中草药抗热应激蛋鸡小肠上皮内淋巴细胞的组织学观察

沈 萍，史秋梅，高光平，董淑珍，尹海力，杨 超

(河北科技师范学院动物科技学院，河北 秦皇岛，066600)

鸡热应激严重危害养鸡业的发展，尤其是现代化生产增大了鸡群的密度，提高了鸡群内温度，妨碍了鸡的散热，过高的温度会导致鸡热应激，影响鸡的生长发育及生产性能，甚至可造成疾病流行。因此，如何提高蛋鸡对热应激的抵抗力是现在人们关注的热点之一。

中草药抗热应激的研究日益受到人们的关注，中草药中含有多种营养成分和天然化学成分，如维生素、微量元素等，其作用是多靶点的，在防病治病的同时，还能促进生长、增强动物的免疫机能、提高机体整体抗病能力。本试验通过蛋鸡饮用不同浓度中草药，在热应激条件下观察其小肠黏膜上皮内淋巴细胞变化来阐述中草药对热应激的抵抗效果。

1 材料与方法

1．1 试验材料

1．1．1 试验动物 88日龄健康雏鸡育成鸡120只，品种为伊莎褐蛋鸡。由河北科技师范学院牧场提供。

1．1．2 主要仪器与试剂 石蜡切片机、自动磨刀机、电热恒温水浴锅、DMB5-5数码生物显微镜，光学显微镜等;甲醛溶液、Bouin固定液、不同浓度酒精、二甲苯、苏木素-伊红染色液、蛋白甘油、盐酸酒精、冰醋酸、石蜡、中性树胶等。由河北科技师范学院动物科技学院基础实验室提供。

1．1．3 中草药 主要由藿香、薄荷、知母、红景天等7味中草药组成的方剂。由河北省预防兽医重点实验室提供。

1．2 试验方法

120只88日龄伊莎褐蛋鸡随机平均分为6个组，其中3个组为试验组，分别饲喂高、中、低浓度中草药，另3个组为对照组，一组中添加维生素C，一组置于高温环境中，不添加任何药物，最后一组于常温环境中喂养。常温环境约20℃，其余5组处于模拟高温(27．6～33．7℃)环境中。具体设计如表1所示。

1．3 采样及切片制备

1．3．1 采样 试验各组分别于试验第1天、第4天、第8天和第10天随机选取5只试验鸡，空腹称取质量后颈动脉放血处死，在小肠中段取约2 cm的肠段。

1．3．2 切片制备 将所取不同试验组的小肠段及时置于Bouin液中固定→不同浓度酒精脱水→二甲苯透明→浸蜡→石蜡包埋→切片(5 μm)→HE染色。

1．3．3 淋巴细胞计数及统计 在显微镜下(400×)观察，每只鸡观察5张切片，每张切片观察5个绒毛，每个绒毛选取100个小肠上皮细胞，计算其中的淋巴细胞数量，记录数据。数据经整理后，用SPSS17．0进行统计分析，各组间的差异采用单因子方差分析，试验结果用x±SD(平均值±标准偏差)表示。

表1 各试验组的药物分配方法

2 结果与分析

在试验第1天鸡的小肠黏膜上皮内淋巴细胞数量之间除高浓度中草药组与高温对照组差异显著外其余各组间差异不大(表2);试验第4天时，除室温对照组的淋巴细胞变化不大外，其余各组均有所增加，其中高浓度组增加最多，与室温对照组间有极显著的差异;而高温对照组淋巴细胞也有所增加，可能是由于机体免疫机制启动，以对抗外界高温的刺激，导致机体内淋巴细胞增多;试验第8天时，室温对照组淋巴细胞数仍无太大变化，高温对照组，由于鸡体自身的抵抗力不足以对抗外界的高温环境，导致机体衰弱，淋巴细胞生成减少。其余4组淋巴细胞数均有所增加，以显示出机体对外界的抵抗力增加，能有效抵抗外界的高温刺激;试验第10天时，室温对照组中淋巴细胞数仍无太大变化，高温对照组(图1(a))中淋巴细胞数仍在减少，其余4组中淋巴细胞数仍在增加，3个中草药组(图1(b)，图1(c)，图1(d))中淋巴细胞数与Vc对照组(图1(e))中的淋巴细胞数大体相等，且都远大于高温对照组和室温对照组，差异极显著，其中高浓度组的淋巴细胞数最多，而室温对照组(图1(f))的淋巴细胞数也高于高温对照组，差异极显著。试验表明中草药组和Vc组淋巴细胞数仍呈上升趋势，且高浓度组淋巴细胞数最多，中草药能有效抵抗高温对鸡体的不良刺激。

