新型卤酚化合物3’，4’－二羟基－3－氯二苯甲酮对大鼠缺血／再灌注心肌的保护作用

王 义，冯秀娥，赵 雷，李青山

心肌缺血／再灌注损伤（MIRI）时迅速产生的活性氧类物质会使血管内皮细胞的完整性遭到破坏，造成通透性增加，而导致水肿的发生，同时细胞核DNA被自由基攻击造成氧化伤害，这是MIRI病理过程的重要触发因素［1－3］。从海藻中提取得到的多种卤酚化合物均表现出很好的抗氧化活性。本课题组以天然来源的卤酚化合物为先导化合物，进行了结构优化和修饰，合成了系列卤酚衍生物，体外活性筛选结果显示，全新结构化合物3’，4’－二羟基－3－氯二苯甲酮（LM46）对过氧化氢损伤的人脐静脉内皮细胞具保护活性［4，5］。本实验利用在体大鼠 MIRI研究LM46可能具有的药物后处理心肌保护作用。

1 材料与方法

1.1 材料 雄性健康SD大鼠，体重230g～260g，由山西医科大学实验动物中心。HX－200动物呼吸机（成都泰盟科技有限公司）；RM6240B生物信号采集处理系统，YPJO1型压力换能器（成都医疗仪器厂）。

LM46注射液由本课题组提供，Even’s blue染液购自Sigma公司；2，3，5－氯化三苯基四氮唑（TTC）染液购自 AMRESCO公司；丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）检测试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。

1.2 方法 将实验动物随机分为6组，每组8只。即假手术组、模型组、溶剂对照组及LM46低、中、高剂量组（5mg／kg、10 mg／kg、15mg／kg）。大鼠 MIRI建立参照文献［6，7］，记录正常Ⅱ导联心电图（ECG）。在动脉圆锥与左心耳之间冠状动脉左前降支（LAD）处穿线，除假手术组外，其余各组在LAD下拉紧结扎线使硅胶管压迫LAD造成血流阻断（以ECGⅡ导联ST段抬高0.1mV或T波高耸，心肌颜色变为暗红色，作为LAD结扎成功的标志）。LAD供血区域左心室左前壁缺血40min后，松开结扎线，恢复血液LAD再灌流。假手术组只穿过不结扎。再灌注过程开始1min内，模型组和假手术组静脉注射生理盐水1mL／kg，溶剂组静脉注射空白溶剂1mL／kg作为对照，LM46分别经股静脉推注相应组别实验用药物，再灌注3h。

1.3 指标检测 测定各组大鼠心脏梗死面积［8］。血清酶学指标检测，TAB法测得血清中MDA含量。LDH、CK活力测定均按照试剂盒说明书规范操作［9］。

1.4 统计学处理 计量资料以均数±标准差（x±s）表示。应用SPSS15.0软件组间单因素方差分析。

2 结 果

2.1 不同计量LM46对缺血／再灌注心肌梗死面积的影响（见表1） 危险区面积占左心室面积的百分比（AAR／LV）在各组间无统计学意义，表明在造模过程中，结扎LAD的手法稳定，各组模型的缺血程度大体相当。LM46不同剂量组心肌梗死面积占危险区面积的百分比（AN／AAR），显著小于模型组和溶剂对照组，且呈现明确的量效关系。

表1 LM46后处理对心肌梗死面积的影响（x±s）

2.2 大鼠血清SOD活力及 MDA含量的测定（见表2） 各不同给药组血清中SOD活力显著高于模型组和溶剂对照组，MDA含量显著低于模型组和溶剂对照组，且呈现明确的量效关系。

表2 LM46后处理对SOD活力、MDA的影响（x±s）

2.3 大鼠血清LDH、CK活力测定（见表3） 给药组血清中CK、LDH活力显著低于模型组和溶剂对照组，且呈现明确的量效关系。

表3 LM46后处理对LDH、CK活力的影响（x±s）

3 讨 论

本研究结果显示，与模型组相比，在5mg／kg～15mg／kg剂量范围内，不同剂量LM46对大鼠MIRI具有明显的保护作用。

脂质过氧化作用及能量代谢异常是导致MIRI的重要因素。心肌缺血时，由于心肌内源性氧自由基清除剂减少。再灌注以后，分子氧再次进入心肌组织中，氧自由基水平继续上升。自由基会使血管内皮细胞的完整性遭破坏，造成通透性增加，而导致水肿的发生，同时细胞核中的DNA会被自由基攻击造成氧化伤害，甚至细胞死亡［10，11］。

心肌缺血再灌注损伤后SOD活力下降，氧自由基增多，导致氧自由基氧化不饱和脂肪酸释放的降解产物MDA含量升高，丙二醛可引起大分子物质如蛋白质、脂类等相互交联、聚合，从而破坏了细胞膜的结构和功能，使胞浆酶如CK和LDH释放增加，加速心肌细胞损害程度［12］。

本研究将本课题组首次合成的海洋卤酚化合物LM46应用于大鼠MIRI保护作用的研究。结果显示，缺血／再灌注发生时，SOD的活力明显降低，MDA含量明显升高，证明存在自由基代谢紊乱。经过LM46干预后，SOD活力升高，MDA含量下降，LDH和CK的活力明显下降，表明LM46有显著抗氧化能力，从而减轻缺血／再灌注损伤［13］。本研究针对海洋卤酚化合物应用于心血管系统疾病进行了初步探讨，为以后海洋卤酚化合物在该领域的研究打下基础。

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