蒙药嘎日迪－12红花中羟基红花黄色素A的含量

2012-09-12鲍劲松白英歌

中国民族医药杂志 2012年5期

鲍劲松白英歌

(呼伦贝尔市人民医院，内蒙古海拉尔 021000)

嘎日迪－12由漏芦花、多叶棘豆、麦冬、红花、人工牛黄等12味药组成。其中漏芦花功能为杀“粘”、清热解毒，根据相关文献，对其进行芦丁、槲皮素、山奈素的考察，结果未检出明显的色谱峰。红花具通经散瘀，消肿止痛功能，参照《中国药典》2005年版一部红花项下高效液相色谱法(附录ⅥD)对其进行含量测定，通过实验分析，结果分离效果和重现性好，专属性强。

1 仪器与试剂

LC－10ATvP泵，SCL－10AvP型控制器，SPD－10AvP型检测器，CLass－vP色谱工作站。岛津UV—1700型紫外—可见分光光度仪。HU3120B超声波清洗器。羟基红花黄色素A对照品(批号:111637－200503):由中国药品生物制品检定所提供;嘎日迪－12由呼伦贝尔市鄂温克旗蒙医院提供。甲醇为色谱纯，水为高纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件:本实验采用Dimonsi C18色谱柱 (250×4.6mm，5μm);甲醇－乙腈－0.7%磷酸(26:2:72)(用三乙胺调pH至6.0±0.1)为流动相;柱温30℃;403nm作为检测波长;对照品及样品理论板数不低3000。进样量:10μL

2.2 供试品与对照的制备

2.2.1 对照品溶液的制备:取羟基红花黄色素A对照品适量，精密称定，加25%甲醇制成每1mL含15μg的溶液，即得。

2.2.2 样品溶液的制备:取本品，研细，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25%甲醇50mL，称定重量，超声(功率250w，频率33kHz)40min，放冷，再称定重量，用25%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 方法学考察

2.3.1 提取效率的考察:以25%甲醇作为提取溶剂进行超声提取，为保证被测成分的完全提取，实验中考察了超声10、20、30、40min不同提取时间对提取效率的影响，含量测定结果见表1。从表中数据可见，超声40min供试品中羟基红花黄色素A的含量基本稳定不变，故将提取时间定为超声40min。

表1 羟基红花黄色素A提取效率的考察

2.3.2 线性关系考察:取羟基红花黄色素 A对照品约8mg，精密称定，置50mL量瓶中，加25%甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀(0.0668 mg·mL－1)，精密吸取 1、2、4、5、8、10mL，分别置25mL量瓶中，加25%甲醇稀释至刻度，摇匀，各取10μL进样，按上述色谱条件测定，以峰面积对对照品进入的量进行回归分析，结果羟基红花黄色素A在0.00668μg～0.0668μg范围内呈良好的线性关系。回归方程为 y=19639728x+4795.9，r=0.9998。标准曲线数值见表2。

表2 标准曲线数值表

2.3.3 稳定性试验:溶液稳定性试验取同一份供试品溶液，分别于 0、2、6、8、12h 进行测定，结果见表3。从表中数据可以看出，羟基红花黄色素A在12h内的峰面积积分值基本稳定不变。2.3.4 精密度(重复性试验):取同一批号(20090802)供试品6份，各约2g，精密称定，按拟定方法制备供试品溶液，测定每份供试品的含量，结果见表4。

表3 标准曲线数值表

表4 重复性试验试验结果

2.3.5 准确度(加样回收试验):取供试品(含量为0.4328 mg·g－1)6份，各约1g，精密称定，分别置6个具塞锥形瓶中，精密加入25mL25%甲醇，再精密加入用25%甲醇配制的羟基红花黄色素A对照品溶液(羟基红花黄色素A浓度0.0168 mg·mL－1)25mL，分别按拟定方法制备供试品溶液，测定每份的含量，计算回收率，结果见表5。

表5 羟基红花黄色素A加样回收试样结果

2.3.6 耐用性实验:换不同的厂家，不同型号的色谱柱，取样品重复性试验中的1号、2号供试品及对照品溶液，分别进样，测定含量。结果见表6。

表6 不同色谱柱的耐用试验

2.3.7 样品含量测定:取本品按拟定方法制备供试品溶液，测定3批样品的测定结果见表7。

表7 样品中羟基红花黄色素A含量测定结果

2.3.8 专属性考察:阴性对照试验:按拟定方法制备供试品溶液和对照品溶液。另取按处方比例并以相同工艺制备的缺红花的阴性对照品溶液，按供试品溶液制备法制得的阴性对照溶液。在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、阴性对照溶液、供试品溶液各10μL，分别注入液相色谱仪，测得结果为:阴性对照色谱图中在与羟基红花黄色素A对照品以及供试品色谱相应的保留时间处无色谱峰出现，表明其他组分对羟基红花黄色素A的测定无干扰。见图 1、2、3。