HPLC法测定蒙药材蒙酸模(霍日根－其和)中大黄酚的含量

2012-09-12张润祥王志君

中国民族医药杂志 2012年5期

张润祥王志君丁宁

(1.呼和浩特市食品药品检验所，内蒙古呼和浩特 010020;2.内蒙古食品药品检验所，内蒙古呼和浩特 010070)

蒙酸模原植物载于18世纪蒙医伊希巴拉珠尔著《认药白晶鉴》。19世纪蒙药学家占布拉道尔吉著《无误蒙药鉴》载:“根、茎红色叶大圆形，粗糙，铺地而生，根和茎色红外其他与大黄相同，但根具多皱，种子三角形。”功能:杀“粘”，下泻，消肿，愈伤。用于“粘”疫，痧疾，丹毒，乳腺炎，腮腺炎，骨折，金伤［1］。因此，为了考察该药材的质量，本研究建立了其有效成分大黄酚的HPLC含量测定方法。

1 仪器与试剂

日本岛津2010AHT高效液相色谱仪、日本岛津LC－20A高效液相色谱仪:紫外及二极管阵列检测器，岛津LC－Solution色谱工作站。甲醇为色谱纯;其他均为分析纯试剂;水为纯化水;大黄酚对照品(购于中国药品生物制品检定所，批号:110796－200716)。蒙酸模(收集于呼和浩特市黄花村、平顶村、呼消喜来，共计3批供试品)。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件:色谱柱:AlltimaTM －C18柱(250×4.6mm，5μm);流动相:甲醇—0.1%的磷酸溶液，梯度洗脱［0 ～10min，甲醇 65%;10 ～ 25min，甲醇 65% →80%;25 ～45min，甲醇 80%］;检测波长:430nm;柱温:35℃;流速:1.0 mL·min－1。

2.2 对照品溶液的制备:精密称取大黄酚对照品适量，加甲醇制成每1mL含16μg的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备:取本品粉末约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，滤过。精密量取续滤液5mL，减压回收溶剂至干，残渣加8%盐酸溶液10mL，超声处理2min，再加三氯甲烷10mL，加热回流1小时，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷洗涤3次，每次10mL，合并三氯甲烷液，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解并转移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

2.4 专属性考察:精密吸取甲醇空白溶剂，大黄酚对照品溶液，供试品溶液各10μL注入液相色谱仪。大黄酚对照品色谱峰峰纯度好，紫外光谱最大吸收为430nm;供试品溶液中色谱峰保留时间与大黄酚对照品一致，在430nm处有最大吸收;甲醇空白溶剂无吸收。表明该含量测定方法专属性好，空白溶剂无干扰。(色谱图见图1、2、3)

图1 空白溶剂色谱图

图2 大黄酚对照品色谱图(2号峰)

图3 供试品色谱图

2.5 线性关系考察:按“2.2”对照品溶液制备方法称取大黄酚对照品3.173mg，置200mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度(浓度为15.86μg·mL－1)。分别精密吸取对照品溶液 1.0、2.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、30.0mL，注入高效液相色谱仪，测定峰面积;以峰面积为纵坐标(Y)，进样量为横坐标(X)做线性回归，回归方程为Y=2748.91358 X － 748.56387，r=0.9999。结果表明，大黄酚在15.865 ～475.950μg范围内呈良好的线性关系。

2.6 稳定性试验:取同一份供试品溶液，分别在0，2，4，6，8，10，12h进样测定，RSD 为1.51%。

2.7 重复性试验:取同一批样品按供试品溶液制备方法制备6份样品溶液，分别注入液相色谱仪测定峰面积，RSD为0.96%。

2.8 精密度试验:吸取同一批供试品溶液，在上述色谱条件下重复进样6次，RSD为1.22%。

2.9 加样回收率试验:取同一批已知含量的样品6份，每份取约0.25g(正常量的一半)，精密称定，分别精密加入大黄酚对照品适量，按供试品溶液制备方法制备样品溶液，同法操作，分别注入液相色谱仪测定含量，计算回收率，结果见表1。