乙型肝炎病毒前S1抗原与HBV－DNA相关性分析

苑芳 王成龙 岳建芸 苟莹 鲁彦

乙型肝炎病毒前S1抗原与HBV－DNA相关性分析

苑芳 王成龙 岳建芸 苟莹 鲁彦

目的分析乙型肝炎病毒(HBV)前S1抗原与HBV－DNA含量在反映HBV复制方面的相关性。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和聚合酶联反应(PCR)方法分别检测414例乙型肝炎患者的HBV－PreS1抗原和HBV－DNA，比较检出率。结果414名患者中，HBeAg和HBV－PreS检测结果一致者64．5%，不一致者占36．5%，两种方法之间阳性率有统计学差异(χ2=53．33，P＜0．05);HBeAg和HBV－DNA同时阳性130人，占63．8%，不一致者占33．2%，两种方法检测阳性率之间有统计学差异(χ2=66．13，P＜0．05);HBV－DNA和HBV－PreS1检测结果一致者占94．9%，不一致者占5．1%，两种检测方法结果没有统计学差异(χ2=0．418，P＞0．05)。结论HBV－PreS1抗原与HBV－DNA呈高度相关，HBV－PreS1可作为HBV活动性复制指标。

乙型肝炎病毒前S1抗原乙型肝炎病毒e抗原乙型肝炎病毒DNA

材料与方法

1．标本来源:414例HBV感染者均来自笔者医院2010年8月～2011年2月门诊和住院患者，其中男性224例，女性180例。年龄6～89岁，平均年龄为36．3岁。乙型肝炎诊断依据，中华医学会肝病学分会和中华医学会感染病学分会2006年9月联合制定的《中国乙型肝炎防治指南》的标准「5」。

2．试剂与方法:(1)血清HBV标志物检测采用(ELISA)法:夹心法检测HBsAg、HBsAb，HBeAg、竞争法检测HBeAb、HBcAb，试剂为上海科华股份有限公司(生产批号: 201002022)。前S1抗原的检测采用(ELISA)法双抗体夹心法，试剂盒有上海科华股份有限公司生产(试剂批号: 201001014)。所有的操作过程均由熟练的技术人员严格按照规程操作。结果检测使用山东高密彩虹分析仪器有限公司生产的GF－M3000型酶标仪，采用双波长检测，主波长450nm，参考波长630nm，空白孔校零，读取OD值，结果判读依据配套说明书。(2)HBV－DNA检测:依据试剂盒说明样本提取，加入患者血清以及DNA提取液振荡混匀、沸水浴等，13000r/min离心提取HBV裂解产物;病毒扩增，依据说明书加入裂解产物、PCR反应液，Taq酶及UNG酶，加入已设定好循环条件的PCR扩增仪进行扩增检测。将扩增检测结果DNA拷贝数＞1×103定为阳性。

3．统计学方法:计数资料采用百分率表示，四格表卡方检验分析HBeAg、前S1抗原及HBV－DNA结果的相关性和差异，以P＜0．05为差异有统计学意义。

结果

1．414名乙型肝炎血清标志(5项)检测结果: 414名乙型肝炎患者中，大三阳(HBsAg，HBeAg，HB-cAb同时阳性)147例，占35．5%;小三阳(HBsAg HBeAb HBcAb同时阳性)171例，占41．3%;慢性肝炎(HBsAg，HBcAb同时阳性者)96例，占23．2%;HBeAg阳性组的HBV－PreS1和HBV－DNA检出率分别为84．3%和88．4%，HBeAg阴性组的HBV－PreS1和HBV－DNA检出率分别为47．9%和50.2%。50名健康体检者，检测结果均为阴性(表1)。

表1 414例乙肝患者的血清标志物和HBV－PreS1、HBV－DNA的分布［n(%)］

2．HBeAg和HBV－PreS1、HBV－DNA相关性:结果见表2。414名患者中，HBeAg和HBV－PreS1同时阳性124人，占30．0%;HBeAg和HBV－PreS1同时阴性139人，占33．6%;HBeAg阳性和HBVPreS1阴性23人，占5．6%，HBeAg阴性和HBVPreS1阳性128人，占30．9%。两种方法之间阳性率有统计学差异(χ2=53．33，P＜0．05)。414名患者中，HBeAg和HBV－DNA同时阳性130人，占31.4%;HBeAg和HBV－DNA同时阴性133人，占32．4%;HBeAg阳性和HBV－DNA阴性17人，占4.1%;HBeAg阴性和HBV－DNA阳性134人，占32．4%，两种方法检测阳性率之间有统计学差异(χ2=66．13，P＜0．05)。

表2 414例乙肝患者HBeAg和HBV－PreS1、HBV－DNA检测结果

3．PreS1和HBV－DNA相关性:414名患者中，HBV－DNA和HBV－PreS1同时阳性249人，占60.1%，两者同时阴性144人，占34．8%;HBV－DNA阳性HBV－PreS1阴性15人，占3．6%;HBV－DNA阴性HBV－PreS1阳性6人，占1．4%。两种检测方法结果没有统计学差异(χ2=0．418，P＞0．05，表3)。

