抗郁汤对孤养加慢性应激抑郁模型大鼠学习记忆能力及5－HT的影响

郝志红，李未韡

抑郁症是以心境低落为特征的综合征，通常表现为长期情绪低落或悲痛欲绝，对生活失去兴趣、精神萎靡、学习记忆能力下降、食欲减退等症状；严重者可出现木僵、幻觉、妄想及自杀念头等情感性精神障碍症状。目前，抗抑郁西药广泛运用于临床，但副反应大，不良反应多。现已发现一些具有良好的抗抑郁作用的中药如连翘、柴胡等。抗郁汤由巴戟天、淫羊藿等几味中药组成，具有温肾助阳、养阴柔肝、调整阴阳等功效，在临床运用中疗效显著。本实验通过观察抗郁汤对抑郁模型大鼠体重增长、学习记忆能力及脑内单胺类神经递质5－羟色胺（5－HT）含量的影响，进一步探讨抗郁汤治疗抑郁症的作用及机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 清洁级健康雄性3月龄Wistar大鼠60只，体重（190±20）g，由山西医科大学实验动物中心提供。

1.1.2 实验药物 抗郁汤由巴戟天、淫羊藿等中药组成，原药材购自山西医科大学第二医院药房，由山西医科大学第二医院制剂室制备为干燥粉末，每1g粉末相当于生药4.2g，4℃冰箱保存。盐酸氟西汀，由礼来苏州制药有限公司生产，剂量为每粒20mg。

1.1.3 实验试剂 5－羟色胺硫酸肌酐，中国医药公司上海化

学试剂采购供应站瑞士进口分装。

1.1.4 实验仪器 Sartorius电子天平，德国Sartorius公司；微量电子天平，岛津BP－211D；3K30台式高速冷冻离心机，德国SIGMA公司；匀浆机，德国IKA公司；RF－540型荧光分光光度仪，日本岛津公司。

1.2 方法

1.2.1 实验动物的分组 将60只大鼠根据体重大小编号，通过随机数字表采用区组随机的方法进行分组，以保证各组大鼠实验前体重均衡。实验大鼠分为6组：空白对照组（A组）、模型组（B组）、盐酸氟西汀组（C组）、抗郁汤低剂量组（C组）、抗郁汤中剂量组（D组）、抗郁汤高剂量组（E组），每组各10只。

1.2.2 抑郁模型的建立 适应性喂养1周后，除空白对照组普通喂养（群养）外，余组参照文献［1，2］，制造为期21d的大鼠孤养加慢性不可预见的中等强度刺激应激抑郁模型。方法是在21d内施加电击足底（50V交流电，10s／次，每隔1min，20次）、冰水游泳（4℃，5min）、摇晃（1次／s，1min）、夹尾（1min）、禁水（24h）、禁食（24h）、热应激（45 ℃，5min）刺激，随机安排每日给予1种刺激，每种刺激出现3次，同一种刺激不能连续出现，使动物不能预知给予的刺激。

1.2.3 给药方法 空白对照组普通喂养；模型组灌服生理盐水2mL；根据动物与人体体表面积折算法，药物用量为人体用药剂量的20倍、10倍、5倍。用时按生药与制剂的比例折算，纯化水稀释；盐酸氟西汀去外壳后，用纯化水配成0.18mg／mL混悬液，使用时摇匀。大鼠灌胃容量为0.33mg／100g体重，按大鼠体重给相应药物量，于每日刺激前30min灌服。

1.2.4 体重的检测 实验第21天，按动物序号进行测量。

1.2.5 学习记忆能力的检测 实验第21天，采用Morris水迷宫［3］视频跟踪系统进行评价。该系统由一个直径120cm，高50 cm不锈钢水池、平台、记录装置和分析软件组成。水温保持在24℃±2℃，大鼠头部以苦味酸涂黄色，便于摄像头捕捉。平台为直径9cm，高29cm的圆形隐藏平台，置于第三象限，水面高于平台2cm，实验期间水迷宫外足够的固定参照物及水池壁上用粉笔画有固定的图案（如三角、圆等）供大鼠定位利用，且始终保持不变。

定位航行实验通过观测大鼠从入水到找到并爬上平台所需时间，即逃避潜伏期，避潜伏期的长短可检测其学习记忆能力。造模前5d进行定位航行训练，每天固定时间，训练2次。大鼠均以第一象限为入水点，如果大鼠在60s未找到平台，逃避潜伏期记为60s然后由实验者将其牵引至平台上，停留20s再放回笼中。实验21d正式检测时，记录大鼠2min内逃避潜伏期及找到休息平台所游过的距离。

1.2.6 脑内单胺类神经递质5－HT含量的测定 用20%的戊拉坦，按5mL／kg腹腔注射麻醉大鼠，放血处死大鼠后，尽快断头剥取全脑，去除小脑后将脑组织称重，放入预冷酸性正丁醇溶液中匀浆，混匀后离心取上清液，按荧光分光光度法［4］测定大鼠脑内单胺递质5－HT的含量。

