比浊法定量检测血清胃幽门螺杆菌血清抗体的临床意义

彭 燕 刘志伟

广东省深圳市西乡人民医院检验科，广东深圳 518102

目前HP感染诊断常规检测方法有快速尿素酶试验、13C或14C尿素呼气试验、粪便HP抗原检测、病理学染色检查（如Warrhin-Starry银染、免疫组化染色等）、血清和分泌物（唾液、尿液等）抗体检测和聚合酶链反应等，近年来，应用免疫学方法诊断渐成为研究热点。免疫透射比浊法是利用抗原和抗体的特异性结合形成复合物，通过测定复合物形成量的多少对抗原或抗体进行定量的方法，免疫透射比浊法可以通过仪器的自动化分析得到相应结果，从而克服了人为误差。本文应用比浊法和胶体金法检测在我院体检的300名患者的血清幽门螺杆菌抗体，并对比浊法定量检测的测定值>60 AU/mL的32位体检患者进行HP的分离培养鉴定。结果报道如下：

1 材料与方法

1.1 一般材料

1.1.1 标本来源 2011年08月～2011年10月来我院300名体检者，其中，男180例，年龄22～53岁；女120例，年龄23～57岁。

1.1.2 检测试剂 ①定性试剂：幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒（胶体金法）由北京康美天鸿生物科技有限公司提供。②定量试剂：幽门螺杆菌快速测定试剂盒（比浊法）由深圳亚辉龙生物科技有限公司提供，并配有标准品，所含HP抗体浓度是40 AU/mL；高值质控物和低值质控物，所含HP抗体浓度分别是30 AU/mL和10 AU/mL；结果的判定：样本值<12 AU/mL为阴性；12 AU/mL≤ 样本值 ≤ 15 AU/mL为可疑；样本值>15 AU/mL为阳性；样本值>60 AU/mL，提示幽门螺杆菌现症感染。③HP的分离培养鉴定：在胃窦部距幽门2～3 cm处胃体小弯处分别钳取黏膜组织，置无菌生理盐水中4℃保存，在4 h内接种SKirrow S选择性培养基中，置厌氧罐内，缓慢注入混合气体（5%O2、10%CO2、85%N2），37℃培养连续5 d观察结果。HP的鉴定依据主要包括：革兰染色阴性，外观呈S或弧形，生化反应结果为尿素酶试验阳性、触酶试验阳性和氧化酶试验阳性；标准菌株：幽门螺杆菌NCTC11637（CagA阳性）作为质控菌株

1.1.3 仪器 日立7170S全自动生化检测仪，每天检测前均经过校准，仪器性能稳定。

1.2 方法

按常规方法采取被检测者静脉血3～5 mL，分离血清，用日立全自动生化检测仪严格按照幽门螺杆菌快速测定试剂盒（比浊法）说明书操作进行HP-Ab测定试验，同时用胶体金试纸板条进行HP-Ab测定。对比这两种检测方法的结果的判定符合率。对比浊定量检测的测定值>60 AU/mL的32位体检患者作为鉴定组；另随机选择比浊定量检测的测定值介于“15～60 AU/mL”的30位体检患者作为对照组，分别进行HP的分离培养鉴定。

1.3 统计学方法

研究资料用SPSS 13.0进行统计分析，计量资料数据以均数±标准差（±s）表示，比较采用t检验，计数资料采用百分率表示，组间对比采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 比浊法和胶体金法检测结果比较

用比浊法和胶体金法分别检测这300份体检标本HPAb，结果见表 1。

2.2 HP分离培养鉴定结果

对用比浊法定量测定值>60 AU/mL的32位体检患者的鉴定组和比浊定量检测的测定值介于“15～60 AU/mL”的30位体检患者的对照组分别进行HP的分离培养鉴定，结果见表2。鉴定组的HP分离培养鉴定的阳性例数、阳性率 （30例，96.75%）与对照组（2例，6.67%）比较，差异有高度统计学意义（P<0.01）。

