核因子-κB在子宫内膜癌中的表达及其与ER、PR蛋白表达的相关性

王俊芳，谷丽萍，许天敏，曹成成，刘菲菲，刘 影

（吉林大学第二医院 妇产科，吉林 长春 130041）

核因子-κB在子宫内膜癌中的表达及其与ER、PR蛋白表达的相关性

王俊芳，谷丽萍＊，许天敏，曹成成，刘菲菲，刘 影

（吉林大学第二医院 妇产科，吉林 长春 130041）

目的 探讨NF-κB在子宫内膜癌中的表达及其与ER、PR的相关性，分析其在子宫内膜癌发生、发展、侵袭、转移中的作用。方法应用免疫组织化学S-P法检测42例子宫内膜癌、20例子宫内膜增生症、15例正常子宫内膜中NF-κBp65的表达，用Motic Images Advanced 3.2图像分析软件测灰度值，测得的灰度值越小表达阳性越强。结果子宫内膜癌中NF-κBp65的表达灰度值为（93.93±3.96）明显低于子宫内膜增生症组［（126.65±5.02），P＜0.01］和正常子宫内膜组［（123.20±4.78），P＜0.01］，而子宫内膜增生症（126.65±5.02）与正常子宫内膜相比无统计学意义［（123.20±4.78），P＞0.05］；子宫内膜癌中NF-κBp65的表达与手术-病理分期、组织学分级、肌层浸润深度及淋巴结有无转移有关，与ER的表达成负相关，与PR表达无关。结论NF-κBp65与子宫内膜癌的发生、发展、转移、浸润有关，雌激素可能调控NF-κB的表达。

子宫内膜癌；核因子κB；雌激素受体；孕激素受体；免疫组织化学

（ChinJLabDiagn，2012，16：0249）

子宫内膜癌（endometrial carcinoma EC）是发生于子宫内膜的一组上皮性恶性肿瘤，为女性生殖道三大恶性肿瘤之一，占女性全身恶性肿瘤的6%［1］，近年来发病率在世界范围内呈现明显上升的趋势，2010年美国有43000例新发子宫内膜癌患者［2］。但其发病的分子机制仍不清楚，核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）是一种转录因子，普遍存在于真核生物的细胞中，过度激活在人类肿瘤的发生、迁移中起着重要的作用，P50-p65异源二聚体是NF-κB的典型代表，含量最多、分布最广、生物活性最高，p65与肿瘤的关系最密切［3］，其在子宫内膜癌中的研究甚少，并且结论不一致；与雌激素受体（estrogen receptor，ER）的关系也存在争议。本研究应用免疫组化方法研究NF-κBp65在子宫内膜癌中的表达，及其与雌、孕激素受体（progesterone receptor，PR）的关系，为NF-κBp65可能成为子宫内膜癌诊断、治疗、判断预后的一种新的指标提供前期理论依据。

1 材料与方法

1.1 资料来源收集吉大二院住院行手术切除的子宫内膜癌患者42例（根据2009年FIGO分期Ⅰ期28例、Ⅱ期7例、Ⅲ－Ⅳ期7例），正常子宫内膜患者15例（增生期8例、分泌期7例）和子宫内膜增生症患者20例（单纯性增生10例、复杂性增生5例、非典型增生5例），标本取下后立即泡于10%福尔马林固定液中固定24h，常规石蜡包埋备用，所有患者术前均未接受过放疗、化疗，未服用过性激素类药物治疗。

1.2 试剂兔抗NF-κBp65抗体购于北京博奥森生物技术有限公司，SP-9710试剂盒和DAB试剂盒购于福州迈新生物技术开发有限公司。

1.3 方法石蜡标本4μm连续切片，采用常规免疫组化S-P法染色，DAB显色测定NF-κBp65的表达，磷酸盐缓冲液PBS代替一抗做阴性对照，已知阳性片（试剂公司提供）做阳性对照。

1.4 结果判定细胞质出现棕黄色颗粒为NF-κBp65阳性，细胞核用苏木精复染为蓝色。计算机图像分析：采用Motic Images Advanced 3.2图像分析软件对42例子宫内膜癌、20例子宫内膜增生症、15例正常子宫内膜标本的切片进行免疫组化结果的定量分析，每张切片于200倍视野下选取互不重叠的10个代表性区域，测得阳性细胞的灰度值，取其平均值为该切片的灰度值。灰度值越小表达阳性越强。根据灰度值来判定结果的差异性。

