香荷胶囊中香菇总多糖提取工艺

范彦博，周才新，张义生，石新华，李赫宇

（1.武汉市中医医院，湖北武汉430014；2.武汉市中医药研究所国家中管局中药制剂三级实验室，湖北武汉430014；3.天津市益倍建生物技术有限公司，天津300457）

香荷胶囊中香菇总多糖提取工艺

范彦博1，2，周才新1，张义生1，石新华1，李赫宇3

（1.武汉市中医医院，湖北武汉430014；2.武汉市中医药研究所国家中管局中药制剂三级实验室，湖北武汉430014；3.天津市益倍建生物技术有限公司，天津300457）

研究香荷胶囊中香菇总多糖的最佳提取工艺。采用正交试验法，考察加水量、提取时间和提取次数3个因素对提取工艺的影响；采用紫外分光光度法进行测定。香荷胶囊中香菇总多糖的最佳提取工艺为：加入12倍量水，沸水提取3次，每次1 h。优选的工艺简便可行、稳定性好。

香荷胶囊；香菇；正交试验；提取工艺

Abstract:To optimize the extraction process of polysaccharide in Xianghe Capsule.The optimum extraction was investigated by the orthogonal design and UV-spectrophotometry.The optimum extraction conditions：ratio of solid to liquid 12∶1,boiling water extraction for 1h and repeated the extraction for 3 times.This optimized process is simple,stable and efficient.

Key words：xianghe capsule;lentinus edodes;orthogonal design;extraction process

香荷胶囊由香菇、苦丁茶、山楂等药食同源的中药饮片组成，具有调血脂的功效。本文是关于香荷胶囊中香菇总多糖提取工艺的正交设计实验。处方中香菇总多糖单独提取，现代研究表明[1]，香菇总多糖提取物具有良好的治疗高脂血证的作用，故确定香菇采用水作为溶剂水浴提取。本文以香菇总多糖的含量为考察指标，采用正交试验法，优选香荷胶囊中香菇的提取工艺，为香荷胶囊的研制提供参考。

1 材料与仪器

1.1 材料

香菇购自咸宁康进饮片公司。

1.2 仪器

AB-135-S型万分之一电子天平：瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司；SP-756P型紫外分光光度计：上海光谱仪器有限公司；TGL-16B型离心机：上海菲恰尔分析仪器有限公司。

1.3 试剂

葡聚糖对照品（分子量 5×105）（sigma），无水乙醇、氢氧化钠、CuSO4·5H2O、柠檬酸钠、无水硫酸钠、浓硫酸、苯酚等试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 试液的制备

1.乙醇溶液（80%）：20mL水中加入无水乙醇80mL，混匀。

2.氢氧化钠溶液（100 g/L）：称取100 g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1 L，加入固体无水硫酸钠至饱和，备用。

3.铜试剂储备液：称取 3.0 g CuSO4·5H2O、30.0 g 柠檬酸钠，加水溶解并稀释至1 L，混匀，备用。

4.铜试剂溶液：取铜试剂储备液 50 mL，加水50 mL，混匀后加入固体无水硫酸钠12.5 g并使其溶解。临用新配。

5.洗涤剂：取水50 mL，加入10 mL铜试剂溶液、10 mL氢氧化钠溶液，混匀。

6.硫酸溶液（10%）：取100 mL浓硫酸加入到800 mL左右水中，混匀，冷却后稀释至1 L。

7.苯酚溶液（50 g/L）：称取精制苯酚 5.0 g，加水溶解并稀释至100 mL，混匀。

2.1.2 对照品溶液的制备

精密称取干燥至恒重的葡聚糖对照品0.5008 g，加水溶解，定容至50 mL，混匀，再精密移取1 mL，置100 mL容量瓶中，加水至刻度，混匀。（每1 mL含葡聚糖 0.1002 mg）。

2.1.3 供试品溶液的制备

称取已干燥的香菇粗粉（40目）20 g，加入10倍量水水浴提取1h，滤过后将提取液定容至1000mL，混匀。准确移取上述提取液5 mL，置于50 mL离心管中，加入无水乙醇20 mL，混匀，沉淀5 min后，以3000 r/min离心5 min，弃去上清液。残渣用80%乙醇溶液数毫升洗涤，离心后弃去上清液，反复操作3次~4次。残渣用水溶解并定容至5mL，混匀。准确移取上述水溶液2mL，置于20 mL离心管中，各加入100 g/L氢氧化钠溶液2.0 mL、铜试剂溶液2.0 mL，沸水浴煮沸2 min，冷却，以3000 r/min离心5 min，弃去上清液。残渣用洗涤液数毫升洗涤，离心后弃去上清液，反复操作3次，残渣用10%硫酸溶液2 mL溶解并转移至50 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，即得。

2.2 检测波长的选择

在300 nm~600 nm波长范围内对对照品溶液进行扫描，结果对照品溶液在485 nm波长处有最大吸收峰，故选择测定波长为485 nm。

2.3 线性范围

精密移取 2.1.2项下对照品溶液 0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，分别置 25 mL 比色管中，准确补充水至2.0 mL，加入50 g/L苯酚溶液1.0 mL，使混匀，小心加入浓硫酸10.0 mL，混匀，置沸水浴中煮沸2 min，冷却至室温后用分光光度计，在485 nm波长处，以试剂空白为参比，1 cm比色皿测定吸光度值。以吸光度值（A）为纵坐标，浓度（C）为横坐标，进行线性回归，回归方程为 Y=22.282X-0.0008，相关系数 r＝0.9996，结果表明在0.02 mg/mL~0.10 mg/mL范围内呈良好的线性关系。