表1 300份标本比浊法定量测定HP-Ab的结果

表2 鉴定组和对照组的HP分离培养鉴定结果

3 讨论

胃幽门螺杆菌（helicobacter pylori，HP）是慢性胃炎、消化性溃疡的重要致病因素，并与胃癌的发生有密切关系[1]，另外HP感染在心脑血管疾病、免疫性疾病、营养代谢性疾病和皮肤病等的发病过程中也有一定的作用[2]。因此，根除Hp对治疗和预防上述疾病有着重大意义。由本资料可知：比浊法定量检测HP的阳性率为47.33%。与由2001～2004年中华医学会全国HP分会进行的一项涉及全国20个省市的自然人群HP流行病学调查显示的我国HP感染率为40%～90%，平均59%[3]相符。所以必须高度重视，有慢性病史的患者应做HP检测，以及时对症治疗防患于未然。

比浊法定量检测HP抗体，是将幽门螺旋杆菌抗原吸附于乳胶粒颗粒上，通过孵育使稀释的人血清中的特异性抗体与抗原结合，经孵育后，产生的吸光度变化量与检测样本中的幽门螺旋杆菌特异性抗体浓度成正比。当样品值介于“12 AU/mL≤样本值≤15 AU/mL”判断为可疑，即弱阳性。而胶体金技术定性检测幽门螺杆菌抗体检测是利用人血清、血浆或全血中抗胃幽门螺旋杆菌抗体，检测时，加入的样品首先与包被抗原的胶体金颗粒混匀，并因毛细管作用混合液将沿膜向检测区移动。当患者样品中含有胃幽门螺旋杆菌特异性抗体时，即与检测线（T线）上的抗原形成“抗原-抗体-抗原”胶体金颗粒复合物，并显示为红线，并以红线显色的强弱判断为阳性、弱阳性和阴性。由本资料表1可知：胶体金法定性测定HP感染的阳性和阴性率与比浊法测定比较无明显的差异性（P>0.05），而胶体金法定性测定HP感染的弱阳性率明显低于比浊法定量测定HP的弱阳性率，差异有统计学意义（P<0.05），这是因为在胶体金定性检测HP感染时，常因操作者的判断力误将弱阳性判断为阴性，或者将弱阳性判断为阳性率较低。而比浊法定量检测HP抗体时，是应用于全自动的生化仪器，可以排除人为的干扰因素，因此比浊法定量检测的弱阳性率明显高于胶体金法检测。

机体感染HP经过有效的药物治疗后，即使成功地根除了HP，血清HP抗体仍然需要6个月以上的时间才能消失[4]。所以，单纯的定性检测HP抗体并不能确诊是不是HP现症感染，而比浊法定量检测HP抗体时，当样本测定值>60 AU/mL，提示幽门螺杆菌现症感染，由本研究资料表2可知：对用比浊法定量测定值>60 AU/mL的32位体检患者进行Hp的分离培养鉴定，其培养阳性率为93.75%，而对照组30位体检患者的HP培养阳性率为6.67%，两者差异有高度统计学意义（P<0.01）。虽然诊断HP感染的“金标准”是病原学检查，即HP培养成菌落后用各种鉴定方法进行鉴定，其特异性可达100%[5]。但由于HP的培养要求高，易污染，给分离鉴定造成困难，而且HP培养时间长，不利于快速诊断。因此，比浊法定量检测可以提示HP现症感染，有利于HP感染的快速诊断，并及时对症用药治疗，控制HP的感染和减少HP对机体的伤害。

综合本研究资料，作者认为：比浊法定量检测血清胃幽门螺杆菌抗体具有敏感性高、特异高、简便、快速、可重复性好的特点，而且当测定值>60 AU/mL时，可以高度提示患者机体处于现症的HP感染，可以及时对症治疗，减少HP对机体造成的伤害。

[1]李岩.消化性溃疡的药物治疗进展[J].中国实用内科杂志，2007，27（1）：24-25.

[2]高文，胡伏莲.幽门螺杆菌感染与胃肠道外疾病[J].中国医刊，2007，42（2）：22-27.

[3]高文，胡伏莲.中华医学会第4次全国幽门螺杆菌学术会议报道[J].中华医学信息导报，2005，20：9.

[4]王光尚.幽门杆菌感染诊断和治疗研究进展[J].内科，2011，6（2）：160-163.

[5]Jaup BH，Stenquist B，Brandberg A.Helicobacter pylori culture from a positive，liquid-based urease test for routine clinical use：a cost-effective approach[J].Helicobacter，2000，5：22-23.