Maspin在肝细胞癌中的表达及其与Caspase－3的关系

苏州大学医学院附属常州肿瘤医院普外科（常州213001） 张 骏

原发性肝癌（HCC）是最常见的恶性肿瘤之一，其发病率、病死率明显增加。Maspin是1994年Zou等［1］用消减杂交的方法在比较正常乳腺与乳腺癌组织时发现的一种抑癌基因，是丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族成员之一。Maspin在乳腺、前列腺、角膜、卵巢、小肠等人体器官组织中有高水平表达，而在相应的恶性肿瘤中表达下调或不表达，提示它可作为肿瘤转移及预后评估的一个重要指标。我们采用免疫组织化学方法分别检测了50例肝癌组织及癌旁肝组织中Maspin的表达并分析其与Caspase－3的关系，旨在探讨Maspin在肝细胞癌发生发展中的作用及可能机制。

材料与方法

1 一般资料 随机选取2004年1月至2008年8月间在苏州大学附属第三医院肝胆外科，原发性肝癌行肿瘤切除的50例病例，术前均未行放化疗、肝动脉栓塞及免疫治疗等。其中男42例，女8例，年龄38～81岁，平均53．10±10．96岁。同时取距离上述肝癌肿块2c m以上的癌旁肝组织标本50例作为对照。

2 方 法 免疫组织化学采取Envision T M二步法。鼠抗人Maspin免疫组化单克隆抗体（浓缩型）购自英国Neo mar ker公司，配制成工作液浓度为1∶50；兔抗人Caspase－3免疫组化多克隆抗体（即用型）购自北京中杉生物公司。石蜡包埋的组织制成4μm厚切片。免疫组织化学染色步骤按试剂盒说明进行，Maspin单克隆抗体用人乳腺组织标本做阳性对照，Caspase－3多克隆抗体用人扁桃体组织标本作阳性对照，以磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗作为阴性对照。

3 免疫组化结果判定 Maspin、Caspase－3以胞浆、胞核内出现棕黄色颗粒作为阳性细胞。每例切片随机选取5个高倍视野进行结果判定。按染色强度及阳性细胞数占肿瘤细胞总数的百分比综合计分。

4 统计学方法 采用SPSS10．0软件包进行统计分析。P＜0．05为差异有统计学意义。

结 果

1 Maspin、Caspase－3在肝癌和癌旁肝组织中的表达 见表1。肝癌组织中Maspin的阳性率28%（14/50），与Caspase－3的阳性率36%（18/50），均低于相应癌旁肝组织，分别为66%（33/50）和76%（38/50）。二者比较差异有统计学意义（P＜0．05）。

表1 肝癌与癌旁组织中Maspin、Caspase－3的蛋白表达比较

2 Maspin、Caspase－3的表达与肝癌临床病理参数的关系 见表2。表2显示Maspin蛋白表达与Edmonson病理分级、有无肝内外转移有关；Caspase－3的表达与Ed monson病理分级、有无肝内外转移、有无包膜有关。均具有统计学差异（P＜0．05）。

表2 Maspin、Caspase－3蛋白表达与肝癌患者临床病理特征的关系

3 肝癌中Maspin的表达与Caspase－3的关系见表3。肝癌组织中，Maspin的表达与Caspase－3呈正相关 （r＝0．553，P＜0．01）。

表3 肝细胞癌中Maspin与Caspase－3的关系

讨 论

有临床研究表明Maspin与肿瘤抑制明显相关，原发乳腺癌组织中Maspin蛋白含量较自体对侧正常组织明显减少［2］；口腔鳞癌组织中Maspin蛋白高表达者淋巴结转移率明显降低，患者的生存率也相对较高［3－4］；对乳腺癌和前列腺癌研究发现从原位癌到浸润癌再到淋巴结转移癌，Maspin蛋白含量依次减少［5］。本研究表明，肝癌组织中Maspin蛋白阳性表达率低于癌旁组织，而且与Ed monson病理分级、有无肝内外转移有关，均具有统计学差异。这就说明了Maspin在人肝细胞癌的发生发展以及侵袭转移过程中起一定作用。

细胞凋亡在肝癌的发生、发展中起了较为重要的作用。天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（Caspase）是一组与凋亡密切相关的蛋白水解酶。Caspase－3在细胞凋亡信号转导过程中起核心作用，是家族中最重要的成员。本研究证明Caspase－3在肝癌组织中较癌旁组织中的表达降低，和Maspin在肝细胞癌的发生发展中存在正相关（r＝0．553，P＝0．000）。与之相符，Wang等［6］在对正常胃粘膜、肠化生胃粘膜和胃癌的分析中发现 Maspin和Caspase－3的表达呈正相关。我们推测，Maspin和Caspase－3在肝细胞癌中的发生过程中作用密切相关，且呈协同作用。

综上所述，Maspin在肝细胞癌中表达下调，Maspin可能在抑制肝细胞癌的发生发展及侵袭转移中有重要作用。肝细胞癌发生过程中Maspin低表达导致Caspase－3活性降低，细胞凋亡受抑制，从而导致肿瘤发生，Maspin是肿瘤凋亡治疗的调节剂。Maspin通过调节细胞凋来抑制肝细胞癌的发生发展、侵袭转移。

［1］Zou Z，Anisowicz A，Hendrix MJ，et al．Maspin，a ser pin with tu mor－suppressing activity in hu man mammary epithelial cells［J］．Science，1994，263（5146）：526－529．

［2］Maass N，Nagasaki K，Jonat W，et al．Expression of t u mor suppressor gene maspin in hu man breast cancer t u mor［J］．ASCO Pr oc，1999，18（10）：2452－2454．

［3］Yasunlatsu R，Nakashi ma T，Hirakawa N，et al．Maspin expression in stage I and II oral tongue squamous cell carcino ma［J］．Head Neck，2001，23（11）：962－966．

［4］Xia W，Lau YK，Hu MC，et al．High t u mour maspin expression is associated with i mpr oved survival of patients with oral squamous cell carcino ma［J］．Oncogene，2000，19（20）：2398－2403．

［5］Maass N，Nagasaki K，Ziebart M，et al．Expression and regulation of t u mor suppressor gene maspin in breast cancer［J］．Clin Breast Caneer，2002，3（4）：281－287．

［6］Wang MC，Yang Y M，LI XH，et al．Maspin expression and its clinic pathological significane in tu morigenesis and progression of gastric cancer［J］．World J Gastronterol，2004，10（5）：634－637．