玄芷镇痛片镇痛作用与急性毒理学研究

徐丽君，王开富，邹欣，龚菂，黄光英

(华中科技大学同济医学院附属同济医院中西医结合研究所，武汉430030)

偏头痛型血管性头痛是青春期及中年女性的常见病、多发病，易反复发作，给患者带来很大痛苦[1]。玄芷镇痛片(原名头痛灵片)在我院临床使用多年，用于治疗血管性头痛，取得了良好疗效。该制剂系由华中科技大学同济医学院附属同济医院中西医结合科历代名老中医在长期临床实践的基础上组方而成，虽使用多年，但从未进行实验验证。为确保玄芷镇痛片口服用药的安全性和有效性，笔者按照国家食品药品监督管理局颁布实施的《药品注册管理办法》中有关中药天然药物注册分类第6类的有关项目要求，进行该药的镇痛药效学和急性毒理学研究。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药RB-200智能热板仪(成都泰盟科技有限公司产品)，AEL-200型电子分析天平(日本岛津公司)，阿司匹林(佳木斯制药厂提供，批号:091117)，冰醋酸(天津博地迪化工有限公司提供)，玄芷镇痛片(华中科技大学同济医学院附属同济医院药学部提供，批号:20051210)。

1.2 动物昆明种小鼠，清洁级，雌雄按实验要求而定，体质量(20.0±2.0)g，动物合格证号:SCXK(鄂)2004-0007，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。

1.3 实验方法

1.3.1 小鼠扭体实验取小鼠100只，雌雄各半，称质量标记后随机分为5组，每组20只，玄芷镇痛片低、中、高剂量组灌服药粉混悬液(2.72，5.44，10.88 g·kg－1，以生药量计)，阳性对照组灌服阿司匹林水溶液(0.40 g·kg－1)，阴性对照组灌服等量0.5%羧甲基纤维素钠悬液。均每天1次，连续用药7 d，末次给药30 min后，各小鼠腹腔注射0.6%醋酸溶液(临用前配制)，0.1 mL·(10 g)－1。5 min后观察并记录注射醋酸溶液后15 min内出现的扭体反应(腹部收缩内凹，伸展后肢，臀部抬高，蠕行)的次数，并计算玄芷镇痛片镇痛率。镇痛率(%)=每组镇痛鼠数/每组总鼠数×100%[2-3]。

1.3.2 热板实验①动物筛选:将小鼠置55℃热板仪上，用秒表记录小鼠自投入热板至出现添后足的时间(s)，作为该鼠的基础痛阈。给药前先测定每只小鼠的基础痛阈，共测2次，剔除喜跳跃者，10 s＜基础痛阈＜30 s为合格。②动物分组及处理:将筛选合格的小鼠(全部为雌性)，随机分为5组，每组20只，玄芷镇痛片低、中、高剂量灌服药粉混悬液(分别为2.72，5.44，10.88 g·kg－1，以生药量计)，阳性对照组灌服阿司匹林水溶液(0.4 g·kg－1)，正常组灌服等量0.5%羧甲基纤维素钠悬液，均每天1次，连续7 d，于末次给药后0.5，1，2，4 h按上述基础痛阈测定法分别测定痛阈，如痛阈超过60 s，即停止测试而按60 s计，以免烫伤足部。实验结果见表2。痛阈提高率(%)=(给药后平均痛阈－给药前平均痛阈)/给药前平均痛阈×100%[3-4]。

1.3.3 玄芷镇痛片最大耐受量实验取昆明种小鼠40只，雌雄各半，适应性饲养2 d后，随机分成两组，每组20只。实验前禁食12 h，给药组以玄芷镇痛片清膏混悬液分两次灌胃给予，给药剂量为259.2 g·kg－1(按生药量计)。取浓度为3.24 g·mL－1(按生药量计)的玄芷镇痛片药液，按最大容积1.6 mL·(20 g)－1分两次灌胃给药;对照组同法给予对照溶液，1.6 mL·(20 g)－1，两次用药时间相隔8 h。

