气相色谱－质谱联用定性检测保健食品和中成药中非法添加的镇静催眠类药物＊

朱小红，马鹏飞，徐 翔

(陕西省食品药品检验所，陕西 西安 710061)

随着现代社会生活压力的逐渐加大，越来越多的人面临失眠的困扰，安神类保健食品及中成药的市场需求日益增长。某些不法厂商为了增强改善睡眠功效、牟取暴利，在安神类保健食品及中成药中非法添加镇静催眠药，但长期服用含有镇静催眠类药物的保健食品及中成药，会严重影响身体健康[1]。镇静催眠类药物最常用的检测方法主要有薄层色谱法[2]、高效液相色谱(HPLC)法[3]、高效液相色谱 － 质谱 /质谱(HPLC －MS/MS)法[4]、气相色谱氮磷检测法[5]和气相色谱－质谱(GC－MS)法[6]，但多见于某一类药物在尿样或血样中的分析，未见有系统的研究方法，尤其是保健食品和中成药中的检测方法报道。GC－MS联用技术以其特有的优势在非法添加药物检测中发挥着重要的作用。它同时具有气相色谱高分离性能及质谱准确鉴定化合物结构的特点，利用计算机谱库检索技术，可以不用标准品对照就可推测最大可能的药物结构，此时如再用标准化合物进行比较，既快速又准确。为此，笔者建立了定性检测保健食品及中成药中非法添加的镇静催眠类药物的GC－MS法，现报道如下。

1 仪器与试药

岛津GCMS－QP2010型气相色谱－质谱联用仪;NIST05，NIST05s，WILEY7标准质谱库;DB－5 ms毛细管色谱柱;低温冷冻高速离心机(Anke－GL－20G，上海安亭科学仪器厂);氮气吹干装置(MTN－1800W，Auto Science)。巴比妥(批号为 171220－200602)、异戊巴比妥(批号为 171221 －200402)、奥沙西泮(批号为 171229－200603)、劳拉西泮(批号为 171253 －200401)、地西泮(批号为 171225 －200903)、氯氮(批号为 171248－200301)、咪哒唑仑(批号为 171250－201002)、硝西泮(批号为 171217－200402)、氯硝西泮(批号为171227－200302)、艾司唑仑(批号为1219 －0102)、阿普唑仑 (批号为 1218－9702)、三唑仑 (批号为17230－200602)12种对照品，均购于中国药品生物制品检定所;司可巴比妥(批号为9201)、苯巴比妥(批号为171222－200504)2种对照品，购自国家麻醉实验室;氯仿、丙酮、无水乙醇均为分析纯;20批样品均为市售品。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:采用DB－5 ms弹性石英键合毛细管色谱柱(30 m×0.25 mm × 0.25 μm);程序升温条件:初始温度 120 ℃ ，保持1 min，以10℃ /min升温至230℃，以15℃ /min升温至270℃，保持 20 min;分流比 5 ∶1;载气(He，纯度大于 99.99%)流速1.7 mL/min;进样口温度280℃;接口温度300℃;采用恒压模式，柱压135 kPa;进样量1 μL。质谱条件:电子轰击电离源(EI，70 ev)温度为250℃;Scan模式采集，扫描的质量范围40～350 amu，溶剂延迟时间2.5 min。在此条件下，14种对照品溶液的色谱图见图1，质谱图见图2。

图1 序号1－14的对照品全扫描色谱图

2.2 溶液配制

对照品溶液:各取14种对照品适量，根据表1分别选择无水乙醇、氯仿作为溶剂，制成每1 mL中含1 mg的对照品贮备液，临用时加氯仿稀释至50 μg/mL。供试品溶液:取样品(胶囊取2粒内容物，片剂取4片，颗粒剂取1袋，均研细;软胶囊取2粒内容物)，分别加无水乙醇、氯仿各10 mL超声处理20 min，3 000 r/min离心5 min，取5 mL上清液，置另一干燥试管中，氮气流吹干，再各自用1 mL无水乙醇、氯仿溶解，经0.45 μm针头滤器过滤后，待进样分析;取样品[口服液取10 mL，糖浆取5 mL，酒剂取10 mL(蒸去乙醇)]，加水10 mL，加氯仿振摇提取3次，每次10 mL，合并氯仿提取液，离心5 min，取上清液经氮气流吹干，再各自用1 mL无水乙醇、氯仿溶解，经0.45 μm针头滤器过滤后，待进样分析。

