六味地黄汤及其水提醇沉物对2型糖尿病肾阴虚证大鼠脂代谢的影响

肖子曾，邢 瑞，戴 冰，何泽云，周芳亮，刘红宇，黄开颜，杨赛男

（1湖南中医药大学 湖南 长沙 410007；2.湖南中医药大学第一附属医院 湖南 长沙 410007）

六味地黄丸滋补肝肾，滋阴养血，其治疗糖尿病具有良好的疗效，可以改善糖尿病发病过程中的葡萄糖代谢异常[1]，调节血脂[2]，能减慢糖尿病肾病病变的发展，具有保护糖尿病肾病患者肾脏的作用[3]。本实验旨在探明六味地黄汤干预2型糖尿病的作用机制及其药效物质基础，为其临床研究提供进一步实验依据。

1 材料与方法

1.1 一般材料

1.1.1 动物 30只清洁级健康雄性SD大鼠，体质量180～220 g，由湖南中医药大学动物实验中心提供，动物合格证号：SCXK(湘)2009-2004。

1.1.2 药物 六味地黄方：熟地黄24 g，山茱萸12 g，山药12 g，牡丹皮9 g，泽泻9 g，茯苓 9 g。药材由湖南中医药大学第一附属医院药剂科提供。

1.1.3 试剂 枸橼酸（批号: 100823），磷酸氢二钠（批号：101125），链脲佐菌素（STZ，Sigma，批号：S8050，纯度98%）购自Sigma公司，氢化可的松（批号：11021411，天津药业焦作有限公司），胰岛素（批号：1102229，江苏万邦生化医药股份有限公司），葡萄糖（批号：110302，成都金山化学试剂有限公司），环-磷酸腺苷（cAMP）酶联免疫试剂盒（批号：20111206）。

1.1.4 仪器 快速血糖仪及血糖试纸（美国罗氏公司）；ca-958d型半自动生化分析仪；WH-1型旋涡混匀器（上海沪西分析仪器厂）；旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；TD4-Ⅱ型台式自动平衡离心机（长沙平凡仪表有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 六味地黄汤及水提醇沉物的制备 称取六味地黄方饮片10付，共750 g，加6倍量水，浸泡30 min，煎煮30 min，过滤，再加4倍量水，煎煮30 min，合并两次滤液，水浴浓缩成浓度为0.75 g/mL的六味地黄汤。取适量浓缩后的六味地黄汤，70%乙醇醇沉处理，静置24 h，真空抽滤，除去沉淀部分，醇溶上清液浓缩，共得水提醇沉物149.7 g（每1 g水提醇沉物相当于生药2.51 g）。

1.2.2 高脂乳的制备 称取胆固醇5 g，蔗糖5 g，果糖5 g，丙硫氧嘧啶1 g，谷氨酸钠1 g，食盐6 g，量取20 mL吐温-80，猪油20 g，丙二醇30 mL，加蒸馏水定容至100 mL配成脂肪乳，4℃保存。

1.2.3 2型糖尿病肾阴虚证大鼠模型的建立 空白组普通饲料喂养，其他动物高脂乳灌胃10 mL/（kg· d）[4]加普通饲料喂养，10 d后，所有动物禁食12 h，模型大鼠腹腔注射STZ 40 mg/kg，空白组注射等体积枸橼酸 磷酸氢二钠缓冲液。15 min后，大鼠腹腔注射胰岛素4 U，2.5 h和5 h后灌胃给予25%葡萄糖10 mL/kg，72 h后检测大鼠空腹血糖，FBG≥16.7 mmoL/L的即为2型糖尿病模型大鼠。2型糖尿病模型大鼠禁食12 h，灌胃氢化可的松35 mg/kg[5]，连续灌胃4 d，期间高脂乳喂养，4 d后测大鼠空腹血糖及血清cAMP，FBG≥16.7mmoL/L且血清cAMP明显上升者，即为2型糖尿病肾阴虚模型大鼠。

1.2.4 分组给药 2型糖尿病肾阴虚证模型大鼠随机分为六味地黄汤组、六味地黄汤水提醇沉物组、罗格列酮组、模型组，每日分别按六味地黄汤6.75 g/kg（按临床六味地黄汤每天服用1付75 g生药折算）、六味地黄汤水提醇沉物2.7 g/kg（相当于原方剂量6.75 g/kg）、罗格列酮0.72 mg/kg（按临床罗格列酮每天服用8 mg折算）的剂量连续灌胃30 d，其剂量按照70 kg成人与200 g大鼠体表面积换算，模型组、空白组灌服等体积生理盐水。

1.2.5 标本采集 大鼠禁食10 h，腹腔注射10%水合氯醛0.35 g/kg麻醉，断尾、用快速血糖仪测血糖，解剖、腹主动脉取血，静置，分离血清，-20℃冻存待检。

