DNA定量分析系统用于非典型鳞状细胞检查的评估

李文峰 张慧晶

目前，非典型鳞状细胞（atypical squamouscells,ASC）是指鳞状上皮已经增生，并且出现了异型性，包括无明确诊断意义的非典型的鳞状上皮细胞(ASC—US)和不除外高度病变的非典型鳞状上皮细胞(ASC—H)[1],其诊断一直没有一个统一的标准，各实验室细胞学医生的诊断标准亦有差别，且主观性强[2]。导致对ASC的处理意见多样，根据2001年美国阴道镜和子宫颈病理学会（the American Society for Colposcopy and Cervical Pathology,ASCCP）制定的处理指南，提出了3种处理意见：（1）直接行阴道镜检查。（2）4～6个月复查细胞学。（3）行高危型HPV DNA检测，阳性者行阴道镜检查，阴性者6～12个月复查细胞学。但由于我国宫颈病发病率高，本地区经济欠佳，随访条件受到制约等原因，我们尝试对ASC的病人进行DNA定量分析系统检测，取得了较好的效果，现报道如下：

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2008年6月～2010年11月湖北省钟祥市计划生育服务站检测出的ASC病例60例，其中意义不明的非典型鳞状上皮细胞（ASCUS，atypical squamous cells of undetermined significance）52例，非典型鳞状上皮内病变，不排除高度病变（ASC-H,atypical squamous cells,cannot exclude hig-grade squamous intraepithelial lesion）8例。年龄20～53岁，平均年龄34岁。

1.2 方法

1.2.1 器材 SPICM-DNA型全自动细胞肿瘤筛查分析系统，Feuigen染液等。

1.2.2 液基薄层制片及染色 将装有固定液和刷头的标本收集管，加入0.1%DTT消化液放在震荡器上震荡2小时，然后将消化后的细胞悬液离心5分钟（1000转/分），弃上清液后，加50%酒精分别清洗、离心两次（1000转/分，5分钟/次）。然后将用固定液稀释的细胞混悬液，放入细胞涂片离心机甩片5分钟，每例制成1张薄层细胞学片，进行FeulgenDNA染色做DNA定量测定。

1.2.3 细胞DNA定量分析 SPICM-DNA型全自动细胞肿瘤筛查分析系统根据不同细胞成分所具有的不同特征参数来完成自动细胞分类和计数过程，标准对照细胞为同张玻片上的100个正常上皮细胞，所测出的平均光密度（IOD,Intergrated Optical Density）为2C的参考值，其CV（Coefficient of Variation）值小于5%。

根据SPICM-DNA型全自动细胞肿瘤筛查分析系统所做的细胞DNA倍体分析结果及处理方法有如下三种情况：⑴正常2C细胞为主，未见异倍体细胞及异倍体细胞峰，建议一年复查。⑵出现DNA指数（D1）大于2.5细胞及DI在1～2之间的细胞数超过被测细胞总数的10%，建议病理活检。⑶出现异倍体细胞峰及大量D1大于2.5的细胞，建议病理活检。

1.2.4 病理诊断 对60例ASC病例均在阴道镜下对宫颈可疑部位进行组织活检。病理诊断报告为：正常、宫颈炎、宫颈上皮内瘤变CINI级、CINⅡ级、CINⅢ级或原位癌及浸润癌。

1.3 统计学方法 以宫颈活检病理诊断结果为标准，评价DNA定量分析系统筛查ASC中宫颈癌及癌前病变的敏感性、特异性。敏感性（%）=[真阳性/（真阳性+假阴性）]×100%，特异性（%）=[真阴性/（真阴性+假阳性）]×100%。

2 结果

DNA定量分析系统用于非典型磷状细胞筛查结果如下：

在52例ASCUS患者中，DNA定量分析系统检测异常36例，病理组织活检异常（包括CINI、CINⅡ、CINⅢ或原位癌及浸润癌）符合34例，DNA定量分析系统检测假阴性1例，假阳性2例。敏感性为97.1%，特异性为90.0%。

在8例ASC-H患者中，DNA定量分析系统检测异常6例，病理组织活检异常（包括CINI级、CINⅡ级、CINⅢ级或原位癌及浸润癌）符合6例。DNA定量分析系统检测无漏诊，假阳性1例。其敏感性为100%，特异性为66.7%。

3 讨论

宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤，在女性恶性肿瘤中位居第二位，占癌症患者总数的15%，严重威胁女性的健康，每年有371200个新发病例，约200000例死亡。特别是在经济水平低下以及缺乏宫颈肿瘤普查手段的发展中国家，宫颈癌发病率更高[3]。现在降低宫颈癌病死率的最有效手段依然是早发现、早诊断和早治疗，故准确地检测出宫颈癌前病变显得尤为重要。在宫颈癌前病变中，ASC是一类不能明确诊断为无上皮内病变及恶性改变（negative for intraepithelial lesion or malignancy，NILM）和鳞状上皮内病变（squamous intraepithelial lesion，SIL）的一类细胞。有研究资料表明，ASC中真正低于CIN的病变仅占40%，半数以上病例为CIN与癌，其中高级别病变与癌在ASC-US和ASC-H中的比例分别达18.68%与33.3%[4]。由于受到感染、变性改变、炎症刺激、可能存在癌细胞、出现风干现象以及实验室在染色和制片技术上的差别等原因，ASC的诊断标准一直难以统一；2001年TBS（The Bethesda System，TBS）系统更新，将ASC分为ASCUS和ASCH[5],但细胞学医生对它并不能作出准确并可重复性的判读。而对ASC的处理，ASCCP作出了明确的说明，但受到经济条件、随访条件等原因的影响，而DNA定量分析系统能够解决这些问题，它不需要长时间的随访，也不需要对病人再行宫颈部位的各种检查，且准确性和特异性均较好。

在ASCUS检查中出现的1例假阴性，系统只扫描出2027个细胞，且炎症细胞比例占62%，固缩核细胞比例占15%，可供分析的细胞只占23%。可能是分析细胞数目过少导致仪器没检测出。而出现的2例假阳性，其中1例有口服避孕药史，另1例经检查，维生素B12低于正常参考范围，而口服避孕药、维生素B12缺乏等因素，均可影响细胞DNA异常。在判读为ASC-H的患者，提示潜在的CINⅡ或CINⅢ，其阳性预测价值较ASC-US更高，但比明确诊断为HSIL预测CINⅡ或更严重病变的价值要低[6-7]。此次在ASC-H中出现的1例假阳性为老年女性，宫颈萎缩，可能因该患者年龄偏大（53岁），激素水平紊乱导致核改变有关。

总之，DNA定量分析系统用于ASC的检测中，不管是敏感性还是特异性均较好。用该方法进行检测值得尝试。

此次分析病例数较小，下次将在更大群体和更广的范围中进行。但DNA定量分析系统用于ASC患者检查，可以使ASC的病变更明确；结合本单位实际，对ASC患者的处理，在征得患者理解的前提下，进行DNA定量分析系统检测，结果异常者，进行宫颈组织活检；结果正常者1年复查。

[1]刘君芬.TCT结合HR-HPV检测在宫颈癌筛查中的应用[J].当代医学,2008,14（11）：55.

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