桑叶配方颗粒质量标准研究

2012-09-14胡昌江张秀环

中国药业 2012年19期

冯健，胡昌江，张秀环，罗旭

(四川新绿色药业科技发展股份有限公司·药研所四川成都 611930)

桑叶配方颗粒由桑科植物桑 Morus alba L.干燥叶制成，为棕黄色至黄棕色的颗粒，气微，味淡微苦，具有疏散风热、清肺润燥、清肝明目的功效，用于风热感冒、肺热燥咳、头晕头痛、目赤晕花等症。为有效控制配方颗粒的质量，按照国家食品药品监督管理局颁发的《中药配方颗粒管理暂行规定》通知要求，借鉴2010年版《中国药典(一部)》桑叶项下的鉴别和含量测定方法[1]，参考有关文献，采用薄层色谱(TLC)法对桑叶配方颗粒进行定性鉴别，采用高效液相色谱(HPLC)法对桑叶配方颗粒中的芦丁进行含量测定。现报道如下。

1 仪器与试药

Waters 2695－2996型高效液相色谱仪;Empower色谱工作站;BP －211D 型电子天平(Sautoris，德国，d=0.1 mg/0.01 mg，max=210 g/80 g);KQ3200B型超声波清洗器(昆山市仪器有限公司)。桑叶配方颗粒(本公司产品);芦丁对照品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号为100080－2007);水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 定性鉴别

取本品 0.5 g，精密称定，加甲醇 20 mL，超声处理 20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL，作为供试品溶液。取桑叶对照药材 0.5 g，加水 60 mL，煮沸 30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇20 mL同法制成对照药材溶液。以甲醇的水溶液作为空白溶液。照薄层色谱法[2010年版《中国药典(一部)》附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯－乙酸乙酯－甲酸(5∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(365 nm)下观察。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。见图1。

图1 桑叶配方颗粒薄层色谱图

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:迪马公司Diamonsil C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:以甲醇为流动相 A，以0.5%磷酸溶液为流动相B，按表1中的规定进行梯度洗脱;检测波长:358 nm。理论板数按芦丁峰计算应不低于5 000。高效液相色谱图见图2。

表1 流动相梯度比例表

图2 高效液相色谱图

2.2.2 溶液制备

取本品约1.0 g，精密称定，置圆底烧瓶中，加入甲醇50 mL，加热回流30 min，滤过，滤渣再用甲醇50 mL，同法提取2次，合并滤液，减压回收溶剂，残渣用甲醇溶解，转移至25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。取芦丁对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含0.1 mg的溶液，即得对照品溶液。

2.2.3 方法学考察

线性关系考察:精密吸取芦丁对照品溶液(质量浓度为0.092 4 g/L)，分别进样 2，4，6，8，10 μL，测定峰面积，以峰面积值(Y)对进样量(X，μg)进行回归，得标准曲线方程 Y=1×106X+23 921，r=0.999 6(n=5)。结果表明，芦丁进样量在0.184 8～0.924 0 mg范围内与峰面积积分值线性关系良好。

精密度试验:精密吸取芦丁对照品溶液10 μL，重复进样5次，测定峰面积。结果芦丁峰面积的 RSD=1.35%。

重复性试验:取同一批号样品5份，分别按样品的测定方法在给定的色谱条件下进行测定。结果芦丁含量的 RSD为1.50%。

稳定性试验:取桑叶配方颗粒供试品，置室温下放置，于不同时间取混合溶液 10 μL进样，测定峰面积。结果的 RSD为0.97%，结果表明芦丁在8 h内稳定。

加样回收试验:精密称取已知含量同一批号的样品，精密称定，然后精密加入一定量芦丁对照品，按供试品溶液的制备方法制备溶液，按上述测定方法进行测定，计算回收率。结果见表1。