2.3 方法学考察

方法灵敏度:取2.2项下各对照品溶液适量，加氯仿分别稀释制成 20.0，10.0，5.0，2.0，1.0，0.5 μg/mL 的检测限试验溶液，按2.1项下条件进样分析。结果各对照品定量限均在0.5～5 ng之间(见表1，S/N=10∶1)，可满足定性筛查的需要。

专属性:选用固体样品(胶囊剂、片剂、颗粒剂、软胶囊)和口服液等中成药或保健食品制剂各1批，并另取以上样品各1份，分别添加14种对照品混合溶液(各0.1 g/L)1 mL，按拟订的方法处理和测定，比较色谱及质谱图。结果只在个别样品色谱图中出现与部分对照品保留时间接近的色谱峰，经与对照品质谱碎片离子比对和谱库检索后，即排除其干扰;拟检的14种镇静催眠类药物能与普通制剂中共存物质区分。

适用性试验:试验中另选择了HP－5 ms毛细管色谱柱以及不同批号的DB－5 ms和Rtx－5 ms色谱柱，并对程序升温方式和离子源温度等进行了改变，各测试结果能够通过设计的系统适用性试验，说明该检测方法对可变试验因素的抗干扰能力较强。

方法重复性:取各对照品溶液，依法进样6次。结果保留时间的 RSD为0.25%，质谱碎片离子一致。

2.4 样品检测

本研究共收集安神类保健食品及中成药20批(样品来源于企业或由患者提供和从市场购买)。采用Scan模式得到全质谱图后，进行质谱定性，初步确定可疑样品，进而根据各目标物的保留时间和表1中的特征离子，采用SIM模式在不同时间段选择不同的特征离子进行扫描、定量。

表1 标准谱库信息

3 讨论

文中所选的14种镇静催眠类药物极性较弱，熔点低，加热易挥发，一般选用弱极性或中等极性毛细管色谱柱，程序升温分离。从GC－MS总离子流图可以看出，对照品混合溶液中的14种化合物具有良好的分离度，满足色谱分离要求。14种化合物的质谱采集后首先进行保留时间比对，再与标准质谱库NIST05，NIST05s，WILEY7数据检索结果相对照，确认结构，初步判断出所含化学药物种类，必要时利用对照品确证。

巴比妥类药物为丙二酰脲的衍生物，其结构通式中R1和R2多为烷基取代基，取代基不同，药物的药理性质有所不同。根据作用时间分为3类:长效(6～8 h)，如巴比妥、苯巴比妥;中效(3～6 h)，如戊巴比妥;短效(1～3 h)，如司可巴比妥。根据4种巴比妥类药物化合物的质谱图，其质谱裂解行为推断如下:首先，化合物在电子的轰击下失去1个电子，产生分子离子峰(M+)，由于分子具有酰脲类结构，使化合物更易发生裂解而脱掉相应的碎片。如巴比妥和异戊巴比妥由于含有碳链，容易发生碳－碳键的α裂解和γ－H重排后，再发生β断裂脱去中性分子，产生2个丰度较高的离子，其中1个为基峰(m/z 156)，然后发生开环裂解，但作用较弱，产生较弱的离子峰(m/z 141)。苯巴比妥由于具有苯环和酰脲环，2个六元环具有共轭作用，从而更容易在碳链处发生碳－碳键的α裂解和γ－H重排后，再发生β断裂脱去中性分子，产生较强的离子峰(m/z 204)。

根据各化合物总离子流图上的色谱保留时间及提取相应的质谱图，对非法添加的化合物进行鉴定，同时将其质谱图存入自建的数据库，为以后非法添加化合物的检测和鉴定打下了基础。

本试验尝试建立安神类保健食品及中成药中添加镇静催眠类化学药品的检测方法，该方法简单、灵敏度高、稳定性好，完全可以满足对非法添加化学药品的检测要求，为建立此类标准和监控方法提供了依据。

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