枸杞多糖对链脲佐菌素联合高糖高脂饲养致2型糖尿病大鼠的影响

黄云兰，李诺利，梁耿，韦凯东

（广西钦州市第二人民医院药剂科，广西 钦州 535099 E－mail：huangyunlan2012＠163.com）

枸杞为茄科落叶灌木植物宁夏枸杞（Lycium barbarum L）的成熟果实，其含有黄酮类、多糖、多种氨基酸、生物碱、挥发油等多种天然化学成分。现代药理研究表明［1，2］，枸杞具有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、降压、降脂、降血糖和增强机体免疫力等作用。本实验通过建立链脲佐菌素（Streptozotocin，STZ）联合高糖高脂饮食所致的2型糖尿病大鼠模型，探讨枸杞多糖对2型糖尿病大鼠的血糖、游离脂肪酸（NEFA）等指标的影响，为其丰富资源的开发利用提供科学依据。

1 实验材料

1.1 动物与饲料 雄性SD大鼠60只，体重（200±20）g，购自广西医科大学实验动物中心，动物合格证号：SCXK桂2009－0002。高糖高脂饲料组成（100g）：猪油20g，胆固醇5g，脱氧胆酸钠5g，蔗糖20g，合并普通饲料50g制成。

1.2 药物与试剂 STZ：美国Sigma公司，批号：80082038。二甲双胍片：北京京丰制药有限公司，规格250mg／片，批号：111012。血糖试剂盒：四川迈克科技股份有限责任公司生产，批号：1211031。游离脂肪酸（NEFA）测试盒，谷胱甘肽（GSH）测试盒，超氧化物歧化酶（SOD）测试盒，丙二醛（MDA）测试盒，均由武汉博士德生物工程有限公司提供，批号：20120816。

1.3 仪器 722S紫外分光光度计：上海精密科学仪器有限责任公司。酶标分析仪：美国Thermo Forma公司。

2 实验方法

2.1 枸杞多糖制备 实验提取流程：将枸杞粉碎后用70%乙醇室温浸泡30min后，80°C回流提取1.5h，纱布过滤，滤液用漏斗抽滤后于旋转蒸发仪减压浓缩，然后分别用无水乙醇、丙酮多次洗涤，真空干燥挥干溶剂后，Sevag法除去蛋白质，经化学法鉴别为枸杞多糖类化合物即可使用。

2.2 2型糖尿病大鼠模型 正常对照组给予喂食普通饲料；其他实验用大鼠持续给予高糖高脂饲料喂养4周后，造模前禁食12h，腹腔注射链脲佐菌素（STZ）溶液40mg／kg，继续投喂高糖高脂饲料至2周末，尾静脉采血测空腹血糖（FBG），选取FBG≥16.8mmol／L的大鼠作为2型糖尿病模型［3］。

2.3 分组及给药 经检测FBG确定成模后，随机分成5组：模型组，二甲双胍阳性组及枸杞多糖低、中、高剂量组，每组10只。枸杞多糖组分别灌胃给予枸杞多糖100、200、400mg／kg，阳性组给予二甲双胍每天20mg／kg，连续灌胃30天，并设置正常组。末次给药后，检测FBG指数，比色法检测血清中NEFA和GSH含量。ELISA法检测肝脏组织中SOD活性和MDA含量。实验操作步骤严格按照厂家说明书进行。

3 实验结果

3.1 枸杞多糖对2型糖尿病大鼠模型FBG的影响 与正常组比较，治疗前模型组和其他各组大鼠FBG明显升高（P＜0.01）。与模型组比较，药物干预后给药各组FBG逐渐降低（P＜0.01）。结果见表1。

表1 枸杞多糖对2型糖尿病大鼠FBG的影响（±s，n＝10）

注：与正常组比较，a：P＜0.01；与模型组比较，b：P＜0.01

组别 剂量（mg／kg）FBG（mmol／L）给药前 给药后正常组 － 6.48±1.79 6.71±1.83模型组 － 17.54±1.48a18.04±2.62a二甲双胍组 20 17.36±2.05a12.47±1.63b枸杞多糖组 100 16.92±2.18a15.21±2.44b200 17.59±2.06a14.17±2.56b 400 17.46±2.38a11.87±1.89b

3.2 枸杞多糖对2型糖尿病大鼠血清NEFA、GSH的影响 与正常组比较，2型糖尿病大鼠模型组NEFA水平异常升高，而GSH活性则明显降低（P＜0.01）。药物治疗后，二甲双胍组和枸杞多糖给药各组的NEFA水平显著降低，GSH活性升高，与模型组比较差异有高度显著性（P＜0.01）。结果见表2。

表2 枸杞多糖对2型糖尿病大鼠血清中NEFA、GSH的影响 （±s，n＝10）

表2 枸杞多糖对2型糖尿病大鼠血清中NEFA、GSH的影响 （±s，n＝10）

注：与正常组比较，a：P＜0.01；与模型组比较，b：P＜0.01

组别 剂量（mg／kg）NEFA（mmol／L ）GSH（g／L）－ 2.04±0.78 90.24±17.28模型组 － 5.13±1.46a 37.85±9.94a二甲双胍组 20 1.84±0.97b 70.63±15.46b枸杞多糖组 100 2.79±1.21b 46.82±10.95b2002.04±1.16b 58.62±12.37b 400 1.72±0.83b 68.31±15.98正常组b