1.2.6 指标检测 用ELISA试剂盒检测血清中cAMP的含量，用半自动生化仪检测血清中CHO、LDL-C、HDL-C、TC的含量。

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 2型糖尿病肾阴虚证大鼠体征变化

2型糖尿病肾阴虚证模型大鼠体质量下降，精神不振，活动减少，反应较迟钝，体毛无光泽、粗糙发黄暗淡，大便稍干结，色黑，肛门出现红肿，饮水增加，进食量增加，尿量增加，尿黄，痛阈值降低等，与中医肾阴虚证相符合。

2.2 六味地黄汤及其水提醇沉物对2型糖尿病肾阴虚证大鼠血糖、血清cAMP、脂代谢的影响

模型组大鼠与空白组比较，模型组大鼠成模后30 d空腹FBG、血清cAMP仍明显高于空白组，其CHO、TG、LDL-C水平明显升高，HDL-C水平降低，比较差异有显著统计学意义（P＜0.01），提示造模成功，模型稳定，且该模型大鼠脂代谢异常。六味地黄汤组、六味地黄汤水提醇沉物组与模型组比较，大鼠空腹FBG、cAMP、CHO、TG、LDL-C水平明显低于模型组，比较差异有显著统计学意义（P＜0.01），HDL-C水平明显高于模型组，比较差异有显著统计学意义（P＜0.01）；提示六味地黄汤及其水提醇沉物均能降低2型糖尿病肾阴虚证大鼠的空腹FBG、cAMP、CHO、TG、LDL-C水平，升高HDL-C水平，且其两者的作用无差异；六味地黄汤组、六味地黄汤水提醇沉物组与罗格列酮组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），提示罗格列酮降低2型糖尿病肾阴虚证大鼠FBG及改善脂代谢的作用优于六味地黄汤及其水提醇沉物。结果见表1。

3 讨论

2型糖尿病多属中医“消渴”范畴，中医认为本病的病机为阴津亏损，燥热偏盛，而以阴虚为本，燥热为标[6]，2型糖尿病肾阴虚证是（消渴）中医辨证的常见症候。本实验分离提纯制得六味地黄汤水提醇沉物能降低2型糖尿病肾阴虚证大鼠的血糖，改善脂代谢，从而干预2型糖尿病肾阴虚证。

表1 给药后大鼠空腹FBG、血清cAMP 、CHO、TG、LDL-C、HDL-C的比较（±s，n=6）

表1 给药后大鼠空腹FBG、血清cAMP 、CHO、TG、LDL-C、HDL-C的比较（±s，n=6）

注：与空白组比较*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较●P＜0.05, ●●P＜0.01；与罗格列酮组比较△P＜0.05, △△P＜0.01。

组别 给药剂量（g/kg）FBG（mmoL/L）cAMP（mmoL/L）CHO（mmoL/L）TG（mmoL/L）LDL C（mmoL/L）HDL C（mmoL/L）空白组 6.75 6.0±0.5 0.96±0.06 1.52±0.09 0.83±0.06 0.44±0.03 1.15±0.06模型组 6.75 18.0±2.4** 1.24±0.024**●● 2.21±0.18** 1.57±0.11** 1.04±0.05** 0.76±0.05**●●罗格列酮组 0.72×10-3 13.7±0.5**●● 1.10±0.01** 1.79±0.04**●● 1.25±0.04**●● 0.74±0.03**●● 0.98±0.02**六味地黄汤组 6.75 15.8±0.6**●△ 1.19±0.02**●●△△ 1.93±0.11**●●△ 1.37±0.06**●●△ 0.83±0.02**●●△△ 0.86±0.02**●△△苷类部位组 2.70 15.9±0.6**●●△ 1.17±0.03**●●△△ 1.94±0.04**●●△ 1.38±0.04**●●△ 0.84±0.03**●●△△ 0.87±0.02**●△△

六味地黄汤是滋阴补肾经典名方，临床防治2型糖尿病取得了较好的疗效，本实验也发现六味地黄汤可以改善2型糖尿病肾阴虚证的症状，但降糖效果不显著；罗格列酮的药效优于六味地黄汤及其水提醇沉物，降糖效果显著，起效快，但临床应用中副作用大。故以罗格列酮结合六味地黄汤治疗2型糖尿病肾阴虚证可能会有更好的疗效，因此，深入开展对六味地黄汤作用机制的研究，对于提高2型糖尿病的治疗水平有重要意义。

[1]刘冬恋.六味地黄丸治疗糖尿病及其并发症的研究进展[J].四川生理科学杂志,2009,31(1):31-34.

[2]金智生,杨世勤,潘宇清,等.六味地黄丸对实验性糖尿病大鼠胰岛素敏感性影响[J].甘肃中医学院学报,2008,25(1):9-12.

[3]刘 卿,周于禄,裴 奇,等.六味地黄丸对糖尿病肾病大鼠肾脏保护作用的研究[J].湖南中医药大学学报,2007,27(6):40-43.

[4]徐淑云.药理实验方法学[M].北京:人民卫生出版社,2010:1 367.

[5]陈 奇.中药药理实验方法学[M].北京:人民卫生出版社,2011:1 096-1 098.

[6]田德禄.中医内科学[M].上海:上海科学技术出版社,2006:351.