高效液相色谱法测定心可舒片中丹参素钠和原儿茶醛含量

屈 蓉，仇雅静，陈骁鹏，叶 慧

(江苏省泰州市食品药品检验所，江苏 泰州 225300)

心可舒片为2011年江苏省评价性抽样品种之一，收载于2010年版《中国药典(一部)》[1]，由丹参、葛根、三七、山楂、木香5味药组方。丹参具有活血化瘀、通经止痛、清心除烦、凉血消痈的功效，为心可舒片的主药之一。生产工艺中，丹参为加水煎煮两次，合并煎液，滤过，滤液浓缩使用。丹参素钠和原儿茶醛为丹参的主要水溶性成分[2]，这两者的测定方法主要有分光光度法、薄层扫描法、高效液相色谱法、毛细管电泳法、电化学法、毛细管电色谱法和微流控芯片法[3]。标准中仅对原儿茶醛进行了薄层鉴别，未对其含量进行质量控制。考虑到基层检验检测单位仪器的普及性，采用高效液相色谱法对丹参中的水溶性成分丹参素钠、原儿茶醛进行含量测定，为全面控制心可舒片的质量提供了可靠依据，现报道如下。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪(Waters2695/2996/Empower色谱系统)。丹参素钠对照品、原儿茶醛对照品(供含量测定用，中国药品生物制品检定所，批号分别为110855－200809和110810－200506)；心可舒片(山东沃华医药科技股份有限公司)；甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Waters Symmetry C18柱(150mm×3.9mm，3.5μm)；流动相：甲醇－0.5%醋酸溶液(10∶90)；检测波长：280 nm；流速：1.0mL/min；柱温：35℃；进样量：10μL。

2.2 溶液制备

精密称取丹参素钠对照品25.03 mg，置50 mL量瓶中，加50%甲醇溶解并定容至刻度，作为对照品贮备液A。精密称取原儿茶醛对照品10.56mg，置100mL量瓶中，加50%甲醇溶解并定容至刻度，作为对照品贮备液B。取样品约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇25mL，密塞，称定质量，超声处理30min，放冷，再称定质量，用50%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，即得供试品溶液。取除丹参外的处方药材，参照制剂生产工艺制备阴性样品，按照供试品溶液制备方法制备，即得阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

干扰试验：分别吸取线性关系考察项下的对照品混合液、上述供试品溶液和阴性对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪，结果见图1。供试品溶液中丹参素钠、原儿茶醛达到基线分离，阴性对照品溶液无干扰，基线稳定，方法可行。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察：取对照品贮备液A，分别精密吸取2，4，6，8，10mL，置20mL量瓶中；另取对照品贮备液B，分别精密吸取1，3，5，7，9mL，置上述相应的20mL量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，制成对照品混合液。分别进样10μL，在上述色谱条件下，测得峰面积。以峰面积 Y为纵坐标、对照品质量浓度 X(μg/mL)为横坐标绘制标准曲线。得丹参素钠回归方程为 Y=5 076.8 X+ 17 337，r=0.999 1(n=5)，线性范围为50.06～250.30μg/mL；原儿茶醛回归方程为 Y=39 492X－17 395，r=0.999 5(n=5)，线性范围为5.28～47.52μg/mL。

检测限确定：分别取质量浓度为100.12μg/mL的丹参素钠和15.84μg/mL的原儿茶醛对照品溶液，稀释至适当质量浓度，按信噪比3∶1计算检测限。本色谱条件下，丹参素钠检测限为9.34μg/mL，原儿茶醛检测限为1.76μg/mL。

精密度试验：精密吸取线性关系考察项下第2个质量浓度的标准曲线对照品溶液10μL，重复进样5次，在拟订的色谱条件下进行测定。结果丹参素钠的 RSD为0.7%(n=5)，原儿茶醛的RSD为0.5%(n=5)。

重复性试验：精密称取批号为110449的样品5份，依法制备供试品溶液，进样测定。结果丹参素钠的 RSD为1.1%(n=5)，原儿茶醛的RSD为1.3%(n=5)。

稳定性试验：精密吸取批号为110449的供试品溶液10μL，按上述色谱条件，分别于0，2，4，8，12，24 h时各进样1次，进行测定。结果丹参素钠的 RSD为1.0%，原儿茶醛的 RSD为1.2% (n=6)，表明供试品溶液在24 h内稳定。

加样回收试验：取批号为110449的样品5份，每份约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入对照品贮备液A 3mL、对照品贮备液B 2mL，按供试品溶液制备方法制备，在上述色谱条件下，进行测定，计算加样回收率。结果见表1。

表1 加样回收试验结果(n=5)

2.4 样品含量测定

精密称取不同批号的15批样品，按供试品溶液制备方法制备，在上述色谱条件下，进行含量测定。结果见表2。

表2 样品含量测定结果(mg/片)

3 讨论

将丹参素钠和原儿茶醛对照品溶液分别在200～400 nm波长范围内进行紫外吸收扫描，丹参素钠在282 nm波长处有最大吸收，原儿茶醛在278 nm波长处有最大吸收。综合考虑，选用280 nm作为检测波长。

试验中用甲醇和50%甲醇作为溶剂并进行比较，结果显示，前者结果明显优于后者，故选用50%甲醇作为溶剂。选用25mL和50mL 50%甲醇作溶剂进行考察，所测结果无明显差异，从环保节约的角度出发，选用25 mL作为提取量。考察了20，30，45 min 3个时间点，结果显示，超声提取30min所测结果高于提取20min，且与45min无明显差异，故选择超声处理30min。

对15个批号的样品中丹参素钠和原儿茶醛含量之和进行标准差计算，得 RSD为36.5%，说明各个批号的差异性较大，说明有必要增加此项目对产品进行质量控制。今后还可进一步开展心可舒片中丹参指纹图谱的研究工作。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京：中国医药科技出版社，2010：604－605.

[2]张文生，叶正良，岳洪水，等.丹参药材指纹图谱研究[J].中药材，2001，24(7)：478－480.

[3]吴小林，钟晓维，李偶连，等.微流控芯片对丹参滴注液中丹参素和原儿茶醛的测定[J].分析测试学报，2008，27(8)：885－887.