生物黏附单向释药愈溃膜对金黄仓鼠的口腔黏膜刺激性实验研究*

王小晓，平佳宜，吴彩丽，段晓颖

(河南中医学院第一附属医院，河南郑州450000)

复发性口腔溃疡是临床常见病、多发病，是口腔科疑难杂症之一。目前局部治疗仍是其主要的治疗方法。愈溃膜是以生物黏附单向释药系统为载体制成的现代中药复方制剂，由具生物黏附性的载药层和不具生物黏附性的背衬层复合而成，属于生物黏附单向释药膜剂。该膜剂可延长药物对溃疡面的覆盖和黏附时间，具有阻断外界因素对溃疡面的刺激、保护创面的作用［1］。为考察该制剂的毒性反应，本研究观察了其对金黄仓鼠口腔黏膜的刺激性作用。

1 材料与方法

1.1 动 物

SPF级金黄仓鼠10只，雌雄各半，出生60～70 d，购自武汉生物制品研究所，动物质量许可证号:SCXK(鄂)2008－0003。

1.2 药品与仪器

愈溃膜(每片1 cm×1 cm，含生药144 mg/片)及不含药空白膜，由河南中医学院第一附属医院中药制剂实验室制备。TB－718E型生物组织自动包埋机，湖北泰维医疗科技有限责任公司产品;RM2245型旋转切片机，德国LEICA公司产品;日本Olympus DP71显微图像采集系统。

1.3 动物分组与给药

［2－3］。取10只SPF级金黄仓鼠，雌雄各半，翻转左、右侧中央颊囊并用生理盐水冲洗，分别设为愈溃膜组和空白膜对照组，将愈溃膜和不含药空白膜分别贴敷于左、右侧颊囊黏膜极低处，保持贴敷至少4 h。

1.4 检测指标

参考文献［2－3］。观察给药后金黄仓鼠的一般情况、局部黏膜肉眼表现及组织病理学显微表现，并根据评分标准进行评分。

1.4.1 一般情况与局部黏膜表现

观测给药后24 h时动物全身状况及用药局部口腔黏膜有无色泽异常、充血、肿胀、糜烂和渗出等异常现象，并按以下标准评分:无红斑(0分)，轻度充血、肿胀(1分)，明显充血、肿胀(2分)，糜烂、渗出、溃疡形成 (3分)。

1.4.2 组织病理学观察

给药后24 h，处死金黄仓鼠5只，观察颊黏膜有无充血、肿胀、糜烂及溃疡反应;同时取与试样接触部位的颊黏膜及其周围组织，用40 g/L甲醛固定液固定，常规石蜡包埋、切片，HE染色。其余存留的5只金黄仓鼠，观察至第7天再处死观察，方法同上。显微观察并记录给药处颊囊上皮组织是否有溃疡、过度角化、上皮异常增生、角化不良、空泡形成、色素沉积、基底细胞变化、化生、增生或其他异常变化，结缔组织是否有充血、血管扩张、炎症细胞浸润、基质疤痕形成、出血、异物反应或其他异常变化。按以下标准评分。①上皮变化:正常计0分，细胞增生计1分，过度角化或角化不良计2分，局部糜烂计3分，广泛糜烂计4分。②白细胞浸润程度:未见白细胞计0分，白细胞计数＜25个计1分，白细胞计数26～50个计2分，白细胞计数51～100个计3分，白细胞计数＞100个计4分。③血管充血程度:未见血管充血计0分，极少血管充血计1分，轻度血管充血计2分，中度血管充血计3分，重度血管充血且伴有血管破裂计4分。④水肿程度:未见水肿计0分，极少见水肿计1分，轻度水肿计2分，中度水肿计3分，重度水肿计4分。评分之后综合各项计分，进行病理反应分级，病理反应分级标准如下:0～4分(无黏膜刺激性)，5～8分(轻度黏膜刺激性)，9～11分(中度黏膜刺激性)，12～16(重度黏膜刺激性)。

2 结果

2.1 各组动物一般状况与局部黏膜表现

给药24 h后，受试动物全身状况未见异常，局部口腔黏膜未见充血、肿胀、糜烂、渗出、溃疡形成等异常现象;其余存留动物，连续观察7 d，亦未见上述异常表现。按照评分标准计分，愈溃膜组和空白膜对照组评分均计为0。

2.2 各组动物颊黏膜组织病理学观察

与空白膜对照组对比，愈溃膜组上皮细胞排列整齐，形态未见异常、无过度角化/角化不良，基底细胞未见增生或其他异常变化，未见溃疡形成;结缔组织未见炎症细胞浸润、血管扩张、充血、出血、异物反应或其他异常变化。见图1。按照评分标准计分，愈溃膜实验组和空白膜对照组评分均计为0。

3 讨论

金黄仓鼠具有一个特殊的结构——颊囊。将受试物置于颊囊中，能够保证受试物崩解或溶化前与口腔黏膜一直处于充分接触状态，这与受试物的临床应用情况基本一致，可最大程度模拟临床上的给药方式。此外，将药物放入金黄仓鼠一侧颊囊中，还可以以另一侧颊囊作为对照来判断试验结果［4］。愈溃膜处方源于民间验方，由胡黄连、青黛、冰片等组成，临床使用效果显著。传统的使用方法是将其制为散剂，将药物直接喷洒于患处。但由于口腔特殊的生理环境，药物不能长时间在局部保持有效治疗浓度，从而影响了疗效。为提高药效，方便临床使用，本课题组采用具有生物黏附性的载药膜和不具生物黏附性的空白膜复合而成的单向释药膜系统作为载体，将其制成现代中药复方制剂。为考察该制剂的毒性反应，本研究结果显示:与对照组相比，愈溃膜组在给药24 h及1周时，局部口腔黏膜未见充血、肿胀、糜烂、渗出、溃疡形成等异常现象，组织切片显微观察用药组上皮细胞排列整齐、形态未见异常、无过度角化/角化不良、基底细胞未见增生或其他异常变化、未见溃疡形成，结缔组织未见炎症细胞浸润、血管扩张、充血、出血、异物反应或其他异常变化。根据评分标准计分，愈溃膜组和空白膜对照组评分均计为0。可见该制剂无黏膜刺激性，未显示毒性反应，提示该膜剂的研发具有良好的临床应用前景。

参考文献:

［1］李丁，王健，侯惠民.口腔黏膜给药系统研究进展［J］.中国医药工业杂志，2009，40(4):303－307.

［2］杨柳，张义生，周才新，等.辛及涂剂对口腔黏膜刺激性实验研究［J］.湖北中医杂志，2011，33(10):19－20.

［3］李良，郑国安，郭晟，等.西地碘含片口腔黏膜刺激性试验［J］.内蒙古中医药，2009，28(23):62 －63.

［4］国家食品药品监督管理局药品审评中心.药品技术评价文集:第二辑［M］.北京:中国医药科技出版社，2007:36.