康普瑞丁磷酸二钠壳聚糖-海藻酸钠微球的制备工艺研究

李彩凤，陈向红

（保定市第一中心医院 河北 保定 071000；河北大学附属医院 河北 保定 071000）

康普瑞丁磷酸二钠壳聚糖-海藻酸钠微球的制备工艺研究

李彩凤1，陈向红2

（保定市第一中心医院 河北 保定 071000；河北大学附属医院 河北 保定 071000）

目的 研制康普瑞丁磷酸二钠壳聚糖-海藻酸钠微球，并对处方和工艺进行筛选。方法 采用凝聚法制备康普瑞丁磷酸二钠壳聚糖-海藻酸钠微球。通过正交试验获得设计和优化微球制备工艺。采用高效液相色谱法（HPLC）测定了微球的载药量、包封产率和体外释放度。结果 制备的微球显微观察形态圆整、表面光滑，无粘连，平均粒径为（10.21±0.16）μm，粒径在7～12 μm平均数占总数的80.6%，平均载药量为（38.75±2.42）%，包封率为（89.73±3.15）%。结论 采用本法制备的康普瑞丁磷酸二钠壳聚糖-海藻酸钠微球粒径大小适宜，符合肺靶向要求，体外释放具有明显的缓释作用，适合制备成肺栓塞的制剂。

康普瑞丁磷酸二钠；壳聚糖-海藻酸钠；体外释放

康普瑞丁磷酸二钠（Combretastatin A4P）为新型抗肿瘤前体药物，体内代谢成康普瑞丁活性形式与血管内皮细胞的微管系统结合，阻止新生血管的生成而发挥抗肿瘤的作用，是治疗非小细胞肺癌的药物之一。由于康普瑞丁给予大鼠静脉注射给药后，消除半衰期仅几分钟，在体内消除很快，稳定性差[1]，将其制成微球后，可缓慢、持续释放，能延长药物有效浓度的周期、增加持续作用的时间、减少给药的频率；还可选择性的到达病变部位，从而降低药物的毒性、提高药物的疗效和增加被包封药物的稳定性。

1 材料与仪器

康普瑞丁磷酸二钠（CA-4P，自制，纯度99.91%）；海藻酸钠（分析纯，上海奉贤奉城试剂厂）；碳酸钙（化学纯，青岛晶岩科技开发有限公司）；壳聚糖（Chitosan，CS，脱乙酰度95%，山东奥康生物科技有限公司）；其他均为市售化学或分析试剂。YD203型液滴发生器（中国科学院大连化学物理研究所研制）；RQ218型超声波清洗器（上海精密仪器仪表有限公司）；LC-10 Avp高效液相色谱系统（日本岛津）；智能溶出实验仪（天津大学无线电厂）；透析袋（截留分子量12000，北京经科宏达）。

2 方法与结果

2.1 微球的制备工艺

采用液滴发生法称取适量康普瑞丁磷酸二钠原料药与一定浓度的海藻酸钠按一定比例混合均匀，吸入到注射器中，在液滴发生器驱动下缓慢滴入到150 mL 0.3 moL/L的氯化钙溶液中，弃上清液，加入0.5%的壳聚糖150 mL。在一定温度下固化后，取出微球，抽滤，并用去离子水冲洗3遍，减压干燥48 h即得。

2.2 康普瑞丁磷酸二钠微球的载药量和包封率的测定

2.2.1 色谱条件 Kromasil C18柱(150 mm × 4. 6 mm、5 μm)，流动相为甲醇-乙腈-0.05 moL/L磷酸二氢钾缓冲液（55:1:50，pH 2.5），检测波长为290 nm，流速为1.0 mL/min，柱温为40℃，进样量为10 μL。

2.2.2 标准曲线的制备 精密称取10 mg CA4P 对照品，用纯化水溶解，稀释成5、10、20、30、40、50 μg/mL的对照品溶液；分别精密量取10 μL溶液，进样，并记录峰面积；以样品浓度对峰面积值作线性回归，得回归方程为:y=1.258×104x-3.652×103（r= 0.9999）。结果表明，线性范围为5～50 μg/mL内与峰面积的线性关系良好。

2.2.3 康普瑞丁磷酸二钠微球载药量和包封率的测定[2]将微球在瓷研钵中研磨后精取适量，在0.4%氢氧化钠中超声30 min（超声5 min，功率100 W）后，微孔滤膜过滤，滤液参照标准曲线绘制方法测定CA4P浓度，并计算微球的包封率和载药量。

