副肿瘤神经症自身抗体检测试剂盒初步应用及意义

虞喜豪 姜晓华 周炳荣 丁 姗

解放军八五医院肿瘤内科，上海 200052

副肿瘤神经综合征（paraneoplastic syndrome of the nerves system，PNSNS）主要是指在某些恶性肿瘤患者中出现的非肿瘤转移所致的机体神经系统及相关神经肌肉系统出现的病变及相应综合征，其发生率在不同肿瘤及肿瘤类型中均有不同。该症多见于小细胞肺癌、乳腺瘤、淋巴瘤、妇科肿瘤、胰腺癌等，其中，以肺癌及卵巢癌略高。此症虽总体发病率不高，但造成的神经损害及出现的临床表现往往较肿瘤本身更早。该症发病机制尚不完全清楚，多数文献表明可能与肿瘤相关抗原，与神经系统的组织细胞抗原的交叉免疫原存在所致，与自身免疫反应有关，其中，抗Hu、抗R1及抗CV2抗体等被认为与PNSNS发病有较确切关联。国内相关检测已有较多报道[1]，但方法及所用制剂多为自制，且不统一，不适宜临床简捷常规使用。为此，笔者利用德国弗赖堡公司最新研发PNS抗体检测试剂盒对常见肿瘤患者且未明确出现相关神经症的患者血清予以测定，初步验证对临床常见肿瘤患者可能潜在发生PNSNS的阳性率及该项检测在预测及筛查PNSNS中的价值意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2010年12月～2011年4月常规送检的常见肿瘤患者5例，分别为肺癌、乳腺癌、直肠癌、胰腺癌、肝癌，其中，男性2例、女性3例，平均年龄61.2岁。所有诊断均经影像学、血液学相关检测及病理检查予以确认。

1.2 抗体采集

抽取患者静脉血 3～5 mL，4 000 r/min离心15 min，取上清液、分装置-80℃冰箱保存待检。

1.3 检测材料及方法

采用德国弗赖堡RAVD DIAGNOSTIKA公司提供PNSNS相关抗体检测试剂盒，该试剂盒组成：（1）包被有重组抗原蛋白（HuD.Y0.R2 CV2，囊泡素及 Ma1.Ma2）醋酸纤维素条；（2）对照扫描样本浓缩洗涤液、稀释液；（3）即用型碱性磷酸酶交联抗人 IgG及相关阳性对照液；（4）底物溶液以及若干孵育管。

1.4 方法

按常规标准醋酸纤维素膜免疫印迹法 （western blot）测定：每名患者血清稀释度为1∶2 000，其中2例患者（为乳腺癌及肺癌）血清设复孔（双条）（标本血清稀释度分别为1∶200及1∶2 000）。以标准阳性对照带为参照，其分别为抗Y0、抗Hu、抗 R2 及 CV2、囊泡素，Ma1、Ma2。

2 结果

5例患者及对照共8份血清抗体分为1～8号测试条带，其中，1号为阳性对照（由起始线依次分别为抗Y0、抗Hu、抗R2 及 CV2、囊泡素，Ma1、Ma2 抗体显示带）。 2、3 号及 4、5 号条分别为两不同患者不同稀释度结果，6、7、8号条带为另3名患者1∶2 000检测结果。一患者标本（4、5号条）抗CV2抗体双带均显示阳性。该患者为病理确认的小细胞肺癌患者。另各阳性对照显示条清晰、准确。具体测试结果见图1。

