酵母β-葡聚糖对断奶仔猪肠道菌群的影响

(沈阳农业大学畜牧兽医学院，辽宁沈阳110866)

养猪生产中，断奶是仔猪生长发育过程中继出生后的第二个关键时期，仔猪断奶阶段由于自身的生长发育尚未健全，加诸环境、营养、心理等应激因素的影响，仔猪断奶后一段时间出现精神状况不佳、食欲降低、消化不良、饲料利用率降低、生长迟缓甚至减重、免疫力下降、易患腹泻和水肿等所谓的“仔猪早期断奶综合症”及各种免疫抑制性疾病，严重制约养猪业的发展。虽然抗生素也能起到抗病促生长的作用，但是其耐药性及残留问题已成为使用中的瓶颈。有关研究表明，从酵母中提取的β-葡聚糖可能是一种很好的天然免疫增强剂。适量添加可降低动物的各种应激反应，增强疫苗的保护效果，改善动物的健康状况，进而提高动物的生产性能。段丽娟等（2006）研究表明，酵母β－葡聚糖以饲料添加剂形式小剂量添加，具有促进仔猪生长性能的作用。本试验探讨了酵母菌的活性成分——β－葡聚糖对断奶仔猪的肠道菌群的影响，为β－葡聚糖在断奶仔猪生产中的应用提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验用饲料添加剂

酵母β-葡聚糖由湖北安琪酵母有限公司提供。

1.2 试验设计

将随机选取的28日龄体重为(7.51±0.72)kg断奶三元杂交（杜×长×大）健康仔猪72头，按体重和性别随机分为4组，每组3个重复，每个重复6头仔猪，4个处理组在饲喂基础日粮的基础上,分别添加酵母β-葡聚糖0、0.025%、0.05%、0.1%。预饲期为3 d，试验期为4周。

1.3 饲养管理

试验猪由沈阳农业大学科研种猪场提供,在同一圈内饲养,自由采食、自由饮水,做好保暖防寒工作,试验期间按猪场常规免疫操作程序进行卫生防疫及消毒。

1.4 基础日粮组成及营养水平

试验用基础日粮按照NRC（1998）标准配制，由沈阳众友饲料公司按要求提供配制。基础日粮组成及营养水平见表1。

表1 试验基础日粮组成及营养水平

1.5 样品的采集

于试验结束的当天,每重复随机取2头体重适中的健康仔猪进行屠宰,立即剖腹并结扎所取肠段的两头(分别为结肠、盲肠和直肠)，用酒精棉球消毒结扎口后,放入已灭菌的塑料袋中,运回实验室备用。

1.6 肠道菌群的测定

样品运回实验室后,无菌操作台内无菌称取各肠段内容物0.5 g于灭菌离心管中,加入灭菌稀释液4.5 ml,配制成 10－1稀释液,振荡 3～5 min,500 r/min 离心 20 min,用微量移液枪准确吸取10－1稀释液1 ml至盛有9 ml事先灭菌的稀释液试管中，振荡1～2 min,制成10－2稀释液，依次进行 10－5～10－8倍比稀释。

稀释液配方为：磷酸二氢钙4.5 g、磷酸氢二钙6.0 g、L－半胱氨酸盐酸盐0.5 g、吐温－80 0.5 g、琼脂1.0 g、蒸馏水1 000 ml。配好后加热溶解,然后121℃、20 min蒸汽灭菌备用。

大肠杆菌:用微量取液器分别取结肠、盲肠和直肠内容物 10－5～10－7稀释液 0.1 ml涂布接种于麦康凯培养基平皿上(各稀释度设3个重复,并编号),置37℃培养箱中有氧培养24 h后,选取粉红色或红色、表面光滑、凸起、边缘整齐不透明、质地软而黏,直径1.0～3.0 mm的菌落进行计数,依据菌落形态、革兰氏染色及生理生化反应试验可鉴定该菌为大肠杆菌。

乳酸杆菌:用微量取液器分别取结肠、盲肠和直肠内容物 10－5～10－8稀释液 0.1 ml涂布接种于 Rogosa琼脂培养基平皿上(各稀释度设3个重复,并编号),置37℃培养箱中厌氧培养48 h后,选取乳白色、稍偏黄、表面光滑、凸起、边缘整齐不透明、质地软、直径0.6～2.7 mm的菌落进行计数,依据菌落形态、革兰氏染色及生理生化反应试验可鉴定该菌为乳酸杆菌。