按标准曲线方程计算微球载药量和包封率[3]。

2.3 释放度的测定

测定方法：采用改进的动态透析法，精密称取微球适量，装入透析袋内，置于转篮中。以 250 mL pH 7.4磷酸缓冲液为释放介质。在转速为100 r/min，恒温（37±0.5℃）释放，分别于0、0.5、1、2、4、8、12、18、24 h吸取介质5 mL（同时补充同温度、同体积的新鲜介质），离心，高效液相法测定溶液中药物的含量，并按标准曲线方程Eq.4计算累积释放百分率（Q）；同时作康普瑞丁原料释放实验。

2.4 正交设计

以海澡酸钠的浓度（A，mg/mL），海藻酸钠与药物的比例（B），固化温度（C ℃），固化时间（D h）为主要影响因素，每个因素选取3个水平，选用L9（34）表进行正交实验，结果见表1；以康普瑞丁磷酸二钠的包封率和7～12 μm粒径百分比为考察指标，试验结果见表2。

表1 L9（34）试验因素水平表

表2 正交试验结果分析

由正交试验分析结果可知4个因素对中空微球的形成及理化性质影响顺序为A＞ D＞ B ＞C，其中A和D影响较为显著。最佳工艺为A1B1C2D2，即最合适的工艺为海藻酸钠质量浓度为15 mg/mL，海藻酸钠与药物的比例为1:1，固化温度为35 ℃，固化时间为2 h。

2.6 微球制备工艺验证试验和体外释放结果

包封率和载药量优化处方制备3批康普瑞丁壳聚糖-海藻酸钠微球，测定包封率、载药量，平均粒径为（10.21±0.16）μm，粒径在7～12μm平均数占总数的80.6%，平均载药量为（38.75±2.42）%，包封率为（89.73±3.15）%，可知微球的粒度分布、平均粒径、包封率、载药量与体外释放重现性良好，并且体外释放与原料药相比有一定的缓释作用。经拟合释药曲线符合 Higuchi 方程：Q = 0.01536 + 0.01325t1/2，r= 0.9906 ，24 h累积释药百分率为80.47%，所得微球无明显突释现象，其释药符合长效制剂特征。

3 讨论

制备药物肺靶向微球，控制药物粒径是制备微球的关键[3]，研究证实，粒径在7～30 μm的微球静注后可被肺部毛细血管床机械截留从而蓄积在肺部[4]，Lllum等发现带正电荷的粒子容易到达肺部。本实验制备的微球平均粒径为10.21 μm，载体材料中壳聚糖为带正电荷的高分子物质，从而保证了微球具有良好的肺靶向性，将药物浓集于肺部，有利于提高肺部疾病的治疗，同时降低药物对其他组织的毒副作用。

试验中发现，微球粒径受海藻酸钠浓度影响较大，海藻酸钠浓度越高，微球粒径越大；微球的固化温度较高时，固化时间短，生产周期相应变短，但微球的包封率随着固化温度的升高而略有降低，且微球颜色逐渐加深，故综合考虑选择固化温度为35 ℃。

制备的微球呈黄色粉末状，外观圆整、流动性好、表面光滑、载药量较高，3批样品在接近体内环境的pH7.4磷酸盐缓冲液中具有明显的缓释作用，并且3批样品重现性较好，粒径分布在肺靶向微球要求范围内。

[1]陆 榕,樊慧蓉,刘昌孝.风车子素A4磷酸盐的大鼠药动学研究[J].中草药,2006,37(8):147-149.

[2]尹 佳,张亚兰,莫 毅,等.CA4P脂质体的制备工艺研究[J].华西药学杂志,2009,24(6):594-596.

[3]王 津,李柱来,陈莉敏,等.壳聚糖-海藻酸钠布洛芬缓释微球的制备工艺及性能[J].福建医科大学学报,2008,42(1):56-59.

[4]卞丽红,王洪权,窦园园,等.紫杉醇/海藻酸钠微囊/微球的缓释及抑瘤作用研究[J].2005,25(2):152-155.

（本文编辑 韩志涛）

KangPuRui butyl phosphoric acid sodium two chitosan sodium alginate spheres preparation technology research

LI Cai-feng, CHEN Xiang-hong
(The first Hospital center city of Heibei Baoding,Baoding Hebei 071000,China;Affiliated Hospital of Hebei university,Baoding,Hebei 071000,China)

KangPuRui butyl phosphoric acid sodium 2; Chitosan-sodium alginate; In vitro release

TQ460.6

B

10.3969/j.issn.1674-070X.2012.10.005.012.02

2012－04－09

李彩凤（1965－），女，河北雄县人，本科，副主任中药师，主研方向：中药学。