四孢蘑菇驯化栽培技术的研究

高云虹，张淑华

（1.伊春林业科学院，黑龙江 伊春153000；2.伊春林业学校）

四孢蘑菇，俗称雷窝子，学名蘑菇（Agaricus campestris L.：Fr.）是优良食用菌，试验对小白鼠肉瘤及艾氏腹水癌的抑制率均为80%。子实体中等至稍大。小兴安岭林区，冬长寒冷，夏季温暖，降水丰富，菇类产量以7、8月为最盛。伊春林区占据了小兴安岭大部，浩瀚的林海，湿润的气候，孕育了多种多样野生食用菌的生长，使林区拥有丰富的野生食用菌资源。有代表性的种类466种，其中食用菌226种，药用菌33种，食药兼用55种，有毒菌52种。其它菌100种。然而如此丰富的食用菌资源却没有得到充分开发利用，在可食性食用菌中，仅有黑木耳等极少数被驯化栽培，而大多数未被开发利用。目前伊春正处在经济转型、第三次创业的关键时期，食用菌是最好的替代产业，在木屑资源已近枯竭的形势下，草腐菌的栽培具有极其广阔的发展空间和重要的现实意义。四孢蘑菇既是伊春的野生食用菌，又是草腐菌，因此，开展了其驯化栽培技术的研究。

1 材料和方法

1.1 生物学特性测定

1.1.1 供试菌种

四孢蘑菇（Agaricus campestris L.：Fr.），伞菌目、蘑菇科。采自伊春市区北山。

将四孢蘑菇进行组织分离。把分离并纯化的菌种接种到PDA斜面培养基上，在22℃温度下连续培养20d，由此进行生物学特性测定。

1.1.2 温度对菌丝生长的影响

制作PDA培养基，分装于试管，每支试管装12mL，经126℃灭菌30min，制成斜面，将供试菌种分别接种，每管接入直径5mm的圆形菌落一块。每4支一组分别置于5、15、18、20、22、25、28、30℃的恒温培养箱中，连续培养20d，测菌落直径，并比较菌落直径和菌丝生长速度、菌丝长度。

1.1.3 酸碱度对菌丝生长的影响

用1N的NaOH和1N的HCl将PDA培养基的pH 值 调 节为：2.58、3.10、3.75、4.44、5.59、6.00、6.33、7.09、8.15、9.02，制成试管斜面培养基。每管接入直径5mm的圆形菌落一块，将菌种接到斜面中央。每个pH值重复4次，置于22℃恒温箱中连续培养20d，测定菌落直径，观察记录菌丝生长速度。

1.1.4 四孢蘑菇对碳源和氮源的利用

供试碳源：可溶性淀粉、甘露醇、麦芽糖、蔗糖、葡萄糖、乳糖；

供试氮源：硝酸铵、酵母粉、硫酸铵、硝酸钾、蛋白胨、尿素；

测量碳源的基本培养基：KH2PO40.46g、K2HPO41g、MgSO40.5g、琼脂15g、蛋白胨2g、水1000mL，装入500mL烧杯中，每杯装入100mL，分别加入20g碳素不同的碳源。分装于试管中，每管12mL经126℃灭菌30min，制成斜面，每管接入直径5mm的菌落一块。每一碳源重复四次，置于22℃恒温箱中连续培养20d，测量菌落直径。

测量氮源的基本培养基：葡萄糖20g、KH2PO40.46g、K2HPO41g，MgSO40.5g，琼脂15g、水1000 mL。

其它方法同碳源。只是每配方中加入的氮源量为2g。

1.1.5 碳氮比对菌丝生长的影响

以麦芽糖为碳源、硝酸铵为氮源，以琼脂20g、水1000mL，作基础培养基，配制成C／N分别为10∶1、20∶1、30∶1、40∶1、50∶1、60∶1、70∶1、80∶1共8种配方，分别装入试管，126℃灭菌30min，摆成斜面，无菌接入5mm的菌块，置于斜面中央。同一碳氮比设4个重复，置于22℃恒温箱中，连续培养20d，测量菌落直径。

1.1.6 氧气对菌丝生长的影响

用PDA培养基分装于试管中，每管12mL。126℃灭菌30min。摆成斜面，无菌接入5mm的菌块，置于斜面中央。将试管口的棉塞及与试管口接触的边缘用塑料薄膜包严，防止氧气进入。设4个重复，并设1组对照。然后放入22℃恒温箱中，连续培养20d，测量菌落直径，观察菌丝生长势。