2.4 精密度试验

精密吸取2.1.2项下对照品溶液1.0 mL，置25 mL比色管中，按2.2项下自“准确补充水至2.0 mL”起操作，在同一条件下分别测定吸光度，重复测定6次，RSD为0.213%，表明精密度良好。

2.5 稳定性试验

精密吸取供试品溶液2.0 mL，置25 mL比色管中，分别在 0、2、4、8、12、24 h 按 2.2 项下自“准确补充水至2.0 mL”起操作，测定吸光度，RSD为1.13%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.6 重现性试验

取已干燥的香菇粗粉（40目）6份，每份20 g，精密称定，照2.1.3项下的方法依法制备，精密吸取各供试品溶液2.0 mL，置5支25 mL比色管中，按2.2项下自“准确补充水至2.0 mL”起操作，在同一条件下分别测定吸光度，RSD为2.82%，表明重现性良好。

2.7 加样回收试验

取已知含量的香菇粗粉6份，每份5.0 g，精密称定，分别加入一定量的葡聚糖对照品，照2.1.3项下的方法依法制备，精密吸取各供试品溶液2.0 mL，置6支25 mL比色管中，按2.2项下自“准确补充水至2.0 mL”起操作，依法测定，加样回收率为99.4%，RSD为0.99%，结果见表1。

表1 加样回收试验结果Table 1 Results of recovery test

3 香菇总多糖提取工艺的正交设计实验

为系统考察香菇水提的工艺参数，选取加水量、提取时间、提取次数作为考察因素，以总多糖的含量为考察指标，选用L9（34）正交表设计。

3.1 因素水平表的设定

以加水量（A）、提取时间（B）、空白（C）、提取次数（D）作为考察因素，每个因素设置3个水平，因素、水平见表2。

表2 香菇提取工艺正交试验因素水平表Table 2 Mushroom extracting technolgy orthogonal experiment factor level table

3.2 方法

3.2.1 供试品提取

称取已干燥的香菇粗粉（40目）20 g，按正交表中条件水浴提取，滤过后将各提取液定容至1000 mL，混匀。

3.2.2 沉淀粗多糖

准确移取3.2.1项下9份溶液各5 mL，分别置于50 mL离心管中，各加入无水乙醇20 mL，混匀，沉淀5 min后，以3000 r/min离心5 min，弃去上清液。残渣用80%乙醇溶液数毫升洗涤，离心后弃去上清液，反复操作3次～4次。残渣用水溶解并定容至5mL，混匀。

3.2.3 供试品测定液的制备

准确移取3.2.2项下9份溶液各2mL，分别置于20mL离心管中，各加入100 g/L氢氧化钠溶液2.0 mL、铜试剂溶液2.0 mL，沸水浴煮沸2 min，冷却，以3000 r/min离心5 min，弃去上清液。残渣用洗涤液数毫升洗涤，离心后弃去上清液，反复操作3次，残渣用10%硫酸溶液2 mL溶解并转移至50 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，即得。

3.2.4 供试品测定

准确移取3.2.3项下9份供试品测定液各2.0 mL置于25 mL比色管中，加入50 g/L苯酚溶液1.0 mL，混匀，小心加入浓硫酸10.0 mL，混匀，置沸水浴中煮沸2 min，冷却至室温，用紫外分光光度计，在485 nm波长处，以试剂空白为参比，1 cm比色皿测定吸光度值。由标准曲线算出总多糖含量。

3.3 实验结果与方差分析结果

正交试验设计及结果见表3，方差分析结果见表4。

表3 正交试验设计及结果Table 3 Orthogonal experimental design and results

表4 方差分析结果Table 4 Results of variance analysis

比较表3中各因素的极差大小，可知各因素对总多糖含量的影响顺序为D＞A＞B。由表4方差分析可知：提取次数与加水量有显著性差异，说明此因素对总多糖含量影响较大，提取时间无显著性差异，其对总多糖含量影响较小。综合以上分析，最佳提取工艺条件为A3B1D3，即：加入12倍量水，提取3次，每次1 h。

3.4 验证试验

取已干燥的香菇粗粉3份（20 g/份），按上述最佳提取工艺条件进行验证试验，紫外分光光度法测定香菇总多糖的含量，结果见表5。

表5 验证试验结果Table 5 Results of verification test

结果表明：经正交试验优选的最佳提取工艺基本稳定、可行。

4 讨论

1）现代研究表明，香菇水提浸膏和香菇总多糖提取物具有良好的治疗高脂血证的作用，另由于多糖溶解于热水而不溶于乙醇，故本实验以水作为提取溶剂水浴提取。

2）本文采用正交设计研究香荷胶囊中香菇的提取工艺，试验结果表明香菇粗粉加入12倍量水，提取3次，每次1 h，所得香菇总多糖含量较高，且该提取工艺稳定，方法简便、可行，适用于规模化的生产。

[1]王慧铭,夏道宗,夏明,等.香菇多糖降血脂作用及其机制的研究[J].浙江中西医结合杂志,2005,15(10)：599-602

Extraction Process of Polysaccharide in Xianghe Capsule

FAN Yan-bo1,2,ZHOU Cai-xin1,ZHANG Yi-sheng1,SHI Xin-hua1,LI He-yu3
(1.Wuhan Hospital of Traditional Chinese Medicine,Wuhan 430014,Hubei,China;2.3-level Traditional Chinese Medicine Preparation Laboratory of State Administration of TCM of the PRC,Wuhan 430014,Hubei,China;3.Tianjin UBasic Health Biological Technology Limited Company,Tianjin 300457,China）

2012-05-31

范彦博（1982—），男（汉），中药师，博士，主要从事中药学研究工作。