3 讨论

PNSNS是一类既非肿瘤病灶直接侵袭压迫产生，也非肿瘤灶造成的异位内分泌、代谢紊乱、继发感染，组织灌流障碍以及化放疗所致、副反应而产生的以中枢或外周神经系统损害的疾病[1]。目前对于机体产生此症的确切机制尚不完全清楚，但较一致的观点为多类特异抗神经元的自身免疫性抗体（specific neuronal antibody，SNA）产生的自身免疫反应在其中发挥重大作用[2]。PNSNS在恶性肿瘤的发病率约1%[3]，而在小细胞肺癌、卵巢癌等更多伴发PNSNS的肿瘤中比例可能更高[4]。相关免疫性抗体在肿瘤患者中的测定，不仅对于合理、准确诊断患者PNSNS有重要意义，而且可以为尽早预防和必要干预PNSNS提供依据。国内有学者研究报道[5]，相关特异神经元抗体诊断PNSNS特异性可达72.5%，敏感度为95%。而采用PET-CT联合检测,尤其在有其他肿瘤标志物阳性者中，可进一步提高肿瘤检出率[6]。在抗体测定阳性患者中有近1/3存在多种抗体[7]，因此，不论是在已有PNS症状中去预测或发现潜在肿瘤的可能，或抑在已知肿瘤患者中通过测定特异抗体来反映出现PNSNS的概率，并指导诊疗等方面，都应同时检测多类PNSNS相关抗体。本快检试剂盒中纤维素条包被有多类免疫原蛋白，高效、完备。神经组织细胞是高度分化、保守的细胞，由于各种原因一旦受损严重或持续时间较长，出现不可逆损害则功能将难以修复。有报道表明，在确认PNSNS患者中，虽经必要抗肿瘤治疗及免疫抑制治疗，仅有约10%患者的神经症状有较明好转[8]。故PNS总体疗效欠佳，其原因除机制可能尚存不清外，神经细胞受自身免疫等因素损害已致不可逆损伤有关。所以，在肿瘤患者的诊治中，除常规肿瘤的治疗外，不应忽视PNSNS及相关抗体测定，及时进行干预性治疗，不仅可缓解肿瘤患者的神经系统的症状，也是提高肿瘤患者的生存质量、延长生存期的重要举措。

本文利用德国新近研发的PNSNS抗体检测试剂盒，对几种常见肿瘤患者血清进行相关抗体初步测定，是基于上述原因的有益尝试。结果显示，5类肿瘤中，有一小细胞肺癌患者（SCLC）检测阳性，该患者为男性，诊断为肺癌近5年，伴有肢体乏力、麻木、阵发癫痫及腔隙性脑梗死等神经系统损害病变及症状，测出抗体阳性（为抗CV2）。抗CV2抗体是除抗Hu等抗体外最为常见PNSNS相关抗体，其对应抗原（66KDa的CV2蛋白）位于神经元胞浆，多见于少窦脑质细胞、视网膜及视神经细胞周围神经中。比较而言，SCLC存在PNSNS及自身神经系统相关抗体可能概率较大，与已往报道一致[3-4]。由于测试制剂有限，选取患者数量较少，尚难得出准确结论，待进一步检测统计。相信今后，在肿瘤患者中开展PNSNS的诊断及相关抗体测定筛查，对肿瘤防治将是一项有价值工作。而且，使用此类专用检测试剂盒快速、便捷、实用性好。

[1]王彬，查建平.副肿瘤性小脑病变与抗神经元抗体关系[J].神经疾病与精神卫生，2010，10（1）：44-46.

[2]刘馨.副肿瘤综合症的最新进展[J].国外医学·老年医学分册，2008，29（2）：86-90.

[3]王刚，陈齐鸣，祝延，等.特异神经元抗体对小细胞肺癌早期诊断价值的初步研究[J].安徽医科大学学报，2002，37（5）：338.

[4]徐杰玉.神经系统副肿瘤综合症10例[J].肿瘤研究与临床，2011，23（9）：636-638.

[5]王刚，陈齐鸣，朱莉，等.特异性神经元抗体对神经系统副肿瘤综合症筛检价值的研究[J].中国神经精神疾病杂志，2004，30（3）：165-168.

[6]关志伟，徐白萱，王瑞民，等.18F-FDG PET-CT检测神经系统副肿瘤综合症疑似患者恶性肿瘤应用价值[J].中华神经医学杂志，2011，10（1）：88-89.

[7]Pittock SJ，kryzer TJ，Lennon UA.Paraneoplastic antibodies coexist and predict cancer，not neurological syndrome[J].Ann Neurol，2004，56：715-719.

[8]Vernino S，O′Neill BP，Marks RS，et al.Immunomodulatory treatment trial for paraneoplastic neurological disorders[J].Neuro Oncology 2003，6（1）：55-62.