观察动物体质量变化、饮食、外观、行为、分泌物、排泄物等，记录所有动物死亡情况、中毒症状及中毒反应起始时间、严重程度、持续时间等。对濒死及死亡动物进行大体解剖，其他动物在观察期结束后进行大体解剖。肉眼观察主要脏器的体积、颜色、质地等，若出现异常则对改变器官进行组织病理学检查[5-6]。共观察7 d，尤其是详细观察给药后4 h内动物的反应情况，然后每天上下午各观察1次。

1.4 统计学方法采用SPSS11.0进行数据分析，并采用χ2检验进行阳性率的比较。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 小鼠扭体实验结果见表1。实验结果表明，阳性对照组、玄芷镇痛片各剂量组小鼠扭体次数显著低于阴性对照组，其中阳性对照组和玄芷镇痛片中、高剂量组扭体次数更少。玄芷镇痛片高剂量组镇痛率与阳性对照组相近，且扭体次数较接近阳性对照组，两组比较差异无统计学意义。提示各剂量玄芷镇痛片对小鼠醋酸所致的疼痛有显著镇痛作用，并呈现一定的量效关系，且高剂量组镇痛作用接近阿司匹林。

表1 5组小鼠扭体反应测定结果Tab.1Effect of xuanzhi analgesic tablet on the writhing response induced by acetic acid in mice ±s

表1 5组小鼠扭体反应测定结果Tab.1Effect of xuanzhi analgesic tablet on the writhing response induced by acetic acid in mice ±s

与阴性对照组比较，*1P＜0.05，*2P＜0.01Compared with negative control group，*1P＜0.05，*2P＜0.01

组别小鼠/只剂量/(g·kg－1)15 min扭体次数镇痛率/%玄芷镇痛片低剂量组202.7214.3±5.5*140中剂量组205.559.8±6.3*250高剂量组2010.887.2±6.5*260阳性对照组200.405.1±4.8*270阴性对照组2027.0±13.60

2.2 热板实验痛阈测定结果见表2与图1。实验结果显示，玄芷镇痛片各剂量组痛阈在用药1，2，4 h均较正常组高，其中阳性对照组，玄芷镇痛片中、高剂量组痛阈提高更明显，玄芷镇痛片中、高剂量组痛阈4 h较2 h明显增高，而阳性对照组则增高不明显;玄芷镇痛片各剂量组痛阈提高率均大于或等于阳性对照组。提示玄芷镇痛片能提高小鼠热刺激所致疼痛痛阈，明显提高痛阈率，并且作用持续时间较长。玄芷镇痛片各剂量组与阳性对照组起效时间虽然相同，但作用持续时间长且效果优于阿司匹林。

2.3 玄芷镇痛片最大耐受量测定结果给药组小鼠于给药后4 h内活动减少。两组小鼠1周内摄食、饮水、大便、黏膜、皮毛、呼吸等均未发生异常，且各组小鼠均无死亡。两组小鼠体质量及其体质量增加率差异无统计学意义，见表3。7 d后，处死小鼠，作系统尸检。结果各主要脏器均未发现异常变化。提示玄芷镇痛片口服给药的最大耐受量为259.2 g·kg－1(按生药量计)，按体质量计算相当于每日临床剂量的476倍;按动物系数折算相当于每日临床剂量的48倍;由于该药使用后短期内未见任何毒性反应及死亡，提示其急性毒性较小，使用较安全。

表2 5组小鼠热板实验痛阈测定结果Tab.2Effect of XUANZHI Analgesic Tablet on the pain induced by hot plate in mices，±s

表2 5组小鼠热板实验痛阈测定结果Tab.2Effect of XUANZHI Analgesic Tablet on the pain induced by hot plate in mices，±s