3.3 枸杞多糖对2型糖尿病大鼠血清肝组织SOD，MDA的影响 与正常组比较，2型糖尿病大鼠模型组肝组织中SOD活性明显下降，而MDA含量明显增多（P＜0.01）。治疗后，二甲双胍组和枸杞多糖给药组2型糖尿病大鼠肝组织中SOD水平明显增多，而MDA含量逐渐减少，与模型组比较差异有高度显著性（P＜0.01）。结果见表3。

表3 枸杞多糖对2型糖尿病大鼠肝组织SOD、MDA的影响 （±s，n＝10）

表3 枸杞多糖对2型糖尿病大鼠肝组织SOD、MDA的影响 （±s，n＝10）

注：与正常组比较，a：P＜0.01；与模型组比较，b：P＜0.01

组别 剂量（mg／kg）SOD（u／mg）MDA（nmol／mg）正常组 － 192.64±48.57 7.12±1.38模型组 － 87.95±22.64a15.35±4.06a二甲双胍组 20 170.46±41.52b 8.47±1.92b枸杞多糖组 100 103.82±29.17b 12.53±3.24b200 142.31±32.69b 10.26±2.73b 400 176.85±41.93b 7.98±1.68b

4 讨论

糖尿病是慢性疾病，其诱导的并发症是致残、致残死的主要原因，临床上病症多见为高血糖主要特征的代谢障碍［4］。因此，有效控制高血糖的紊乱状态是治疗糖尿病的首要策略。本实验显示，枸杞多糖各治疗组逐渐地降低2型糖尿病大鼠的血糖水平，表现为剂量的依赖性，表明枸杞多糖具有良好的降血糖疗效。

糖尿病造成机体脂代谢紊乱和抗氧化损伤能力下降，最终会导致胰岛素抵抗［5］。肝脏是调节血脂和血糖的重要器官之一，维持其代谢的内平衡是机体正常运行的必要条件［6］。研究表明异常表达的NEFA会介导肝毒性作用，从而造成细胞的功能障碍，最终导致血脂、血糖的异常，进一步加剧糖尿病病情［7］。自由基介导的细胞毒性，可使脂质过氧化，损伤细胞膜，严重破坏组织的正常功能。而GSH、SOD能清除体内代谢过程中产生的超氧阴离子等自由基，对细胞或组织有保护作用。在生物体内，活性氧簇（ROS）作用于脂质诱发过氧化反应，氧化终产物为MDA，其再次破坏蛋白质、核酸等分子结构，具有细胞毒作用［8］。在本实验中，枸杞多糖能有效升高2型糖尿病大鼠血清中GSH活性，同时降低NEFA的含量，并提高肝脏组织中SOD活性和降低MDA含量，表明枸杞多糖能够增强2型糖尿病大鼠肝脏抗氧化应激能力和抑制细胞介导的脂毒性，恢复糖尿病大鼠肝功能。推测其对2型糖尿病大鼠氧化损伤的保护作用可能是其降血糖的主要机制之一。

［1］ 吴琦，李志强，崔忠慧.枸杞多糖降血脂和抗动脉粥样硬化作用的研究进展［J］.牡丹江医学院学报，2008，29（2）：67－69.

［2］ 左红举，喇万英.枸杞多糖的降血糖作用及对糖尿病并发症的研究现状和展望［J］.甘肃中医，2009，22（4）：77－79.

［3］ Hong LL，Xu GX，Shen GM，et al.Establishment of the model of type2diabetes in SD rats［J］.Lab Ani Sci ＆Admi，2005，22（4）：1－3.

［4］ Bhattarai MD.Three patterns of rising type2diabetes prevalence in the world：need to widen the concept of prevention in individuals into control in the community［J］.JNMA J Nepal Med Assoc，2009，48（174）：173－179.

［5］ Demissie S，Levy D，Benjamin EJ，et al.Insulin resistance，oxidative stress，hypertension，and leukocyte telomere length in men from the Framingham Heart Study［J］.Aging Cell，2006，5（4）：325－330.

［6］ Sayuri Nakamura，Yoshinori Ito，Koji Suzuki，et al.Blood pressure，levels of serum lipids，liver enzymes and blood glucose by aldehyde dehydrogenase2and drinking habit in Japanese men［J］.Environ Health Prev Med，2006，11（2）：82－88.

［7］ Ontko JA.Effects of ethanol on the metabolism of free fatty acids in isolated liver cells［J］.J Lipid Res，1993，14（1）：78－86.

［8］ Sturgeon BE，Sipe HJ Jr，Barr DP，et al.The fate of the oxidizing tyrosyl radical in the presence of glutathione and ascorbate.Implications for the radical sink hypothesis［J］.J Biol Chem，1998，273（46）：30116－30121.