桃金娘对颈动脉血栓形成的影响及其机制的实验研究

李果明，沈毅华，刘 文

(1广东医学院附属医院，广东湛江 524023;2广东医学院第一临床学院;3广东医学院生物化学与分子生物学研究所)

桃金娘(Rhodomyrtus tomentosa)属桃金娘科植物，又名山稔子、岗稔等，广泛分布于中国南方，具有理气止痛、利湿止泻、去瘀止血及益肾养血等功效［1，2］。目前，对桃金娘的研究主要集中于其果实利用方面，而对其药用成分及药理作用的研究较少。2010年9月～2012年1月，我们研究了桃金娘对大鼠颈动脉血栓形成和血小板聚集的影响，旨在进一步探讨其作用机理。

1 材料与方法

1.1 材料 ①实验动物:大白兔36只，雌雄兼用，体质量(2.0±0.2)kg;SD 大鼠18只，雌雄兼用，体质量(300±50)g。以上动物均由广东医学院动物中心提供。②药品和试剂:桃金娘，采自广东省翁源县，由本实验室用煎煮法提取［3］，并用冷冻干燥机真空干燥得到固体药品;凝血酶(批号 85H9320，Sigma公司);兔环磷酸腺苷(cAMP)和环磷酸鸟苷(cGMP)酶联免疫检测试剂盒(天津索罗门生物科技有限公司);一氧化氮(NO)试剂盒(硝酸还原酶法，南京建成科技有限公司);水合氯醛(批号W20011204，中国医药集团上海化学试剂公司);其余试剂均为国产分析纯或生化纯。③仪器:YLS-14B小动物血栓生成仪(山东省医学科学院设备站)，CHRONO-LOG(590-2D)全血血小板聚集仪(美国)，连续光谱荧光酶标仪(德国)，LGJ-10冷冻干燥机(军事医学科学院实验仪器厂)。

1.2 桃金娘干预及大鼠颈动脉血栓形成观察 实验方法见参考文献［4］:将18只SD大鼠随机分为桃金娘1组、桃金娘2组及对照组各6只，三组均以10%水合氯醛4.5 mL/kg腹腔注射麻醉，分离一侧颈动脉和静脉，分别经静脉注射桃金娘5、10 mg/kg及生理盐水5 mL/kg，用YLS-14B小动物血栓生成仪刺激颈动脉 (电流1 mA，刺激时间为5 min)，观察三组颈动脉血栓阻塞情况，以5 min平均堵塞率表示。

1.3 桃金娘干预及大白兔全血血小板聚集情况观察 实验方法见参考文献［4］:取20只大白兔随机分为桃金娘1、2、3组及凝血酶组、对照组各4只，用塑料管收集空腹心脏取血0.5 mL，用ACD(86 mmol/L柠檬酸钠、111 mmol/L葡萄糖、53 mmol/L柠檬酸)0.15体积比抗凝，均加入生理盐水各0.5 mL，然后四组分别加入桃金娘 200、400、800 μg/mL 及凝血酶500 U/mL，全血与药物孵育5 min，同时用全血血小板聚集仪记录血小板最大聚集率。

1.4 桃金娘干预及大白兔血小板cAMP、cGMP和NO水平测定 实验方法见参考文献［5，6］:取16只大白兔随机分为桃金娘1、2、3组及凝血酶组、对照组各4只，按1.3取血及抗凝、药物孵育，1 000 r/min离心15 min，取上清，采用ELISA法检测cAMP和cGMP水平，采用硝酸还原酶法检测NO水平。

1.5 统计学方法 采用SPSS13.0软件进行统计学处理。计量数据以±s表示，行t检验，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 颈动脉血栓形成情况 桃金娘1组、桃金娘2组及对照组的5 min平均堵塞率分别为(87.46±10.31)% 、(95.26 ± 12.42)% 及 (65.31 ±8.63)%，前两组均显著高于对照组(P均＜0.05)。

