结核分枝杆菌的检验与分型

2012-08-15徐三

中国卫生产业 2012年7期

关键词：结核分型多态性

徐三

(东阳市疾控中心浙江东阳 322100)

结核分枝杆菌的检验与分型

徐三

(东阳市疾控中心浙江东阳 322100)

目的结核患者的结核分枝杆菌检验和分型。方法采用PCR及琼脂糖凝胶电泳技术,针对124株结核分枝杆菌的6个可变重复位点做了检验,并应用Gel－Proanalyzer3.0软件及BioNumerics(Version3.0)软件对检验结果做了相关的基因型分析,又分析了基因检测与分型之间的关系。结果136株结核分枝杆菌共分为37个不同的VNTR类型,成簇基因型占74.26%(101/136),单一基因型占25.74%(35/136)。结论耐药菌株的检测在分布上存在统计学的差别。

结核分枝杆菌检验分型

在分子生物学发展的今天,我们通常利用可变数目串联重(variablenumbertan demrepeat,VNTR)分型技术对结核分枝杆菌的检验与分型,它具有操作简单,分型信息为数字型的,是可以重复的,实验室内与实验室间具有可比性,所以用大量样本做了分析,通过对结核分枝杆菌的检验和检测,得出的结核杆菌的检验与分型数据,也为各项研究提供了依据。

1 材料

1.1 菌株的来源

菌株的来源：由结核病防治所提供的136株结核分枝杆菌菌株,通过临床分离株进行分析。

1.2 主要实验试剂

TaqDNA聚合酶、dNTP、GoldViewTMDNA染料的准备;实验中所用PCR材料的准备;100bpDNAladder的购进。

1.3 主要实验仪器

生物安全柜、台式高速离心机、培养箱、DNA的自动扩增仪、恒压恒流电泳仪及凝胶成像系统。

1.4 所用到的软件

BioNumerics方面的,进行统计分析的软件;利用SPSS做统计工作的软件。

2 结果

(1)对136株临床分离株的菌种进行鉴定后的结果。利用PNB及TCH对136株临床分离菌做实验,利用它在培养基中所出现的问题对结核分枝杆菌、牛分枝杆菌和非结核性分枝杆菌做进一步的分析,得到的最后结果：136株临床分离株被鉴定为结核分枝杆菌。

(2)136株结核分枝杆菌的药敏结果。在对菌株研究的过程中,所得到的结果是：完全敏感菌株有102株,占75%(102/136),耐药菌株34株,占到最25%(34/136)。

(3)136株结核分枝杆菌VNTR结果。在有经验的专家进行了研究以后,我又选用了8个基因位点做了进一步的研究,对这里选用的136株结核分枝杆菌进行了相关的检验,也H37RV做了相关数据的对照,得用100bpDNAMarker进行了分子量的对比,主要表现为11个分子量的标准带,数据显示如下100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000bp及1500bp。通过上面的结果可以知道存在于同一位点的扩增片段的大小是不同的,菌株在不同位点的DNA指纹图谱具有多态的特性。

(4)菌株的VNTR位点会出现重复出现,这里的重复次数及位点的等位基因其具有的多态性不同而出现不同的VNTR指纹图谱,可以根据别的待检验菌株的DNA条带为选点,对分子量大小做出分析与统计,再以每个菌株位点的不同,根据重复次数再进行计算。这样可以得出136株结核分枝杆菌的等位基因的多态性,结果显示为：各位点具有不同的等位基因的多态性,而MTUB21位点的多态性相对高一些,即0.575,ETR－B位点的多态性相对低一些,即0.309。

3 讨论

此项研究是对结核患者的136株结核分枝杆菌的基因分型与检验,以上结果表明了该地区耐药结核分枝杆菌在临床分离菌株中占有一定的比例(25%),比我国在2000年所做的结核病流行病学的调查结果要低,这里的耐药结核的预防和控制在所有的结核病治疗、预防和控制中有着重要的意义,特别是对耐多药结核病的预防与控制显得特别重要。

3.1 结核病患者的VNTR指纹特征的多态性分析

在该研究中对6个位点进行了研究,对VNTR基因进行了分析,对菌株的等位基因的多态性做出了统计与分析以后,得到了6个位点的等位基因分别具有多态性这一特点,它的多态性在0.309～0.575之间。这一项结果是在VNTR基因分型技术所得到的,它为可变数目串联重复序列的筛选及确定提供了可靠的数据。通过对6个VNTR位点的统计与分析,在BioNumerics软件的辅助下,做了聚类的分析,136株结核分枝杆菌中有37个基因型。有34(25%)位患者的分离株可确定为单一基因型。