松茸乙醇提取物对小鼠S180肉瘤生长的抑制作用

刘 刚 王 辉 张 洪 周本宏

武汉大学人民医院药学部，湖北武汉 430060

松茸（Tricholoma matsutake）亦称松蕈、合菌、松蘑（朝鲜族）、松口蘑等，是担子菌纲伞菌目口蘑科（Tricholomataceae）口蘑属（Tricholoma）的一种与松树共生外生菌根真菌。在我国东北地区的吉林省以及西南地区的云南、四川、西藏都有分布。松茸菌肉肥厚，香气宜人，味道鲜美，具有较高的营养价值和药用价值，曾被誉为“食用菌之王”[1-3]。松茸具有很高的药用价值及多种生物活性。据文献报道，松茸具有抗肿瘤、抗菌、抗病毒、抗真菌、抗糖尿病、抗炎等功效[4]，在27 种担子菌抗肿瘤食用菌中，其抗肿瘤活性居第2 位[5]。

松茸作为一种具有显著抗肿瘤活性的食用菌，具有广阔的开发前景，据文献报道松茸中具有抗肿瘤活性的成分主要是多糖类化合物[5-7]，课题组对松茸抗肿瘤活性部位进行研究的过程中，发现醇提部位MTX也能抑制肿瘤细胞的增殖，同样具有较强的抗肿瘤活性，其活性成分及作用机制值得深入研究。

1 材料与方法

1.1 材料

小鼠肉瘤S180 腹水型肿瘤细胞由武汉大学基础医学院提供；环磷酰胺粉针（200 mg/支，批号：10102122），由江苏恒瑞医药股份有限公司生产；昆明种小鼠，雄性，体重18～22 g，购自武汉大学动物中心，合格证号：4200592711。

1.2 方法[8-9]

1.2.1 松茸乙醇提取物的制备 取松茸约5kg，适当粉碎，分次置5000 mL圆底烧瓶中，用10 倍量95%乙醇回流提取3次，每次分别为3、2、2 h，纱布过滤，合并滤液，减压回收乙醇，继续浓缩，得松茸乙醇提取物浸膏约100.82 g。

1.2.2 小鼠移植瘤模型的建立 将S180 小鼠腹水型肿瘤细胞株接种于腹腔，于7 d后脱颈椎处死，用75%乙醇浸泡消毒，无菌抽取腹水瘤细胞，调整细胞浓度为1.3 ×107/mL，将0.2 mL细胞悬液无菌皮下接种于昆明种小鼠左后肢，观察小鼠生长情况，在接种后第6 天全部出现瘤块，小鼠移植瘤模型建立成功。

1.2.3 实验动物分组及给药 将小鼠随机分为5 组，每组10只，即肿瘤模型组、阳性对照组及松茸乙醇提取物大、中、小剂量组。肿瘤模型组按剂量10 mL/kg灌胃给予0.5%CMC，阳性对照组按剂量50 mg/kg灌胃给予环磷酰胺，松茸乙醇提取物大、中、小剂量组以1 000、500、250 mg/kg的剂量灌胃给予松茸乙醇提取物；每日1次，连续10 d，实验过程中让小鼠自由进食和饮水，第11 天停药。

1.3 观察指标

将小鼠称取体重后脱颈处死，分离肿瘤块、脾脏和胸腺组织，称取肿瘤重量，分别计算各组小鼠体重变化平均值、脾脏及胸腺质量分数、肿瘤生长抑制率。肿瘤生长抑制率=（模型组平均瘤重-给药组平均瘤重）/模型组平均瘤重×100%。各组肿瘤组织标本按照常规方法固定，包埋和切片，HE染色进行观察。

1.4 统计学方法

采用SPSS 12.0统计软件进行统计学分析。计量资料数据以均数±标准差（±s）表示，采用方差分析，两组间比较采用t检验。以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 实验动物的生长情况

昆明小鼠接种S180 后，从生长情况来看，肿瘤模型组小鼠精神状态较差，进食量显著减少，行动呆滞，皮毛无光泽。而阳性对照组及松茸乙醇提取物给药组的小鼠，其进食量及运动状态均好于肿瘤模型组，皮毛顺滑。给药前后各组小鼠体重变化见表1。由表1 可见松茸乙醇提取物大、中、小剂量组及阳性对照组小鼠体重与肿瘤模型组比较，差异均无统计学意义（均 P>0.05）。