1.5 统计学处理应用SPSS 13.0统计学软件对实验数据进行统计学分析，所得数据均以均数±标准差（±s）表示，两组间的比较用t检验，多组间比较用单因素方差分析。

2 结果

2.1 NF-κBp65的表达NF-κBp65在正常子宫内膜、子宫内膜增生症、子宫内膜癌组织中的表达灰度值见表1。3组比较有统计学意义（F＝13.852，P＜0.01）。3组中两两比较：正常子宫内膜组与子宫内膜增生症组比较，无统计学意义（P＞0.05）；子宫内膜癌组与子宫内膜增生症组比较，与正常子宫内膜组比较，均有统计学差异（P＜0.01）。

2.2 NF-κBp65与子宫内膜癌的手术-病理分期、组织分级、病理类型、肌层浸润深度及淋巴结有无转移的关系，见表2。

表1 NF-κBp65在三组中的表达（灰度值，±s）

表1 NF-κBp65在三组中的表达（灰度值，±s）

组别 n NF-κBp65（±s）正常子宫内膜组15 123.20±4.78子宫内膜增生症组 20 126.65±5.02子宫内膜癌组42 93.93±3.96

表2 NF-κBp65在不同病理特征子宫内膜癌中的表达（±s）

表2 NF-κBp65在不同病理特征子宫内膜癌中的表达（±s）

注：①包括浆液性癌、透明细胞癌、癌肉瘤（苗勒氏管混合瘤）。

类别 n NF-κBp65（±s） P值手术-病理分期Ⅰ-Ⅱ期 35 97.11±5.16 ＜0.01Ⅲ-Ⅳ期 7 78.00±4.55组织学分级G1-G2 31 97.65±6.90 ＜0.05 G3 11 84.82±5.80肌层浸润深度≤1／2 31 99.00±9.02 ＜0.01＞1／2 11 81.45±6.92淋巴结转移无36 96.42±6.15 ＜0.01有6 79.00±4.05病理类型腺癌 38 95.32±8.24 ＞0.05其他类型①4 83.60±7.66

子宫内膜癌中随着手术-病理分期的增加、组织学分级的降低、肌层浸润深度的增加及淋巴结的转移灰度值降低、表达增强，有统计学意义（P＜0.05）。腺癌与其他病理类型比较灰度值增加、表达减弱但无统计学意义（P＞0.05）。

2.3 子宫内膜癌中NF-κBp65与ER、PR的相关性

ER阳性组与ER阴性组的灰度值分别为107.21±9.25、85.31±6.35，两者比较有统计学意义（t＝3.48，P＜0.01），PR阳性组与PR阴性组的灰度值分别为106.51±9.57、92.21±4.88，两者比较无统计学意义（t＝1.59，P＞0.05）。见表3。

表3 子宫内膜癌中NF-κBp65与ER、PR的相关性（±s）

表3 子宫内膜癌中NF-κBp65与ER、PR的相关性（±s）

受体类别 n NF-κBp65（±s） P值ER阳性（＋） 29 107.21±9.25 ＜0.01阴性（－） 13 85.31±6.35 PR阳性（＋） 28 106.51±9.57 ＞0.05阴性（－）14 92.21±4.88

3 讨论

子宫内膜癌是临床常见的恶性肿瘤之一，近年来发病呈上升趋势，发病机制仍不是很清楚，涉及细胞凋亡、血管生成等多种细胞因子及基因的相互作用。NF-κB是一种广泛存在于哺乳动物细胞中的转录因子，对肿瘤的发生、增殖、血管生成、转移都用重要的调控作用［5］。NF-κBp65是由 Sen与 Baltimore等首次从B淋巴细胞提取物中检测到的一种可与免疫球蛋白κ轻链基因增强子κB序列（GGGACTTCCC）特异性结合的核蛋白因子［5］，静息状态下NF-κB与其抑制因子I-κB结合以无活性的复合物形式存在于细胞的胞浆中，当细胞受到炎性细胞因子、细菌、毒素、生长因子等刺激时，其与I-κB解离活化进入细胞核并与靶基因上的κB位点发生特异性结合，从而参与多种基因的转录，包括免疫炎症反应、肿瘤细胞的增殖、凋亡，转移等［6］。

