阿托伐他汀对HTL导致大鼠血管内皮功能损伤的保护作用

毕艳颖 (长春中医药大学附属医院，吉林 长春 130021)

〔2011-05-01收稿 2011-11-11修回〕

动脉粥样硬化是一种内皮功能失调相关的炎症性疾病，其发生、发展与内皮功能、炎症因子及多种体液因素之间的相互作用有关，内皮功能障碍是动脉粥样硬化的始动环节。许多心血管疾病危险因素可导致内皮功能损害，内皮功能损害又常伴发和加重心血管疾病。阿托伐他汀除了降脂作用外，还有非调脂作用，如抑制炎症反应、影响平滑肌细胞增殖、干扰血小板聚集、抗氧化、抗动脉粥样硬化、改善血管内皮功能等。因此，本文采用外源性同型半胱氨酸硫内酯(HTL)诱导在体大鼠血管损伤模型，观察阿托伐他汀对其的保护作用，并初步探讨其作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料 50只Wistar大鼠，雌雄各半，体重170～190 g。阿托伐他汀、HTL、乙酰胆碱(ACh)、苯肾上腺素(Phe)、硝普钠(SNP)均为美国Sigma公司产品。丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)、血脂检测试剂盒均购自南京建成生物工程公司。内皮素(ET)和降钙素基因相关肽(CGRP)检测采用放射免疫法(试剂盒购自解放军总医院东亚免疫技术研究所)。阿托伐他汀用10%阿拉伯树胶混悬液溶解。

1.2 试验方法 50只大鼠随机分为五组，每组10只。①正常对照组:予生理盐水0.1 ml·kg－1·d－1灌胃;②阿托伐他汀对照组:溶解于10%阿拉伯树胶的阿托伐他汀40 mg·kg－1·d－1灌胃;③HTL损伤组:溶解于生理盐水中的HTL 50 mg·kg－1·d－1灌胃;④阿托伐他汀低剂量治疗组:HTL 50 mg·kg－1·d－1+ 阿托伐他汀 10 mg·kg－1·d－1灌胃;⑤阿托伐他汀高剂量治疗组:HTL 50 mg·kg－1·d－1+阿托伐他汀40 mg·kg－1·d－1灌胃。各组均灌胃8 w，每周测体重，按体量调整药量。大鼠灌胃8 w后，禁食12 h，腹腔注射3%戊巴比妥钠麻醉大鼠，从颈总动脉插管，收集新鲜全血，于4℃静置1 h后，3000 r/min离心10 min，取上层血清标本，按相应检测试剂盒说明书及相关要求操作，测定 MDA、NO、ET、CGRP含量及SOD的活性。

1.3 统计学方法 应用SPSS13.0统计软件，实验结果均±s表示，两样本均数组间比较采用t检验。

2 结果

2.1 阿托伐他汀对血管内皮损伤大鼠血浆中NOS、CGRP、ET水平的影响 HTL损伤组血清NOS及CGRP明显降低，ET明显升高，与正常对照组比较有显著性差异(P＜0.01，P＜0.05);阿托伐他汀低、高剂量治疗组的NO及CGRP含量明显升高，ET明显降低。见表1。

表1 阿托伐他汀对血管内皮损伤大鼠血浆中NOS、CGRP、ET水平的影响(n=6，±s)

表1 阿托伐他汀对血管内皮损伤大鼠血浆中NOS、CGRP、ET水平的影响(n=6，±s)

与正常对照组比较:1)P＜0.05，2)P＜0.01;与HTL损伤组比较:3)P ＜0.05，4)P ＜0.01;下表同

组别 NOS(μmol/L) CGRP(mg/L) ET(pg/ml)25.74±2.04 77.87±1.31 49.29±0.75阿托伐他汀对照组 25.89±1.69 77.94±9.24 49.34±9.98 HTL损伤组 11.14±1.032) 60.42±1.192) 68.44±0.841)阿托伐他汀低剂量组 12.98±5.83) 61.18±5.83) 67.49±0.493)阿托伐他汀高剂量组 24.63±1.464) 72.03±1.64) 60.43±0.844)正常对照组

2.2 阿托伐他汀对血管内皮损伤大鼠氧化应激的影响 与正常对照组相比，HTL损伤组血清MDA、GSH-Px含量明显增加，而SOD活性明显降低(P＜0.05，P＜0.01)。与HTL损伤组比较，阿托伐他汀治疗组的血清MDA含量显著降低(P＜0.05)，SOD活性显著提高，GSH-Px活性显著降低(P＜0.05)。见表2。