表1 松茸乙醇提取物对S180小鼠体重的影响（±s，g，n=10）

表1 松茸乙醇提取物对S180小鼠体重的影响（±s，g，n=10）

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2.2 对免疫器官质量的影响

实验对动物脾脏质量分数和胸腺质量分数的影响结果见表2。由表2 可知，阳性对照组与肿瘤模型组比较，差异有统计学意义（P<0.05），松茸乙醇提取物各剂量组与肿瘤模型组比较，差异均无统计学意义（均P>0.05）。

表2 松茸乙醇提取物对S180小鼠免疫器官质量分数的影响（±s，n=10）

表2 松茸乙醇提取物对S180小鼠免疫器官质量分数的影响（±s，n=10）

注：与肿瘤模型组比较，*P<0.05

组别 给药剂量（mg/kg）脾脏质量分数（×10-3）胸腺质量分数（×10-3）肿瘤模型组阳性对照组松茸乙醇提取物大剂量组中剂量组小剂量组20 mL/kg 50 5.86±2.31 3.59±1.40*2.03±0.70 1.21±0.19*1 000 500 250 6.02±1.655.98±1.86 6.15±1.79 2.65±0.86 2.47±0.67 2.55±0.77

2.3 对小鼠S180 肉瘤的生长抑制作用

松茸乙醇提取物大、中剂量组小鼠瘤重与肿瘤模型组比较显著降低，差异均有统计学意义（均P<0.05），且肿瘤抑制率均高于30%。松茸乙醇提取物小剂量组小鼠瘤重与肿瘤模型组比较有下降趋势，但差异无统计学意义（P>0.05）；各剂量组对小鼠S180 肉瘤生长的抑制作用见表3。

2.4 小鼠S180 肉瘤组织病理学观察

肉瘤组织经HE染色后于显微镜下观察，肿瘤模型组肿瘤细胞生长旺盛，侵犯深层肌肉组织，大量新生血管形成，肿瘤细胞大小不一，细胞核有较为明显的异型性，可见瘤组织呈片状或巢状生长，无明显坏死，并可观察到癌巢之间微血管较为丰富，周围有不同程度的炎症细胞浸润；阳性对照组有明显的肿瘤细胞坏死区域，瘤组织呈团状或片状生长，癌细胞核浆比例较肿瘤模型组小，染色较浅，核型较规整，可见不同程度的片状坏死区及大量核碎裂，伴白细胞浸润；松茸乙醇提取物大剂量组可见部分片状坏死区域，且瘤组织内微血管减少，周围有不同程度的炎症细胞浸润。见图1。

表3 松茸乙醇提取物对小鼠S180肉瘤生长的抑制作用（n=10）

3 讨论

目前临床常用的肿瘤放化疗药物大多具有毒副作用，对人体正常细胞损害较大，因此进一步开发安全、低毒、有效的抗肿瘤药物一直是国内外学者研究热点之一。松茸作为一种药食两用菌，其抗肿瘤活性已经成为国内外研究热点，据文献报道，其抗肿瘤活性部位多为多糖类成分，但本课题组在研究过程中发现其醇提物同样具有抗肿瘤活性，且其在动物整体抗肿瘤方面的研究少见报道，因此，松茸醇提部位的抗肿瘤作用及其机制值得深入研究。

人体肿瘤裸鼠移植模型对抗肿瘤药的反应，对临床疗效有预告价值。因此本实验通过观察松茸醇提部位对昆明小鼠S180 肉瘤的抑制作用，研究松茸提取物的抗肿瘤活性。研究结果表明，松茸乙醇提取物大、中剂量组对小鼠S180 肉瘤的抑制率均高于30%，与肿瘤模型组比较差异有统计学意义，但作用不及环磷酰胺，提示松茸乙醇提取物中含有抗肿瘤活性成分。此外，松茸乙醇提取物大、中、小剂量组对小鼠脾脏质量分数、胸腺质量分数及体重的影响与肿瘤模型组比较关异无统计学意义，表明松茸乙醇提取物对小鼠免疫系统几乎没有影响。

总之，松茸作为一种具有显著抗肿瘤活性的食用菌，其抑制肿瘤作用机制及有效成分值得进一步深入研究。

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