祛脂保肝胶囊质量标准研究

李家楼

(江苏省连云港市中医院，江苏 连云港 222004)

祛脂保肝方是我院使用多年的疗效确切的协定处方，由青黛、白术、明矾、玉米须、生山楂、郁金、丹参、泽兰、泽泻、醋柴胡、草决明、党参、滑石、甘草等组方，具有祛湿化痰、疏肝利胆、活血化瘀的功效，用于酒精性或非酒精性单纯性脂肪肝及脂肪性肝炎[1]，并具有一定的减肥功效。将该方制备成胶囊剂，具有服用方便、便于保存的优点。为保证制剂质量及临床用药的安全有效，本试验对该制剂的质量标准进行了研究，报道如下。

1 仪器与试药

STEMI2000－C型立体显微镜、Agilent1200型高效液相色谱仪、恒温水浴箱、电子分析天平(上海精密科学仪器有限公司分析仪器总厂)、KQ－5007DB型高频数据超声波清洗器(上海顾村电光仪器厂)。丹参酮ⅡA对照药品(批号为110766－200417，供含量测定用)、白术对照药材(批号为120925－200407，供鉴别用)、靛蓝对照品(批号为0716－9403，供鉴别用)、靛玉红对照品(批号为717－200204，供鉴别用)均由中国药品生物制品检定所提供;薄层层析硅胶G(60型)(中国青岛海洋化工集团公司);羧甲基纤维素钠(上海化学试剂站);大孔吸附树脂D101(国药集团化学试剂有限公司);其他试剂均为分析纯;祛脂保肝胶囊(连云港市中医院制剂室，批号分别为 20090302，20091017，20100426)。

2 方法与结果

2.1 处方与制备工艺

处方:青黛 10 g，明矾 3 g，草决明 15 g，生山楂 15 g，醋柴胡10 g，郁金 10 g，丹参 15 g，泽兰 15 g，泽泻 15 g，党参 10 g，白术15 g，玉米须 10 g，滑石 10 g，甘草 2.5 g。

制备工艺:以上14味，取丹参10 g、泽泻10 g、白术10 g、郁金5 g、明矾粉碎成细粉;剩余丹参、白术与郁金加80%乙醇回流提取2次，提取液回收乙醇，减压浓缩至相对密度1.35(80℃)，备用;丹参等药渣与剩余泽泻、滑石、青黛、草决明、醋柴胡、泽兰、党参、生山楂、玉米须、甘草加水煎煮3次，第1次加8倍水煎煮2 h，第2次加7倍水煎煮1.5 h，第3次1 h，滤过合并3次煎液，浓缩成稠膏，上述2种浸膏与粉末混匀，低温干燥，粉碎，制粒，装入胶囊，即得;每粒0.45 g，每瓶60粒。

2.2 定性鉴别

白术、丹参的显微鉴别:将内容物制成装片置显微镜下观察，菊糖呈扇形，散在或存在于薄壁细胞中。有网纹及具缘导管，直径16～56 mm;导管分子短，有的长仅50μm，单穿孔大小不一。纤维多成束，呈长梭形，末端长尖式稍倾斜，直径18～25μm，壁厚2～4μm，纹孔斜裂缝状孔沟较稀。木栓细胞黄棕色，表面观呈类方形或多角形，壁稍厚，弯曲或平直，胞腔内常含红棕色色素，经水合氯醛液透化后色素溶解。单个散在或成对的石细胞，近无色或淡黄色，呈类圆形，直径20～65μm。见图1。

图1 显微鉴别图

青黛的薄层色谱鉴别[2]138，[3]:取本品内容物1 g、不含青黛的阴性样品1 g，分别加三氯甲烷5mL，充分搅拌，静置滤过，滤过液即为供试品溶液和阴性对照品溶液;再分别称取靛玉红、靛蓝对照品5mg，加5mL三氯甲烷溶解成对照品混合溶液。参照薄层色谱法试验，将上述3种溶液各吸取6μL，分别点于同块硅胶G薄层板上，用苯－三氯甲烷－丙酮(5∶4∶1)展开，取出，晾干。供试品溶液色谱中，在和2种对照品溶液色谱的相应处显现同样的蓝色和浅紫红色斑点。阴性对照品溶液没有斑点[4]。