表3 PreS1和HBV－DNA检测乙型肝炎患者结果

讨论

本实验结果表明:前S1抗原检测结果和HBVDNA检测结果之间具有高度相关性，可以作为观察病毒是否复制的实验室指标。HBV－DNA是反映病毒是否复制的金标准［5］。但HBV－DNA定量检测需要依赖昂贵的设备，且对检测环境和技术人员操作有较高的要求，限制了这些方法在基层单位的开展。Real time PCR检测收费标准比较昂贵;抗病毒治疗需要患者多次检测病毒载量，给患者造成一定的负担。相对而言，HBV－preS1价格便宜，设备要求简单，收费比较低，因此，我们考虑在患者可否在用药过程中能否用HBV－PreS1替代HBV－DNA。本实验结果表明，在HBeAg阳性、DNA病毒载量阳性(即复制拷贝数＞103)和HBsAg阴性、病毒载量阴性(即复制拷贝数＜103)者占所有检测患者60．9%，两种方法检测阳性率不一致;HBeAg阳性、HBV－PreS1阳性和HBeAg阴性、HBV－PreS1阴性占所有检测者63．8%，两种方法检测阳性率也不一致。提示HBeAg虽然也是传统的反映乙肝患者病毒是否复制的指标，但不能完全代表病毒复制的情况，还有相当部分病毒复制的患者(32．4%)HBeAg阴性。与此相反，HBV－PreS1和HBV－DNA检测阳性符合率高达94.9%，两种检测方法之间没有统计学差异。因此日常监测中，可以用HBV－PreS1替代HBV－DNA作为病毒是否复制的标志。

乙肝病毒外膜蛋白包括前S、前S1和前S2其3种成分，前S1蛋白在病毒侵入肝细胞过程中起重要作用，在病毒感染，复制和刺激机体产生免疫反应等方面起十分重要的作用，由于前S1只存在于具有传染性的完整的乙肝病毒颗粒上［5］。可表明HBVPreS1阳性是HBV存在和复制的一种新标志，且可弥补HBeAg和DNA的检测不足［6，7］。与HBV－DNA荧光定量PCR法相比，方法直接，操作简单，实验要求低，价格低廉，不需大型仪器。在没有条件展开HBV－DNA检测的中小型医院，可通过检测HBVPreS1作为HBV－DNA的替代实验，但在对待抗病毒治疗时必须综合分析，不能只依靠一个指标。在有条件的情况下同时进行HBeAg和HBV－PreS1检测，可提高检测敏感性，评估乙型肝炎疗效。

1庄辉．乙型肝炎流行病学研究进展［J］．国外医学:流行病学·传染病学分册，2004，31(3):133－135

2窦亚玲，李永哲，刘志肖，等．乙型肝炎病毒前S1抗原检测的临床价值［J］．中华检验医学杂志，2006，29(8):714－716

3黄江渝，郭平．血清乙肝病毒前S1抗原检测的临床意义［J］．重庆医学，2003，32(3):366－367

4郭亚光，楼大勇．乙肝前S1抗原与HBV－DNA，HBeAg(HBeAb)相关性的研究［J］．安徽医药，2007，11(5):444

5孙颖，辛绍杰，雷厉，等．乙肝病毒外膜大蛋白检测对于判定HBV DNA复制的意义［J］．世界华人消化杂志，2006，14(3):354－357

6李步荣，李丽华，李妙羡．乙肝病毒PreS1抗原的临床应用［J］．第四军医大学学报，2007，28(5):442－444

7高建国，周运恒，姚雯颖．前S1蛋白在检测乙型肝炎的研究进展［J］．医学综述，2003，9(6):361－362

(收稿:2011－12－26)

(修回:2012－02－16)

Correlation Analysis of HBV－PreS1Ag and HBV－DNA．

Yuan Fang，Wang Chenglong，Yue Jianyun，Gou Ying，Lu Yan．Department of Clinical Laboratory，The First Hospital of PLA，Gansu 730050，China

ObjectiveTo analyze the correlation of HBV－PreS1Ag and HBV－DNA．MethodsHBV－PreS1Ag and HBVDNA of 414 HBV patients and 50 non－HBV people were detected by ELISA and PCR．The detection rate was compared．ResultsThe detection rate of HBV－PreS1Ag and HBV－DNA in 414 HBV patients were 60．7%and 63．7%．The detection rate of HBV－PreS1Ag and HBV－DNA in HBeAg－positive group were 84．3%were 88．4%．The detection rate of HBV－PreS1Ag and HBV－DNA of HBeAg－negative group were 47．9%and 50．2%．ConclusionHBV－PreS1Ag and HBV－DNA were highly correlated．HBV－PreS1Ag is an index of HBV replication．

HBV－PreS1Ag;HBeAg;HBV－DNA

乙型肝炎是严重危害我国人民身体健康的传染病之一。流行病学调查显示，目前我国有1．2亿名乙型肝炎病毒(HBV)携带者，3000万名乙型肝炎患者［1］。长期以来临床通过检测HBV标志物作为感染HBV的诊断依据，并通过检测HBV－DNA观察抗病毒治疗疗效。随着对乙肝病毒研究的深入，越来越多的研究显示乙型肝炎病毒前S1抗原(简称前S1抗原，以下同)可以作为观察HBV抗病毒治疗疗效的指标，在一定程度上反映治疗的效果［2～4］。但前S1抗原和HBV－DNA相关性研究目前鲜有文献报道。笔者收集了414名HBV感染患者，同时检测了患者血清前S1抗原和HBV－DNA，对前S1抗原反映病毒载量的效果进行评价，为临床治疗HBV提供理论依据。

兰州大学中央高校基本科研业务费专项基金资助项目(lzujbky－290－146)

730030兰州，解放军第一医院检验科

鲁彦，电子信箱:lu73free@yahoo．com．cn