表2 对血管内皮损伤大鼠血清MDA、SOD及GSH-Px含量的影响(n=10，±s)

表2 对血管内皮损伤大鼠血清MDA、SOD及GSH-Px含量的影响(n=10，±s)

组别 SOD(nU/ml)MDA(nmol/L/ml)GSH-Px(U/L)385.5 ±3.8 4.6±0.2 45.8±12.8阿托伐他汀对照组 376.1±2.6 4.6±0.2 45.3±14.2 HTL损伤组 227.5±10.12) 6.6±1.22) 40.2±12.01)阿托伐他汀低剂量组 234.9±2.53) 5.6±0.53) 42.1±11.03)阿托伐他汀高剂量组 366.1±2.64) 4.3±0.24) 4.5±9.04)正常对照组

3 讨论

阿托伐他汀10、40 mg/kg与HTL共同灌胃时，可呈浓度依赖性减轻HTL对血管内皮依赖性损伤(EDR)，HTL在抑制血管EDR的同时，也降低了血清中的NO含量，所以HTL损伤EDR的作用可能与干扰NO的合成或释放有关。而阿托伐他汀在拮抗HTL对EDR抑制的同时维持了血清中NO的含量，说明阿托伐他汀抗HTL对EDR的损伤作用可能与促进NO的合成或释放有关。NO是最具代表性的内源性血管舒张因子，CGRP也具有很强的扩张血管和细胞保护作用，参与机体损伤中的自稳态调节。ET是较强的缩血管物质〔1〕，MDA是脂质过氧化的共同产物，细胞中MDA的量常可反映机体内的脂质过氧化程度，间接反映心肌细胞受自由基攻击的严重程度和细胞损伤的程度，因此MDA是评价心肌缺血损伤的较好指标之一〔2〕。SOD能清除氧自由基，体内的氧自由基可以转变为羟自由基，后者活性更强，能引起细胞膜的结构和功能更大的损伤，SOD作为超氧离子清除剂作用极为重要〔3，4〕。而GSH-Px是生物机体内重要的抗氧化酶，GSH-Px可以消除机体内的过氧化氢及脂质过氧化物，阻断活性氧自由基对机体的进一步损伤，是生物体内重要的活性氧自由基清除剂，它以硒代半胱氨酸(Sec)的形式发挥作用，以谷胱甘肽(GSH)为还原剂分解体内的脂质过氧化物，因而可防止细胞膜和其他生物组织免受过氧化损伤〔5〕。本实验发现，HTL灌胃大鼠8 w后，可导致大鼠血清中NO水平降低、MDA浓度增加、SOD与GSH-Px活性降低;而阿托伐他汀显著改善了HTL所致NO浓度的降低及MDA水平的升高，保护了SOD与GSH-Px的活性，提示阿托伐他汀的保护作用可能与抑制HTL触发的氧化应激反应有关，表明阿托伐他汀对HTL引起的在体大鼠血管内皮功能的损伤有显著保护作用;其机制可能与其降低体内氧化应激反应、维持NO水平有关。而此保护作用不依赖其降血脂作用。

1 Luo JD，Wang YY，Fu WL，et al.Gene therapy of endothelial nitric oxide synthase and manganese superoxide dismutase restores delayed wound healing in type 1 diabetic mice〔 J〕.Circulation，2004;110(16):2484-93.

2 周玖瑶，李 锐，廖雪珍，等.环维黄杨星抗垂体后叶素致心肌缺血作用机理研究〔J〕.广州中医药大学学报，2005;22(6):454-7.

3 张小宁.过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶、脂质过氧化水平与OSAHS及OSAHS合并高血压的相关性研究〔D〕.河北医科大学硕士学位论文，2009.

4 杜习智，王豫辉，董根山，等.阿托伐他汀对急性心肌梗死患者早期血脂水平和血管内皮功能的影响仁〔J〕.郑州大学学报(医学版)，2006;41(4):725-8.

5 Liu YH，You Y，Song T，et al.Impairment of endothelium-dependent relaxation of rat aortas by homocysteine thiolactone and attenuation by captopril〔J〕.J Cardiovasc Pharmacol，2007;50(2):155-61.