老年人胃癌组织中P16和CyclinD1蛋白的表达及临床意义

宋金平 李小宁

癌基因的激活和抑癌基因的失活在肿瘤的发生、发展中起重要作用。P16基因是1993年发现的抑癌基因[1]，属于细胞周期抑制因子，有负向调节细胞周期的作用，可与细胞周期蛋白D1(cyclind1)竞争结合细胞周期激酶4(CK4)，使细胞周期停滞于G1期。CyclinD1是细胞周期的正调节因子，也是一种原癌基因，CyclinD1蛋白过表达可以促使细胞增殖。胃癌是消化道常见的恶性肿瘤，P16和CyclinD1均与胃癌的发生关系密切[2]，而在老年人胃癌中P16和CyclinD1蛋白的表达仍不十分清楚，本实验用免疫组织化学方法检测胃癌组织中P16和CyclinD1蛋白的表达探讨其蛋白表达与老年人胃癌临床病理特征之间的关系。

1 资料与方法

1.1 资料收集 收集2004年1月至2010年12月间住院患者手术切除胃癌标本85例，均为老年患者即年龄60～84岁，中位年龄68.6岁、进展期胃癌;患者中男66例，女19例;术前均未行放、化疗。

1.2 组织芯片的构建 在显微镜下定位标记的肿瘤组织，自制成10～18组织阵列(每一标本取二块组织芯，其直径1.6 mm)蜡块(专利号200920350099.2)。正常组织取自手术残端(选取距肿瘤7 cm以上的胃组织)共30例。

1.3 免疫组织化学染色 采用EnVision法[3]，以套细胞淋巴瘤和宫颈癌组织作为CyclinD1和P16的阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。

1.4 统计学分析 所有数据均采用SPSS统计学软件进行统计学处理，阳性率之间的比较采用χ2检验，两变量之间的关系分析采用Spearman等级相关分析表示，检验标准以α=0.05为显著性检验水准，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

正常胃组织和胃癌组织中P16和CyclinD1的表达，免疫组织化学染色结果判断:P16和CyclinD1阳性呈棕黄色，均定位于细胞核。阳性细胞大于10%，则判读为阳性。P16在胃癌组织中表达率为52.9%(45/85);30例正常组织均呈阳性表达，表达率为100%。CyclinD1在胃癌组织中表达率为和75.3%(64/85)(图1);30例正常组织均不表达。

3 讨论

P16基因定位于染色体9q21，编码相对分子质量为16 kDa的P16蛋白，特异性抑制细胞周期蛋白依赖性激酶4和6活性，调控细胞周期，参与了人类多种肿瘤的发生和发展，故又称多种肿瘤抑制基因。多项研究[4]表明胃癌组织中均有P16蛋白表达降低，并与淋巴结转移密切相关。本组研究发现P16蛋白在30例正常胃黏膜标本中全部呈现阳性表达，而在胃癌组织中的阳性表达率为52.9%(45/85)，有统计学意义(P＜0.05)，P16蛋白下降和失表达可能是由于受损细胞未得到修复呈失控性生长而形成了肿瘤。

细胞周期与细胞癌变不是相互独立的事件，细胞周期的调控对肿瘤发展有很大影响。CyclinD1作为细胞增殖周期的正调节因子，在细胞周期进程中起关键作用。CyclinD1蛋白由CyclinD1基因(又称CCND1基因)编码，295个氨基酸组成，此基因位于人染色体11q13上。编码蛋白半衰期很短，不足25 min。CyclinD1蛋白在细胞G1期进程中控制着G1期的时间，它们作为调节CyclinD1是细胞周期素家族中最重要的成员，其高表达可激活CDK4使抑癌基因表达产物Rb蛋白失去对细胞周期的制动功能促使细胞由G1期向S期演进。本组研究中正常胃组织中CyclinD1不表达而胃癌中高表达，表达率为75.3%(64/85)，差异有统计学意义(P＜0.01)，与文献[5]报道相同。

总之，本组实验结果显示:老年人胃癌组织中P16的下降可能是胃癌中引起CyclinD1上升的原因之一;P16蛋白与CyclinD1的相互作用导致细胞周期紊乱可能参与了胃癌的发生，联合检测P16与CyclinD1蛋白有助于判断老年人胃癌的恶性程度和生物学行为。

[1]Serrano M，Harmon Cr.Beach D.A nff-ov regulation motif in cell cycle control causing spinal inhibition of cyclinD/CDK4.Nalnre，1993，366(6456):704-707．

[2]Maddika S，Ands SR，Panigrahi S，et al．Cell survival，cell death and cell cycle pathways are interconnected:implications for cancer therapy.Drug Resist Updat，2007，10(1-2):13-29．

[3]韩静，何丹，冯智英.广州地区EB病毒相关胃癌的临床病理及相关分子表达．中华病理学杂志，2010，39(12):798-803．

[4]Tahara T，Arisawa T，Shibata T，et al．Risk prediction of gastric cancer by analysis of aberrant DNA methylation in non-neoplastic gastric epithelium.Digestion，2007，75:54-61．

[5]Mukhopadhyay A，Banerjee S，Stafford IJ，et al.Curcumininduced suppression of cell proliferation correlates with down-regulation of cyclinD1 expression and CDK4-mediated retinoblastoma protein phosphorylation．Oncogene，2002，21(57):8852-8861．