1.2 驯化栽培试验

1.2.1 母种培养基筛选

PDA：马 铃 薯 200g，葡 萄 糖 20g，琼 脂 20g，水1000mL；

PDA1：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，玉米粉20g，水1000mL；

4号：玉米粉30g，葡萄糖20g，磷酸氢二钾1g，硫酸镁0.5g，蛋白胨1g，琼脂22g，水1000mL；

5号：燕麦片30g，琼脂20g，水1000mL；

6号：玉米粉40g，琼脂20g，水1000mL；

11号：葡萄糖10g，麦芽糖10g，酵母膏4g，琼脂18g，水1000mL；

16号：葡萄糖20g，磷酸氢二钾0.1g，蛋白胨2g，硫酸镁0.5g，酵母浸膏1g，琼脂20g，磷酸二氢钾0.4g，水1000mL。

分别制作以上培养基，分装每管12mL。126℃灭菌30min。摆成斜面，无菌接入5mm的菌块，置于斜面中央。每个培养基接种4支，然后放入22℃恒温箱中，连续培养20d。测量菌落直径。

1.2.2 原种培养基供试配方

1号：干麦粒99%，石膏1%；

2号：玉米粒49%，阔叶木屑50%，石膏1%；

3号：马粪50%，棉籽壳48%，蔗糖1%，石膏1%；

7号：木屑56.5%，玉米芯30%，麦麸12%，石膏1%，石灰0.5%；

8号：玉米粒50%，木屑39%，麦麸10%，石膏1%；

9号：棉籽壳99%，石膏1%；

10号：玉米粒100%。

将以上7种配方分别拌料，湿度调到60%，用装袋机装袋（除含粮食的配方用手工装袋外），129℃灭菌1～1.5h，分别接入母种，每支接种4～6袋。放入22℃恒温箱中，连续培养20d，测量菌丝长度。

1.2.3 栽培种培养基配方的筛选

12号：干马粪60%，稻草38.5%，石膏1%，石灰0.5%；

13号：干牛粪32%，棉壳65%，石膏1%，石灰2%；

14号：稻草86%，豆饼5%，玉米粉5%，石膏1%，尿素0.5%，过磷酸钙1%，石灰1.5%；

15号：马粪50%，棉壳48%，蔗糖0.5%，磷酸二氢钾0.5%，石膏1%；

17号：木屑78%，麦麸20%，蔗糖1%，石膏1%。

先将以上各培养料分别拌料，湿度在55%～60%，用装袋机装袋，袋的规格17cm×33cm，聚乙烯塑料袋，100℃灭菌10h。冷却接种。置室温下培养。测量菌丝长度。

1.3 栽培试验

袋栽、室内箱栽及室外床栽。

1.3.1 袋栽试验

选用发满菌的栽培种，将袋口打开，将塑料袋拉直，其上覆盖塑料薄膜，在室内观察出菇情况。

1.3.2 室内箱栽

秋季室内栽培。用保温箱，选发满菌的栽培种，将塑料袋脱去，将菌种掰碎，克霉灵、白灰、塑料布和从山上取回腐殖质土备用。具体操作：先将塑料布裁成预定规格并用克霉灵消毒，铺于箱底及四周，按照料、菌、料、菌的顺序播种，最上层覆盖3cm厚的拌有白灰的腐殖质土，盖上塑料布。记录播种日期、出菇日期、温度及湿度。

1.3.3 室外床栽

春季室外床栽。试验地位于伊春市区北山，8林班15小班，以红松林为主，典型暗棕壤，下木毛榛，下草绣线菊，中坡。具体做法：先在林中空地按南北走向挖20cm深、宽100cm的沟，将脱去塑料袋的栽培种（1.0～1.1kg／袋）躺倒放于沟内，其上覆盖3cm的拌有白灰的土，盖上塑料布。用土压上，防止被风刮起。10d后，将塑料布揭起，在床上支拱形棚，以利于出菇。记录播种日期、出菇日期、出菇产量、温度及湿度。

2 结果与分析

2.1 生物学特性

2.1.1 温度对菌丝生长的影响。见图1。

图1 温度－菌丝生长量曲线图

图1显示，温度对菌丝生长的影响极为显著。菌丝生长的温度范围是5～25℃，28℃停止生长，最适温度是20℃（20～25℃）。

2.1.2 pH值对菌丝生长的影响

图2 pH值－菌丝生长量曲线图

从图2显示，pH值对菌丝生长影响极为显著。菌丝生长的pH范围是3.15～9.02，最适是7，其次是6、6.33。pH＜3.15时不生长。

2.1.3 四孢蘑菇对碳源的利用

由表1知，碳源对菌丝生长影响极为显著。菌丝生长的最佳碳源是麦芽糖、葡萄糖，其次是乳糖、淀粉，最差的是甘露醇和蔗糖。

2.1.4 四孢蘑菇对氮源的利用

表2 氮源对菌丝生长影响的多重比较结果 mm

从表2知，氮源对菌丝生长影响极为显著。菌丝除在尿素上不生长以外，其余均生长，最好的是酵母粉、硫酸铵、硝酸钾，其次是硝酸铵、蛋白胨。2.1.5 碳氮比对四孢蘑菇菌丝生长的影响