双歧杆菌:用微量取液器分别取结肠、盲肠和直肠内容物 10－5～10－8稀释液 0.1 ml涂布接种于双歧杆菌分离培养基平皿上(各稀释度设3个重复,并编号),置37℃培养箱中厌氧培养48 h后,选取乳白色,表面光滑、凸起、边缘整齐不透明、质地软,直径0.7～2.5 mm的菌落进行计数,依据菌落形态特征、革兰氏染色及生化反应特征可鉴定为猪双歧杆菌。

1.7 数据统计分析

本试验数据用SPSS11.0统计软件中的单因素方差分析法进行统计分析，经F检验差异显著者再用邓肯氏（Duncan's）法进行多重比较。

2 结果

β－葡聚糖对断奶仔猪肠道菌群的影响见表2。

表2 β－葡聚糖对断奶仔猪肠道菌群的影响

从表2可以看出,不同剂量的β－葡聚糖都能有效抑制结肠、盲肠和直肠中大肠杆菌的增殖,其中0.1%的葡聚糖添加量效果较好。与对照组相比，添加β－葡聚糖对结肠、盲肠和直肠中双歧杆菌浓度都有提高趋势,其中0.025%添加组对盲肠中双歧杆菌浓度影响差异显著（P＜0.05）,0.05%添加组对结肠中双歧杆菌浓度影响差异显著（P＜0.05），对直肠中双歧杆菌浓度的影响也较大，但差异不显著（P＞0.05）。添加β－葡聚糖对结肠、盲肠和直肠中乳酸杆菌浓度的影响也呈提高趋势,但与对照组相比差异不显著（P＜0.05）。

3 讨论与结论

动物体内的正常菌群维持着动物体的健康、生长和发育。机体中的有益和有害菌群相互制约、相互依存。如果它们之间的比例发生改变，动物体内的微生态环境就会失调，很可能引起各种疾病，特别当一些兼性细菌菌群异常增殖时情况更容易发生。

健康动物体内大肠杆菌的浓度相对稳定，但随着日龄、疾病、饲养状态及抗生素的使用而变化，破坏了需氧菌与厌氧菌的平衡。当发生疾病时，尤其在下痢状况下，大肠杆菌数值显著上升，如仔猪下痢，大肠杆菌数值在空肠中由105.5个/g上升到106.4个/g，直肠中由107.0个/g上升到107.7个/g，而乳酸杆菌、双歧杆菌等厌氧菌数相对下降，表现为菌群比例失调、消化机能紊乱（何明清，2004）。本试验结果表明,不同剂量β－葡聚糖在一定程度上抑制结肠、盲肠和直肠中大肠杆菌的增殖。

双歧杆菌是动物消化道有益的正常菌群，对动物机体的生理作用主要表现为：拮抗致病微生物、建立生态平衡、合成多种维生素、激活机体的吞噬细胞、增强机体的非特异性和特异性免疫反应、控制内毒素血症、提高宿主对放射线的耐受性和延缓机体的衰老，它是维持肠道健康的重要优势菌群。本试验结果表明,添加一定剂量的β－葡聚糖在一定程度上促进了结肠、盲肠和直肠中双歧杆菌的增殖。

乳酸杆菌能在肠道内正常无害地定植，对动物的生理作用比较明显，能合成维生素，辅助消化食物，帮助营养吸收，促进宿主代谢，抑制腐败过程，降低宿主血胆固醇，增强宿主对乳酸的耐力。对猪而言，乳酸杆菌在盲肠和直肠定植最多。疾病如肠炎、腹泻、脱水以及盲目应用抗菌药物时，会导致乳酸杆菌数量减少。本试验结果表明,不同剂量的β－葡聚糖不同程度地提高了盲肠、结肠和直肠中乳酸杆菌的数量。

综合本试验,早期断乳仔猪基础日粮中添加β－葡聚糖，提高了肠道中乳酸杆菌、双歧杆菌等有益菌群数量，降低了大肠杆菌的数量，改善了断奶后仔猪肠道菌群构成。

若干篇，刊略，需者可函索）