不同炮制方法炮制的何首乌的质量标准探讨

李卫先 张 琦 王国仁 林雪兰 彭玉婷

湖南中医药高等专科学校，湖南株洲 412012

何首乌为蓼科植物何首乌的干燥块根[1]，具有降血脂、抗动脉硬化、促智、抗衰老、保肝、增强免疫功能等作用。何首乌多以炙首乌入药，何首乌的炮制，历代多采用蒸法和煮法及九蒸九晒等，以黑豆为辅料炮制，成分主要有卵磷脂、蒽醌衍生物、二苯乙烯苷类化合物、淀粉、脂肪、矿物质、糖类等成分。二苯乙烯苷具有降低胆固醇和保肝作用；卵磷脂能促进血液细胞的生长发育，为其补肝肾、益精血的主要成分；总糖及还原糖具有滋补作用；结合蒽醌衍生物可促进肠管的蠕动以通便，游离蒽醌衍生物具有补益作用，能抑制肠道对胆固醇的再吸收。中药炮生为熟引起的药性改变与其内在物质基础的变化有关，以往不少何首乌炮制的研究报道大多用单一成分为指标，单纯一种成分的变化并不能全面解释整个单味中药饮片功效的改变。为说明炮制引起化学成分的变化，本文全面考察了不同炮制方法制得的何首乌炮制品中游离蒽酯、结合蒽醌、总糖、卵磷脂以及二苯乙烯苷类成分的含量及其变化规律并对何首乌各种炮制品进行炮制效果的比较，探讨现代炮制方法和炮制时间对何首乌炮制品质量的影响，同时分析炮制过程中有效成分的变化，为何首乌炮制工艺研究提供参考和依据。

1 仪器与试药

1.1 实验药物

何首乌购于湖南省药材公司，经我校周煌辉教授鉴定为正品。黑豆为市售。

1.2 实验仪器

7520型可见-紫外分光光度计 （上海分析仪器厂）；Waters液相色谱仪，600泵，2487双波长紫外检测器，JJ系列电子天平，索氏提取器，XYZ-802离心沉淀机。

1.3 实验试剂

硫酸、无水乙醇、无水葡萄糖、苯酚、钼氨酸、无水醋酸钠、抗坏血酸、高氯酸、氯仿、甲醇均为国产分析纯试剂，大黄素对照品购于中国药品生物制品检验所，批号：110756-200110，卵磷脂对照品为SIGMA公司产品，批号：232-307-2，二苯乙烯苷对照品购于中国药品生物制品检验所，批号：0844-20003。

2 方法与结果

2.1 各何首乌炮制品的炮制方法

各何首乌炮制品的炮制方法见表1。

2.2 生品及四种炮制品的制备

生品及四种炮制品均在50℃温度下干燥4 h，粉碎，过40目筛，备用。

2.3 何首乌各炮制品含量的测定

用偏光显微镜测定淀粉粒在炮制过程中的变化及何首乌各炮制品的水溶性浸出物的含量按《中国药典》2010年版附录药材成方制剂显微鉴别法，用偏光显微镜观察淀粉粒形态和偏光现象。按《中国药典》2010年版附录水溶性浸出物测定法（冷浸法）测定水溶性浸出物含量。见表2。

表1 四种何首乌的炮制方法

表2 用偏光显微镜测定淀粉粒在炮制过程中的变化及何首乌各炮制品的水溶性浸出物的含量

2.4 蒽醌类化学成分的含量测定

2.4.1 标准曲线的绘制 精密称取大黄素对照品8 mg，加甲醇并定容为 10 mL。 精密吸取此对照品溶液 20、40、80、120、160 μL，分别加0.5%醋酸镁甲醇液至10 mL，摇匀，于510 nm测定吸收度，绘制浓度-吸收度曲线，回归方程为：C（μg/mL）＝15.31A-0.26，r＝0.999 0。

2.4.2 供试品溶液的制备 取生首乌及各何首乌炮制品粗粉各1 g，用50 mL甲醇回流提取完全，提取液平分为两份，加冰醋酸-25%盐酸（10∶2）20 mL，沸水浴水解 2 h，酸液用氯仿萃取5次，合并氯仿液，浓缩至干，残渣加0.5%醋酸镁甲醇溶液溶解，显色，定容至100 mL作为测定总蒽醌的供试品溶液；另一份水浴蒸干，用20 mL乙醚回流提取3次，挥去乙醚，残渣甲醇溶解并稀释至100 mL，作为测定游离蒽醌的供试品溶液。

