍后，依法检查(《中国药典》2010年版二部，附录ⅪE)，本品每1 mL中含内毒素的量应小于18.75 EU。

3 讨论

丹香冠心注射液的细菌内毒素检查中L值的计算方法对结果有直接影响，本文按照2010年版药典的要求［2］，M值采用人用每公斤体重每小时的最大供试品剂量，L=18.75 EU·mL－1，科学合理。试验结果表明，丹香冠心注射液稀释75倍后可用灵敏度为0.25 EU·mL－1的鲎试剂进行内毒素检查，重现性好，结果准确可靠。

［1］国家药典委员会.国家药品中药标准(内科心系分册)［S］.北京:中华人民共和国卫生部，2002:358.

［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版(二部)［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:附录99－102.