异香豆素对老年痴呆小鼠β淀粉样蛋白的影响

尹立 韩伟 马晓健 邬贤斌 胡继实 卢琼

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)又称原发性老年痴呆(senile dementia), 是一种以进行性认知障碍和记忆力损害为主的中枢神经系统退行性疾病[1],其发病率随年龄的增加而增高，成为仅次于心脑血管疾病和癌症的高发性疾病[2]。目前AD的发病机制尚未明了，临床上也缺乏有效的治疗药物，近年来对中药及其提取物治疗AD的研究不断取得进展[3]，因此，本研究使用异香豆素观察其对老年痴呆小鼠的抗痴呆作用，并探讨其相关的作用机制。

1 材料与方法

1.1 主要试剂和仪器 异香豆素为美国Sigma公司产品，Aβ放免试剂盒购自解放军总医院科技开发中心放免所，小鼠Morris水迷宫装置及跟踪系统为成都泰盟公司生产。

1.2 实验动物和痴呆模型建立 昆明种小鼠50只，鼠龄2～3个月，体重30～34g，雌雄各半，由我校实验动物中心提供。小鼠按体重随机分为对照组（10只）和模型组（40只），模型组再分为：模型对照组（10只）、低剂量异香豆素治疗组（10只）、中剂量异香豆素治疗组（10只）、高剂量异香豆素治疗组（10只）。对照组和模型对照组给予生理盐水处理，异香豆素治疗组分为低（5mg/Kg）、中（10mg/Kg）、高（20mg/Kg）三个剂量每日灌胃一次。

痴呆模型建立：参照Alsei等[4]的方法构建老年痴呆小鼠模型，简述如下：模型组小鼠每日注射D-半乳糖（120mg/Kg）+亚硝酸钠（90mg/Kg），连续2个月。

1.3 小鼠水迷宫实验 迷宫圆形直径80cm，高44cm，安全台直径8cm，高20cm，按照仪器说明书完成定向游泳实验，在安全台上停留超过2s为成功，每天训练2次，共4 d，从入水到到达安全台的时间为逃避潜伏期，记录动物游泳轨迹。

1.4 放射免疫法测定小鼠脑组织Aβ含量 实验结束，断颈处死小鼠，分离脑组织，制备单细胞悬液，裂解细胞按照放免试剂盒的说明操作检测各处理组中Aβ的含量。

1.5 统计学方法 应用SPSS12.0统计软件处理数据，两样本均数比较采用t检验，多组间均数比较采用方差分析，实验数据连续性资料以（±s）表示，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 异香豆素对小鼠水迷宫实验的影响

老年痴呆小鼠模型组与对照组对照比较，逃避潜伏时间出现显著性的延长（P＜0.01），平台跨越次数显著性的减少（P＜0.01）。异香豆素治疗后老年痴呆小鼠的逃避潜伏时间和平台跨越次数得到显著性的改善（P＜0.05），见表1。

表1 各处理组小鼠水迷宫实验结果比较

2.2 异香豆素对老年痴呆小鼠脑组织Aβ表达的影响 对照组、模型对照组、低剂量异香豆素治疗组、中剂量异香豆素治疗组、高剂量异香豆素治疗组脑组织Aβ的表达水平分别为（1.01±0.44）pg/ml、（12.89±3.21）pg/ml、（10.45±2.06）pg/ml、（7.18±1.92）pg/ml、（4.07±1.24） pg/ml，各组之间具有统计学差异（P＜0.01）。

3 讨论

D-半乳糖是目前公认的AD小鼠造模方法，D-半乳糖可以诱发神经元退行性变，造成亚急性痴呆模型，本研究就是用此法构建了AD小鼠模型。β淀粉样蛋白(β-amyloid protein，Aβ)的聚集和神经原纤维缠结是阿尔茨海默病的主要病理变化，也是老年斑的核心成分，Aβ的聚集可以导致氧自由基的升高、炎症反应、细胞凋亡和神经系统退行性变，因此，抑制Aβ的生成是治疗阿尔茨海默病的更佳方案[5]。异香豆素属于苯丙吡喃酮类化合物，是一些天然产物的基本结构，广泛分布于自然界中，具有抗菌、消炎、抗癌、抑制蛋白酶等多种生物活性，有着良好的开发应用前景，近期的研究显示，一些具有异香豆素母核结构的化合物能有效地抑制Aβ的产量[6-7]。本研究使用异香豆素治疗AD小鼠，结果显示，异香豆素治疗后老年痴呆小鼠的逃避潜伏时间和平台跨越次数得到显著性的改善（P＜0.05），而且老年痴呆小鼠脑组织中Aβ的表达水平也出现剂量依赖性的下降（P＜0.01），说明了异香豆素具有抗AD小鼠痴呆的活性。

综上所述，异香豆素具有抗AD小鼠痴呆的活性，减少AD小鼠脑组织Aβ的生成是其主要的作用机制，有望将异香豆素开发为靶向治疗AD的一类新药。

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