2.4.3 样品的测定 取上述供试品溶液，照标准曲线项下方法测定，计算即得。见表3。

2.5 卵磷脂含量的测定

精密称取生何首乌，各炙首乌粗粉0.2 g，准确加入5 mL氯仿-甲醇（5∶1）混合溶剂，回流提取，按文献[2]比色法测定计算卵磷脂含量。见表3。

2.6 二苯乙烯苷含量的测定

采用薄层扫描法[3-4]，以生首乌含量为100%，各何首乌炮制品：九蒸九晒何首乌、七蒸七晒何首乌、五蒸五晒何首乌、三蒸三晒何首乌等控制薄层总样量，以其适当面积与生品对照计算出相对百分含量。见表3。

2.7 总糖含量测定方法[5]

总糖含量测定实验结果见表3。

表3 何首乌不同炮制品有效成分含量测定结果（%）

3 讨论

用偏光显微镜测定淀粉粒在炮制过程中的变化及何首乌各炮制品的水溶性浸出物的含量。淀粉粒在何首乌炮制过程中的变化是：用生物显微镜观察，生何首乌中可见大量的淀粉粒，随着蒸制次数的增加，淀粉粒逐步聚合成团，最后彻底糊化消失。由于普通显微镜下淀粉粒与周围组织反差较小，尤其是半糊化的淀粉粒不易观察，因此，笔者用偏光显微镜观察了淀粉粒在何首乌炮制过程中的变化，结果是原生药中可见大量的淀粉粒，偏光图像清晰可见明显对称的黄蓝两色，随着蒸制次数的增加，三蒸三晒淀粉粒开始变形，部分有偏光现象。五蒸五晒淀粉粒开始糊化，偶见偏光现象，七蒸七晒、九蒸九晒未见淀粉粒。从表2可以看出何首乌各炮制品中，七蒸七晒何首乌的成品形状符合规定，未见淀粉粒，九蒸九晒何首乌炮制品，颜色暗淡，无光泽，质疏松，显然蒸制太过。三蒸三晒及五蒸五晒何首乌炮制品，外表红棕色或黑褐色，但断面红棕色，部分呈粉性，用偏光显微镜检查可见大量淀粉粒，显然未制透。从表2同时可以看出，随着蒸制次数的增加，水溶性浸出物的含量不断增加。以反复蒸晒七次为含量最高，随后含量有所下降。

尽管对炮制后何首乌中各化学成分的含量的变化已有报道，但测定方法不同，结果不尽相同[6-7]。从表3结果分析可见，由于结合蒽醌在炮制过程中转变为游离蒽醌，而游离蒽醌有热不稳定性，采用同一种炮制方法炮制，随着蒸制次数的增加，游离蒽醌的含量先升后降，以七蒸七晒组游离蒽醌含量最高，结合蒽醌含量逐渐降低，由于何首乌蒽醌类化合物具有升华性，在蒸制过程中有部分升华损失，致使总蒽醌含量越来越低，故蒸制时间不宜太长。随着蒸制次数增加，何首乌中水溶性浸出物的含量不断增加，结合蒽醌含量越来越低，游离蒽醌、还原糖、卵磷脂、等成分的含量在一定蒸晒次数范围内随着蒸晒次的增多而增加。以反复蒸晒七次含量最高，随后游离蒽醌、还原糖、卵磷脂等成分的含量均有所下降，二苯乙烯苷的含量随着蒸制次数的增加而逐渐降低，可能是由二苯乙烯苷对湿、热不稳定引起的。

因此，以上结果分析可见，炮制时间对游离蒽醌、还原糖、卵磷脂、二苯乙烯苷都有明显影响，时间过长均会引起这些成分的损失。相比之下，以七蒸七晒炮制品较好。本实验结果为制订合理的何首乌炮制工艺提供了一定的理论依据，有一定的实用价值。

[1]天津市卫生局.中药饮片切制规范[M].江西：江西科学技术出版社，1975：53.

[2]李军，徐国钧，徐珞珊，等.中药首乌类的研究Ⅲ磷脂的含量测定[J].中草药，1994，25（11）：578.

[3]马长华，王金星.何首乌炮制前后二苯乙烯苷含量的比较[J].中药材，1995，18（7）：350.

[4]刘成基，张清华，周琼.何首乌及炮制品中二苯乙烯苷含量测定[J].中国中药杂志，1991，16（8）：469.

[5]赵声兰，赵荣华，解奉江，等.炮制工艺对制何首乌饮片磷脂和总糖的影响研究[J].云南中医中药杂志，2005，26（5）：34.

[6]王孝涛.历代中药炮制法汇典——现代部分[M].北京：人民卫生出版社，1966：88.

[7]北京市卫生局.北京市中药饮片切制规范（上册）[M].北京：北京科学技术出版社，1974：86.