研究发现，多种肿瘤中存在着NF-κB的活化表达，如前列腺癌、胰腺癌、胃癌、甲状腺癌、结肠癌等。在妇科肿瘤方面也有类似研究，BrancaM［7］等的研究表明NF-κBp65阳性表达率在慢性宫颈炎组、CIN组、宫颈癌组中逐渐升高，提示可能和宫颈癌的发生、发展有关；Shibata［8］等研究发现 NF-κBp65的表达与上皮性卵巢癌血管生成关系密切，提示可能与肿瘤的转移有关；在子宫内膜癌中研究结论不一致，Vaskivuo［9］等用原位杂交的方法发现，NF-κB在子宫内膜癌中的表达低于子宫内膜增生症；陈丽平、孔祥［10］等用免疫组化研究发现，NF-κBp65在子宫内膜癌中的表达高于正常子宫内膜，子宫内膜中中低分化的表达高于高分化；严艳［11］等研究发现子宫内膜腺癌中NF-κBp65明显高于正常增生期的子宫内膜及增生过长的子宫内膜，随着手术分期的增加和分化程度降低NF-κBp65表达含量增加，从而推测NF-κBp65与子宫内膜癌的发生、发展有密切关系。

本实验研究显示NF-κBp65在子宫内膜癌中灰度值明显小于正常子宫内膜及子宫内膜增生症，阳性表达量明显强于后两者，提示NF-κBp65与子宫内膜癌的发生有关，在子宫内膜癌中随着手术-病理分期的增加、组织学分级的降低、肌层浸润深度的增加、淋巴结的转移NF-κBp65的灰度值逐渐减小，阳性表达逐渐增强，提示NF-κBp65与子宫内膜癌的转移、浸润有关，推测它可能通过促进血管内皮生长因子、基质金属蛋白酶等与血管生成相关的因子转录表达，从而参与子宫内膜癌的浸润、转移。子宫内膜癌分为雌激素依赖型与非雌激素依赖型，非雌激素依赖型一般雌激素受体阴性，恶性程度高，预后差。本实验研究显示子宫内膜癌中ER阴性组的NF-κBp65的灰度值明显低于ER阳性组，表达明显增强，提示其与雌激素在子宫内膜癌的发病过程中可能存在着相互调节作用，并且可能与子宫内膜癌的预后有关。

综上，NF-κBp65与子宫内膜癌的发生、发展、浸润、转移有密切关系，有望成为子宫内膜癌临床诊断、治疗、判断预后及随访的一项生物学指标。

［1］Jenud A，Siegel R，ward E，et al.Cancer statistics，2009［J］.CA Cancer J Clin，2009，59：225.

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The study of NF-κB expression in endometrial carcinoma and the correlation with ER and PR expression

WANGJunfang，GULi-ping，XUTian-ming，etal.（DepartmentofObstetricsandGyneoology，thesecondAffiliatedHospital ofJilinUniversity，Changchun130041，China）

ObjectiveTo explore the expression of NF-κB in endometrial carcinoma and the correlation with ER and PR expression，research the role of NF-κB in occurrence、development、invasion and transformation of endom etrial carcinoma.MethodsS-P immunohistochemical method was used to detect the expressions of NF-κBp65in the 42endometrial carcinoma、20endometrial hyperplasia、15normal endometrium，Gray scale value was measured by Motic Images Advanced 3.2image analysis software，the smaller of the gray scale value，the stronger of the positive expression.ResultsGray scale value of NF-κBp65in endometrial carcinoma being（93.93±3.96）was obviously lower than that in endometrial hyperplasia［（126.65±5.02），P＜0.01］and normal endometrium［（123.20±4.78），P＜0.01］.There was no significant difference between endometrial hyperplasia（126.65±5.02）and normal endometrium［（123.20±4.78），P＞0.05］；The expression of NF-κBp65in endometrial carcinoma tissues was correlated with surgical-pathological grades、histological grades、depth of myometrial invasion、lymphatic metastasis or no，There was a inverse correlation between NF-κBp65and expression of ER，There was no significant difference between NF-κBp65and expression of PR.ConclusionNF-κBp65is related to occurrence，development、invasion and transformation of endometrial carcinoma and Estrogens may control the expression of NF-κBp65.

endometrial carcinoma；endometrial；carcinoma；ER；PR

R737.33

A

1007－4287（2012）02－0249－03

吉林省科技发展计划项目（200705252、［2008］47-2-04）

＊通讯作者

2011－01－12）