高效液相色谱法同时测定丁苯乳膏中两组分的含量

姬怀雪，王 艳，邵珠民，惠 慧

徐州医学院附属医院药剂科，徐州 221002

丁苯乳膏是我院研制的复方制剂，分别含0.1%丁酸氢化可的松和0.5%盐酸苯海拉明。丁酸氢化可的松是一种中效糖皮质激素药物，疗效适中而副作用相对较低，具有抗炎、免疫、抗增生作用[1]；盐酸苯海拉明为抗组胺药，具有抗变态反应、止痒消肿作用[2]；两药合用能起到明显的协同作用，且不增加不良反应，主要用于治疗神经性皮炎、脂溢性皮炎、慢性湿疹，亦用于虫咬、过敏性湿疹等，疗效确切，临床效果好。为了更好地控制该制剂的质量，采用高效液相色谱法（HPLC）同时测定了两组分的含量[3]，克服了乳膏基质中羟苯乙酯的干扰，结果表明本法简便、准确。

1 材 料

1.1 仪器

美国Waters高效液相色谱仪（包括1525二元高压梯度泵、717自动进样器、2487双波长紫外检测器、Empower操作平台）；UV-2401PC（日本岛津公司）；FA1004B型电子天平（上海精密科学仪器有限公司）。

1.2 试药

盐酸苯海拉明原药（辽源市百康药业有限公司，批号:090307）；丁酸氢化可的松原药（浙江仙琚制药有限公司公司，批号:20120101）；丁酸氢化可的松对照品（批号:100303-200101，纯度:98.57%）、盐酸苯海拉明对照品（批号:110728-200806，纯度:99.7%）均购自中国食品药品检定研究院；丁苯乳膏（自制样品，批号:20120309、20120316、20120320）；乳膏基质（天津市天骄制药有限公司，批号:20110807）；乙腈、甲醇为色谱纯；其他试剂为分析纯；所用辅料均为药用规格。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:XTerra RP C18（250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相:甲醇-乙腈-0.5%醋酸铵溶液（35∶27∶38）；流速:1.0 mL·min-1；检测波长:232 nm；柱温:30℃；进样量:20 μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液 精密称取丁酸氢化可的松对照品25 mg、盐酸苯海拉明对照品125 mg，分别用流动相溶解并稀释至50 mL，用过滤器过滤，作为对照品储备液；精密吸取对照品储备液0.8 mL加入10 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。精密称取两成分置于同一量瓶中，同法制得对照品混合溶液。

2.2.2 样品溶液 精密称取本品2 g置于小烧杯中，加流动相40 mL，超声处理5 min，再于冰浴中冷却1 h，取出后用孔径0.45 μm微孔滤膜快速过滤，滤液置于50 mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得。

2.2.3 阴性样品溶液 精密称取空白基质2 g，按“2.2.2”项下方法制备成阴性样品溶液。

2.3 方法专属性

分别取阴性样品溶液、对照品溶液、样品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样，记录色谱图，见图1。结果显示基线平稳，两主药之间及与其他杂质成分分离度良好，柱效高，峰形理想。

图1 高效液相色谱图

2.4 标准曲线的制备

分别精密量取对照品混合溶液 0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0 mL，置于 10 mL 量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，进样，按“2.1”项下色谱条件测定，以峰面积（Y）为纵坐标，浓度（C）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程（n=6）:丁酸氢化可的松为Y=3.348×104C-3.427×104（r=0.9999），线性范围为 25～50 μg·mL-1；盐酸苯海拉明为 Y=1.157×104C+2.918×104（r=0.9999），线性范围为 125～250 μg·mL-1。结果表明，丁酸氢化可的松在25～50 μg·mL-1范围内、盐酸苯海拉明在125～250 μg·mL-1范围内，峰面积与浓度的线性关系良好。

2.5 精密度试验

取同一对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件连续进样5次，测得丁酸氢化可的松、盐酸苯海拉明峰面积的RSD分别为0.86%、0.95%，表明精密度良好。

2.6 稳定性试验

取同一份样品溶液，分别在 0、2、4、6、8 h 按“2.1”项下色谱条件分别测定峰面积并计算含量，结果无明显变化，RSD为0.78%，说明样品液在8 h内稳定，能满足含量测定要求。

2.7 回收率试验

分别精密称取丁酸氢化可的松、盐酸苯海拉明的对照品，模拟处方比例按“2.2.1”项下配制对照品溶液，按“2.2.2”项方法制备样品溶液，在“2.1”项下色谱条件测定峰面积，以回归方程计算回收率，结果见表1。

表1 回收率试验结果

2.8 重复性试验

取同一批号样品6份，精密称定，按照样品溶液制备的方法制备供试液，按“2.1”项下色谱条件分别测定峰面积，计算丁酸氢化可的松和盐酸苯海拉明的含量，RSD分别为0.95%、0.83%，表明本法重复性较好。

2.9 样品含量测定

分别精密称取3种不同批号的样品，按样品溶液的制备方法制备相应批号的样品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，将测定峰面积代入回归方程，计算含量，结果见表2。

表2 样品含量测定结果（n=3）

3 讨 论

3.1 波长的选择

为排除干扰，准确地进行两主药的含量测定，分别对丁酸氢化可的松、盐酸苯海拉明进行紫外扫描。发现两者紫外图谱的交叉点波长为232 nm。综合分析和实验验证结果表明，选择此波长能兼顾两主药的测定。

3.2 流动相的选择

高效液相色谱法的难点在于流动相的选择，对于本品含量测定的研究，曾试验过许多不同的流动相，如:甲醇-水、乙腈-水、乙腈-1%三乙胺（29∶71）（用冰醋酸调节pH至6.5）等，效果都不理想，尤其是乳膏基质中的防腐剂——羟苯乙酯影响最大，比较难和盐酸苯海拉明分离。通过反复试验，最终选择甲醇-乙腈-0.5%醋酸铵溶液；此外，由于不同比例的流动相对分离效果的影响很大，通过反复试验发现，甲醇-乙腈-0.5%醋酸铵溶液的比例为（35∶27∶38）最为合适，分离度、峰形、保留时间均适宜。

3.3 样品溶液的制备

大量的参考文献报道，在制备乳膏的样品溶液时采用加热振摇的办法提取被测成分，但此方法比较费时。本试验采用超声波处理制备供试品溶液的方法，测定结果满意，耗时短。经试验，选择超声5 min的时间，即可使两成分完全溶出。

3.4 标准曲线的建立

本试验分别对对照品溶液、对照品混合溶液进行测定，结果显示两个回归方程基本一致，因此选择测定对照品混合溶液，这样能够同时得到两种成分的标准曲线，节约了试验时间。本乳膏剂含量测定的允许范围为标示量的90.0%～110.0%。

综上，本实验建立了简便、准确的HPLC法测定丁苯乳膏中两组分的含量方法，有利于基层医院该类制剂的快检。

[1]张建中.几种新的外用糖皮质激素[J].中国药物应用与监测，2005，2（5）:30-3.

[2]张广求，张美祥，郑锦秀.盐酸苯海拉明凝胶的制备及质量控制[J]. 中国药房，2005，16（14）:1065-7.

[3]吴 畏，陈 雅，余 颖.复方更昔洛韦乳膏的质量控制与稳定性考察[J]. 医药导报，2011，30（12）:236-8.