白术的薄层色谱鉴别[2]68，[5]:取本品内容物0.5 g、不含白术的阴性样品0.5 g，分别加乙醚30 mL，在水浴中加热回流1 h左右，冷却滤过，滤液水浴蒸干，残渣用1 mL乙酸乙酯溶解，分别作为供试品溶液及阴性对照品溶液;再称白术药材0.5 g，同上法制成对照品溶液，参照薄层色谱法，将上述新配制的3种溶液各吸取6μL，分别点于同块硅胶G薄层板上，用石油醚(60～90℃)－乙酸乙酯(50∶1)展开，取出，晾干，以5%香草醛硫酸溶液为显色剂，酒精灯加热至斑点清晰。供试品溶液色谱中，与对照品(白术)溶液色谱位置相同处，显现的斑点颜色及位置相同，并有一处对应桃红色主斑点(苍术酮);阴性对照品溶液相同位置无斑点。

丹参的薄层色谱鉴别[2]52:取本品内容物1 g，不含丹参的阴性样品1 g，分别加乙醚约10mL，振摇充分后静置1 h左右，滤液蒸干，用乙酸乙酯1mL溶解残渣，残渣溶液作为供试品溶液及阴性对照品溶液;另称取丹参酮ⅡA对照品约2mg，用1mL乙酸乙酯溶解，作为对照品溶液。参照薄层色谱法，各吸取3种溶液5μL。分别点于同块硅胶G薄层板，用苯－乙酸乙酯(19∶1)展开。供试品溶液色谱中，和对照品溶液色谱在相同的位置上显暗红色斑点，阴性对照品溶液无此斑点。

2.3 丹参酮ⅡA含量测定[6－7]

2.3.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶;流动相:甲醇－水(75∶25);检测波长:270 nm。丹参酮ⅡA峰计算理论板数应不低于2 000[9]。高效液相色谱图见图2。

图2 高效液相色谱图

2.3.2 溶液制备

用分析天平精密称取丹参酮ⅡA对照品10.346mg，移于50mL棕色量瓶中，缓慢用甲醇加至刻度，摇匀;再从中精密吸取2mL，移于25mL棕色量瓶中，用甲醇加至刻度，摇匀，即为对照品溶液。取约3 g祛脂保肝胶囊或不含丹参的阴性样品内容物，研细后取出精密称定，移于具塞锥形瓶中，再精密放甲醇50mL，精密称定质量，水浴加热回流1 h左右，冷却至室温，用甲醇补充减失的质量，轻轻摇匀，滤过，滤液即为供试品溶液或阴性对照品溶液[8]。

2.3.3 方法学考察

参照2.3.2项下方法制备对照品溶液，实际对照品溶液浓度计算为 16.554 μg/mL，精密吸取该溶液，分别进样 5，10，15，20，25 μL，即相当于丹参酮ⅡA0.082 76，0.166 11，0.248 25，0.330 68，0.413 82 μg，测定峰面积，以丹参酮ⅡA进样量为横坐标(X)、峰面积(Y)为纵坐标进行线性回归，得回归方程 Y=6 141.8X－11.989(r=0.999 3，n=5)。

精密度试验:取质量浓度为16.554μg/mL的丹参酮ⅡA对照品溶液10μL依法，连续进样6次，测定其峰面积。结果 RSD=0.22%，表明仪器精密度良好。

重复性试验:取装量差异项下的本品，研细，取约1 g(约相当于原药材的3 g)，精密称定，置圆底烧瓶中，依法制备溶液，平行试验5份，进样量10μL，测定其丹参酮ⅡA的含量。结果 RSD=0.78%，表明方法重复性良好。