表3 碳氮比对菌丝生长影响的多重比较结果 mm

由表3得知，碳氮比对菌丝生长的影响不显著。比较而言，菌丝生长的最佳碳氮比为30∶1、60∶1，其次20∶1、40∶1、10∶1、50∶1，最差的是80∶1。

2.1.6 氧气对菌丝生长的影响

氧气对菌丝生长的影响不显著。菌丝在无氧条件下生长1.24mm／d、在有氧条件下0.9mm／d。

2.3 驯化栽培的结果

2.2.1 母种培养基的筛选

表4 不同培养基对菌丝生长影响的多重比较结果mm

从表4知：菌丝在不同培养基上生长差异性极为显著。在16号、11号培养基上生长最好，其次是PDA、4号、5号、PDA1，最差的是6号。

2.2.2 原种培养基的筛选

表5 不同原种培养基对菌丝生长影响的多重比较结果mm

由表5结果：不同原种培养基对菌丝生长的影响极为显著。在1号、8号培养基上生长最好；其次是3号 、2号 、7号 、9号 、10号 。

2.2.3 栽培种培养基的筛选

表6 不同栽培种培养基对菌丝生长影响的多重比较结果mm

通过表5知：不同栽培种培养料对菌丝生长的影响不显著。相对比较菌丝在15号、13号上生长最好；其次是12号、14号；最差的是17号。

2.2.4 袋栽试验

经室内及室外袋栽出菇试验，均未出菇。

2.2.5 四孢蘑菇驯化栽培的生物学效率

表7 人工栽培的产量及生物学效率

表7结果表明：四孢蘑菇的人工栽培是完全可以实现的。其生物学效率为38%。子实体形成生长阶段的温度范围13～27℃，最适是15～19℃。原基形成时期对空气湿度要求不高60%以上就可以，子实体分化及发育湿度范围是90%～95%。人工栽培必须熟料覆土，否则不能出菇。

3 结论

3.1 四孢蘑菇可人工栽培。

3.2 四孢蘑菇的生物学特性。

菌丝生长的温度范围是5～25℃，28℃停止生长，最适温度是20℃（20～25℃）；pH范围是3.15～9.02，最适是7，其次是6、6.33。pH＜3.15时不生长。最好碳源是麦芽糖、葡萄糖，其次是乳糖、淀粉，最差的是甘露醇和蔗糖；最好氮源是酵母粉、硫酸铵、硝酸钾，其次是硝酸铵、蛋白胨，最差的是尿素；最佳碳氮比为30∶1，其次20∶1、40∶1、10∶1、50∶1，最差的是80∶1；氧气对蘑菇菌丝生长的影响不显著，菌丝在生长初期对氧气的要求不严格，甚至比有氧条件下生长还要快，后期需求较多。

3.3 四孢蘑菇最佳培养基

母种最佳培养基：6号：葡萄糖20g，磷酸氢二钾0.1g，蛋白胨2g，硫酸镁0.5g，酵母浸膏1g，琼脂20g，磷酸二氢钾0.4g，水1000mL；11号：葡萄糖10g，麦芽糖10g，酵母膏4g，琼脂18g，水1000mL。

原种最佳培养基：1号：干麦粒99%，石膏1%；8号：玉米粒50%，木屑39%，麦麸10%，石膏0.5%。

栽培种最佳培养基：15号：马粪50%，棉壳48%，蔗糖0.5%，磷酸二氢钾0.5%，石膏1%；13号：干牛粪32%，棉壳65%，石膏1%，石灰2%。

3.4 四孢蘑菇子实体形成生长阶段的温度范围13～27℃，最适是15～19℃。原基形成时期对空气湿度＞60%，子实体分化及发育湿度范围是90%～95%。人工栽培的生物学效率为38%。四孢蘑菇袋栽不能出菇。人工栽培必须熟料覆土，否则不能出菇。

本次研究的是驯化栽培技术，在提高产量等方面还有待更深入的探究。

［1］ 杨新美.中国食用菌栽培学［M］.北京：农业出版社，1988：171.

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［3］ 罗心毅，洪江，张永民.花脸香蘑元素测定［J］.中国食用菌，2003，22（4）：43－44.

［4］ 方中达.植病研究方法［M］.北京：农业出版社，1979：60，86.