1.3 统计学处理 采用SPSS12.0统计软件包进行分析。计量资料用均数±标准差（±s）表示。数据采用单因素方差分析，组间比较采用LSD检验。

2 结 果

2.1 体重增长变化 第21天，与A组相比，B组体重增长缓慢，差异有统计学意义（P＜0.05）；与B组相比，C组、E组、F组体重增加，差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）；D组较B组体重有所增加，但差异无统计学意义（P＞0.05）；与C组相比，D组体重增长缓慢，差异有统计学意义（P＜0.05）；E组、F组与C组体重差异无统计学意义（P＞0.05）。详见表1。

表1 各组大鼠体重变化（x±s） g

2.2 大鼠的学习记忆能力评价 第21天在逃避潜伏期中，与A组相比，B组逃避潜伏期、游泳距离增加（P＜0.01）；与B组相比，各给药组逃避潜伏期、游泳距离下降（P＜0.05或P＜0.01）；与C组相比，D组、E组、F组逃避潜伏期差异无统计学意义（P＞0.05）；与C组相比，D组、E组游泳距离增加（P＜0.05），F组与C组差异无统计学意义（P＞0.05）。详见表2。

表2 各组大鼠的学习记忆能力评价（x±s）

2.3 脑内单胺类神经递质5－HT含量变化 与A组相比，B组、D组、E组5－HT含量减少（P＜0.05或P＜0.01）；与B组相比，D组5－HT含量有所增加，但差异无统计学意义。C组、E组、F组5－HT含量较B组显著增加（P＜0.05或P＜0.01）；与C组相比，D组5－HT含量有所减少，但无统计学意义；E组、F组与C组差异无统计学意义（P＞0.05）。详见表3。

表3 脑内单胺类神经递质含量变化比较（x±s）

3 讨 论

本实验所采用的慢性不可预见性应激抑郁模型是目前常用的动物模型。对于大鼠来说，连续21d的伤害性刺激相当于人长期处于负性情绪和生活事件中，目前认为其为抑郁症病因。长期负性情绪及不良的生活环境使得脑组织中单胺类神经递质含量下降，单胺递质的作用与相应的受体亚型有关，单胺类神经递质的受体多与G蛋白偶联，通过不同的G蛋白激活或抑制不同的信号转导途径，影响基因转录和表达，从而使神经细胞功能发生一定的变化。

抑郁症属中医情志病的范畴，其症状散见于中医古籍中的癫狂、脏躁、百合病、郁证等病证中。中医学认为抑郁症是由情志不遂、气机郁结而致，因郁及气血、五脏，出现气血失调、脏腑功能失调，变生诸多不足之证，出现脾虚、肾虚、气郁化火、郁久伤阴、阴虚火旺等证型，所谓“久病必虚”。抑郁症初期为肝郁，中期为心脾两虚，后期为肾虚。

抗郁汤由巴戟天、淫羊藿等中药组成。中药巴戟天是常用的补肾壮阳药，主治大风邪气、可强筋骨、安五脏、补中、增志、益气。在采用现代药理学方法研究巴戟天［5］的药理作用过程中，发现其具有抗抑郁作用；中药淫阳藿是传统的补益药，具有补肾阳、强筋骨、益精气、补腰膝、强心力、祛风湿等作用。现代药理研究表明，淫羊藿主要化学成分为黄酮类化合物、木脂素及生物碱淫羊藿具有多种药效功能，主要集中在免疫、生殖系统及心脑血管系统等方面。

抗郁汤具有补肾助阳、养阴柔肝、调整阴阳等功效。在临床运用中，以其为基础方加减化裁治疗抑郁症，常常获效。在本实验中，抗郁汤中、高剂量组与西药盐酸氟西汀对照组疗效相当，存在一定量效关系。抗郁汤可使抑郁模型大鼠体重增加，学习记忆能力改善；提高其脑内单胺类神经递质5－HT含量。

［1］ Katz RJ，Carroll BJ.Acute and chronic stress effects on open field activity in the rat：Implications for a model of depression［J］.Neurosci Biobehav Rev，1981，5（2）：247－251.

［2］ Kate RJ，Sibel M.Animal model of depression：Tests of three structurally and pharmacologically novel antidepressant comdpouns［J］.Pharmacol Biochem Behav，1982，16（6）：973－977.

［3］ Kaegker S T，Sinner C，Chatterjee S，etal.Hyperforin enhances the extracellular concentrations of eatecholamines，serotonin and glutamate in the rat locus coeruleus［J］.Neuroscience Letters，1999，262（3）：199－202.

［4］ 匡培根，周新富，徐波.脑组织中单胺类神经递质的提取和荧光光度测定法［J］.中国人民解放军军医进修学院学报，1982，3（2）：181.

［5］ 崔承彬，杨明，姚志伟，等.中药巴戟天中抗抑郁活性成分的研究［J］.中国中药杂志，1995，20（1）：36.