2.2 全血血小板聚集情况 桃金娘1、2、3组及凝血酶组、对照组血小板最大聚集率分别为(0.75±0.50)、(3.75 ± 2.36)、(7.75 ± 0.96)、(19.25 ±7.97)、0Ω，前四组与对照组比较P分别 ＞0.05 及＜0.05、0.05、0.01。

2.3 血小板 cAMP、cGMP和 NO水平 四组血小板cAMP、cGMP和NO水平见表1。

表1 四组血小板cAMP、cGMP和NO水平比较(n=4， ±s)

表1 四组血小板cAMP、cGMP和NO水平比较(n=4， ±s)

注:与对照组比较，*P ＜0.05，#P ＜0.01

组别 cAMP(pmol/mL)cGMP/(nmol/mL)NO/(μmol/mL)桃金娘1 组 22.00 ±5.05* 6.54 ±1.86* 120.89 ±26.34*桃金娘2 组 18.71 ±5.11# 5.34 ±2.36* 104.28 ±21.27*桃金娘3 组 15.62 ±6.19# 5.03 ±1.67# 86.61 ±16.98#对照组31.45 ±9.41 10.12 ±2.61 165.36 ±32.48

3 讨论

研究显示，桃金娘的根具有祛风行气、益肾作用，可用于治疗寒喘、疝气、风湿关节痛等;其叶果健脾益血，收敛解毒，可用于治疗肠胃炎、劳伤、痢疾、便血等，还可用来治疗牛劳役过度、猪肠炎、猪牛风湿软脚、牛阉割后出血不止、犊牛白痢、仔猪白痢等疾病;其根、茎性微温，味汁淡无毒，能健脾胃、补血虚、止血痢，治疗哮喘效果良好。桃金娘的药理成分能碱化、稀释黏液，刺激支气管纤毛摆动，促进痰液的溶解与排出［1，2］。另外，桃金娘提取物对猪油和花生油均具有抗氧化作用，且其抗氧化作用强弱与溶剂的极性直接相关［7］;桃金娘多糖具有保肝降酶和抗氧化功能，对大鼠急性肝损伤有较好的保护作用［8］。

桃金娘外用在民间常用于外伤止血，而血栓形成和血小板聚集在生理止血过程中起重要作用。本实验直流电刺激大鼠颈动脉造成的血管内皮损伤，可促进一系列活性因子释放，从而激活血小板和白细胞，引起血小板聚集，快速形成混合型血栓。cAMP、cGMP和NO在血小板聚集过程中起重要调节作用，其中cAMP和NO生成减少能够促进血小板聚集，反之则抑制血小板聚集［9，10］。

本实验结果显示，桃金娘1组、桃金娘2组及5 min平均堵塞率均显著高于对照组;桃金娘2、3组血小板最大聚集率均明显高于对照组;桃金娘1、2、3组血小板cAMP、cGMP和NO水平均明显低于对照组，尤以桃金娘3组为著。提示桃金娘可促进血栓形成和血小板聚集，降低血小板cAMP、cGMP和NO的水平。推测桃金娘的止血机理可能是降低血小板cAMP、cGMP水平，通过cGMP-蛋白激酶途径减少NO生成，进而促进血小板聚集，形成血栓栓塞血管。

综上所述，桃金娘有促进血栓形成和血小板聚集的作用，可能机制为下调血小板cAMP、cGMP和NO水平。

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［6］廖予妹，马楠，耿正惠.妊高征患者血浆一氧化氮与内皮素及全血血小板聚集性变化的研究［J］.中华血液流变学杂志，2001，11(4):338-339.

［7］黄科礼，黄儒强.山稔子提取物对油脂抗氧化作用的研究［J］.食品科学，2008，29(10):90-92.

［8］陈旭，杜正彩.桃金娘多糖对大鼠急性肝损伤保护作用的研究［J］.安徽农业科学，2010，38(11):5644，5664.

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