稳定性试验:取供试品溶液适量，每隔2 h进样10μL测定峰面积值。结果的 RSD=0.68%，表明供试品溶液在8 h内稳定。

加样回收试验:精密吸取丹参酮ⅡA含量为0.38mg/g的样品，依法制备溶液，共6份，每份约1 g，分别置圆底烧瓶中，再精密加入质量浓度为16.554μg/mL的丹参酮ⅡA对照品溶液1mL，按供试品溶液制备方法制得供试液(最后定容至25 mL)，摇匀，分别取样10μL注入液相色谱仪中，条件同上，测量丹参酮ⅡA的含量。结果见表1。

表1 丹参酮ⅡA加样回收试验结果(n=5)

2.3.4 样品含量测定

分别取3批样品，依法制备溶液，分别测定含量。结果见表2。

表2 样品含量测定结果(n=3)

3 讨论

祛脂保肝胶囊中以丹参祛瘀活血通络为君药;草决明润肠通便，泽泻、白术、党参健脾益气、燥湿利水，玉米须利水消肿、平肝利胆，为臣药;泽兰活血化瘀，山楂、郁金行气散瘀，青黛、明矾、醋柴胡、甘草、滑石清热解毒，共为佐药。诸药合用，祛湿化痰，疏肝利胆，活血化瘀，疗效显著。制成胶囊，从而减少了服用剂量、掩盖药物不良气味、提高了药物生物利用度，同时利于保存。

采用薄层色谱法对青黛、白术、丹参进行定性鉴别，以标准品作为对照，具有快速简便的特点。

在祛脂保肝胶囊的定量质量控制中，采用高效液相色谱法对祛脂保肝胶囊所含的丹参酮ⅡA进行了含量测定，并采用甲醇回流提取溶解法，提取溶解有效成分[10]。结果表明，方法比较稳定、回收率也较高，并且具有一定专属性。

本试验对祛脂保肝胶囊中主要药物青黛、白术、丹参采用薄层色谱法进行了定性鉴别，并进行了阴性对照;用高效液相色谱法对丹参中的丹参酮ⅡA进行了含量测定。综上所述，本试验所使用的定性和定量测定法方法简便、有较强专属性，可以作为祛脂保肝胶囊的质量控制方法，从而保证祛脂保肝胶囊临床上安全有效。

[1]张 帆，苏淑贞，卓仲芬.丹参治疗肝病的相关性研究[J].现代中西医结合杂志，2009，18(13):1 556.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社，2005:138.

[3]程力惠，李晓蒙.青黛的质量鉴别[J].中医药导报，2006，12(12):77，78.

[4]游勇基，黄碧云.青黛中靛玉红含量测定方法的研究[J].海峡药学，2007，19(12):38.

[5]叶 燕，程雪梅.白术药材的薄层色谱研究[J].时珍国医国药，2009，20(7):1 702.

[6]丰艳梅，马小亚，王美纳，等.HPLC法测定颈康宁胶囊中丹参酮ⅡA的含量[J].西北药学杂志，2008，23(1):10.

[7]梁奋新，李洪亮，梁亚君，等.高效液相色谱法测定冠心汤中丹参酮ⅡA的含量[J].山西医药杂志，2009，38(3):216.

[8]刘叶峰，邱根全，蔡 云，等.不同剂量丹参酮ⅡA丹参注射液治疗肝硬化的临床观察[J].第四军医大学学报，2009，30(7):658.

[9]蒋学华，许启荣，罗 娟.高效液相色谱法测定复方丹参片中丹参酮ⅡA的含量[J].华西药学杂志，1996，11(2):102.

[10]刘媛文.丹参中丹参酮ⅡA提取纯化技术研究[J].云南中医中药杂志，2008，29(4):46.