与正常组比较，*1P＜0.05，*2P＜0.01Compared with normal group，*1P＜0.05，*2P＜0.01

组别小鼠数剂量/(g·kg－1)用药前0.5 h1 h2 h4 h玄芷镇痛片低剂量组202.7213.0±4.514.6±6.919.1±4.7*121.4±11.9*221.0±8.7*1中剂量组205.4415.9±5.514.9±4.723.6±8.1*224.0±7.1*233.4±18.4*2高剂量组2010.8814.1±4.814.3±6.722.8±5.3*225.9±14.6*232.4±16.4*2阳性对照组200.4015.6±5.411.6±3.525.3±5.3*223.3±7.8*224.2±13.9*1正常组20…16.7±7.012.5±4.713.7±8.115.8±6.718.9±7.3

表3 两组小鼠最大耐受量实验体质量测定结果Tab 3Body weight of 2 groups of mice in MTD experiment ±s

表3 两组小鼠最大耐受量实验体质量测定结果Tab 3Body weight of 2 groups of mice in MTD experiment ±s

组别小鼠/只体质量/g/%给药组死亡/只给药前给药后体质量增加率20020.06±1.3224.24±1.8420.84对照组20020.31±1.2724.09±2.1018.61

3 讨论

血管性头痛是一种由于血管舒缩功能障碍引起的反复发作性头痛，是临床常见病、多发病。它包括西医的偏头痛、紧张性头痛，以及与头颅组织结构无关的各种头痛，属中医头痛、头风、偏头痛等范畴[7]。1988年的全国流行病学调查显示，血管性头痛的患病率约为1%[1]。偏头痛频繁发作会严重影响患者的身心健康、日常生活以及工作与学习。玄芷镇痛片由白芷、延胡索、川芎、丹参等中药组成，具有活血镇痛、平肝潜阳的功效。该药临床治疗血管性偏头痛疗效确切。本实验通过小鼠扭体实验及热板实验，充分展示了该药镇痛作用，其作用强度与阿司匹林接近，且作用更持久。该结果充分印证了其组方的有效性及合理性。由于在多年临床应用中，未发现患者反馈有不良反应，故认为该药的毒性较低，实验中由于无法测得半数致死量，故只能进行最大耐受量测定，实验结果表明其最大耐受量达259.2 g·kg－1(按生药量计)，已经是能够达到的最大口服给药量，7 d后仍未见任何毒性反应及死亡情况，说明该药急性毒性较小，使用较安全。

文献报道[7]小鼠热板法在测定麻醉性镇痛药时较为适宜，舔足底动作不仅是脊髓反应，而且可能与高级中枢有关。本实验用热板法观察该药的镇痛作用，结果表明玄芷镇痛片对热刺激的疼痛止痛较为敏感，提示其镇痛部位可能在中枢。采用扭体法观察发现该药能明显减少小鼠因醋酸刺激所致扭体的次数，各剂量组对小鼠醋酸所致的疼痛有显著缓解作用，并呈现一定的量效关系，高剂量组镇痛效果接近阿司匹林组，提示该制剂对化学致痛也有明显的镇痛作用。

[1]赵瑞成，周慎.偏头痛辨治规律分析[J].湖南中医杂志，2004，20(4):8－10.

[2]徐叔云，卞如濂，陈修，等.药理实验方法学[M].北京:人民卫生出版社，2001:228－229，886.

[3]陈冠林，周福生，王汝俊.康泰胶囊对内脏高敏感性模型大鼠及小鼠的镇痛作用研究[J].中药材，2010，34(1):116－119.

[4]国家食品药品监督管理局药品评审中心.药品技术审评论坛·药物研究技术指导原则(征求意见稿)——中药、天然药物分册[S].2003:23－25.

[5]中华人民共和国卫生部药政管理局.中药/新药研究指南(药学、药理学、毒理学)[M].北京:人民卫生出版社，1993:203－204.

[6]偏头痛诊断与防治专家共识组.偏头痛诊断与防治共识[J].中华内科杂志，2006，45(8):694－695.

[7]程体娟，杨军英.嘛呢骨痹液的抗炎镇痛作用实验研究[J].中药新药与临床药理，2004，15(1):34.