表2 各试验组鸡小肠上皮细胞内淋巴细胞数量变化

3 讨 论

肠上皮内淋巴细胞是粘膜免疫系统中与肠腔内抗原发生最直接接触的免疫细胞，并与肠上皮细胞之间存在相互的免疫生理调节，在粘膜免疫中发挥着独特的作用［1～3］。研究表明，肠上皮内淋巴细胞，具有中和外源细胞毒作用及分泌淋巴因子等多种功能，在受到相应刺激时可被激活，从而在肠道免疫中发挥着重要的作用，是肠道免疫的主要组成部分。同时也具有抗原呈递功能，可将抗原呈递给T细胞，产生食物免疫耐受，对机体有重要的免疫作用［3，4］。本试验表明高温应激严重破坏蛋鸡体内环境的稳定，导致机体热衰竭、产蛋性能下降，而且对其免疫系统有抑制作用，肠上皮内淋巴细胞数量明显减少，表明肠道免疫功能下降，抵抗力减弱。通过观察组织切片得知，热应激可以造成小肠的病理损伤性变化，病变主要涉及粘膜层。随着试验进行，小肠粘膜上皮细胞脱落加剧，从而抑制蛋白质合成，降低了上皮细胞的更新率，使肠粘膜的上皮细胞再生能力下降，屏障机能减弱，以试验第10天时最为严重。而3个中草药组和Vc对照组淋巴细胞数持续增加，说明了该中草药和Vc可有效抵抗高温对机体免疫系统的抑制作用。因此，肠上皮内淋巴细胞数量的变化能从一个方面反映了肠道黏膜免疫的状态。

中草药中的多糖成分具有免疫促进作用，是中草药中重要的活性成分。试验用的藿香中的多糖具有显著的免疫促进作用，可不同程度地提高试验动物淋巴细胞的转化率，可使试验动物机体内的淋巴细胞数增加，尤其是T淋巴细胞［5］。试验表明，中草药组能增加小肠上皮淋巴细胞的数量，保持小肠上皮的完整性。藿香挥发油能促进胃液分泌，提高消化能力，对胃肠道有解痉作用。胃肠功能加强，食物被有效消化吸收，小肠上皮细胞因此生长旺盛，肠上皮细胞不断地更新，以增强上皮的功能和耐受性，从而增强屏障作用。薄荷为传统的辛凉解表药，为疏散风热的要药，昧辛、性凉，具有辟秽、疏肝、解毒的功效。在高温条件下，薄荷的疏散风热作用可有效缓解高温的刺激。薄荷及其有效成分均有解痉作用，能抑止胃肠平滑肌收缩，在胃肠受到不利刺激时能够缓解不利刺激对其造成的伤害［6］。知母具有退热、镇静、抗炎、利尿等作用。红景天产于青藏高原，无污染，天然纯净，为青藏特有名贵药材。能提升机体对有害刺激的非特异性抵抗力，加强机体的适应性，具有抗脑缺氧、抗疲劳、活血止血、清肺止咳、化淤消肿、解热退烧、滋补元气等作用［7-9］。Vc可促进淋巴母细胞的生成，从而提高机体的免疫力，还可提高机体的应激能力［10］。

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