MMP-9与Ki-67在胃癌中的表达

曲义坤 徐 剑 杨 婷 刘伟新

(佳木斯大学附属第一医院普外二科，黑龙江 佳木斯 154002)

胃癌是我国死亡率最高的恶性肿瘤，临床上一般采取手术切除或者放化疗的方法进行治疗，但是若发生浸润和转移常造成手术切除困难、术后复发及化疗失败。本文探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及Ki-67在胃癌浸润复发转移过程中的作用，寻找胃癌复发转移的预测指标。

1 材料与方法

1.1 研究对象 随机选取佳木斯大学附属第一医院2009年12月至2011年12月普外科切除的，且资料完整的胃癌病例80例进行研究，病理类型均经病理科医师诊断证实。有完整的临床资料，男61例，女19例。根据组织学分级分为高、中分化组61例，低分化组19例;根据浸润深度分为未浸润浆膜层组38例，浸润浆膜层组42例;根据有无淋巴结转移分为无淋巴结转移组56例，有淋巴结转移组24例。同时取癌旁5 cm正常组织作为对照组。手术标本经10%中性甲醛固定，石蜡包埋，连续切取5μm组织片，进行苏木素-伊红(HE)和免疫组织化学染色，所有患者术前均未接受化疗和放疗。

1.2 试剂和染色方法 鼠抗人MMP-9、Ki-67单克隆抗体及免疫组化SABC试剂盒购于武汉博士德生物技术公司。严格按试剂盒说明操作。显微镜下观察，阳性显色为棕黄色。

1.3 结果判定 MMP-9位于细胞质和(或)细胞膜呈棕黄色;Ki-67表达在细胞核内，出现棕黄色颗粒。阳性细胞＜10%为阴性(-)，阳性细胞10% ～25%为弱阳性(+)，阳性细胞26% ～50%为中阳性(⧺)，阳性细胞＞50%为强阳性(⧻)。为简化计算，阳性表达包括+～⧻。

1.4 统计学分析 应用SPSS16.0软件行χ2检验。

2 结果

2.1 胃癌组织中MMP-9的表达 MMP-9在正常胃黏膜中很少表达(5例)，在胃癌组织中的MMP-9阳性细胞很多(55例，68.8%)，与对照组相比，差异具有显著性(χ2=66.67，P=0.000)。阳性物质主要在细胞质和细胞膜中达，整体呈散在、片状或灶状分布。见图1。

2.2 Ki-67在胃癌组织中的表达 Ki-67蛋白主要表达于胃癌细胞核(61例，76.3%)，为棕褐色，呈巢团状或灶状分布，在正常胃黏膜组织中表达很少(3例)，差异具有统计学意义(χ2=87.60，P=0.000)。见图1。

2.3 MMP-9和Ki-67表达与胃癌病理特征的关系 80例胃癌组织中，MMP-9在未浸润浆膜层组和浸润浆膜层组的表达率分别为42.1%和92.9%;高、中分化胃癌和低分化胃癌中阳性表达率分别为60.7%和94.7%;无淋巴转移组和有淋巴结转移组阳性表达率分别为41.6%和80.4% ，他们之间的差异均具有统计学意义(P＜0.01)。Ki-67在未浸润浆膜层组和浸润浆膜层组的表达率分别为57.9%和92.9%;高、中分化胃癌和低分化胃癌中阳性表达率分别为68.9%和100%;有淋巴结转移组和无淋巴转移组阳性表达率分别为85.7%和54.2% ，其差异均具有统计学意义(P＜0.01)。

图1 MMP-9、Ki-67在胃癌组织中的表达(SABC，×200)

3 讨论

大量研究表明，肿瘤从开始形成到浸润和转移，经历三个重要阶段:细胞粘连、局部蛋白酶解及细胞动力增加和迁移〔1〕。MMP-9是一种蛋白水解酶，属于MMP家族胶原酶B，作用底物包括基底膜重要组成成分Ⅳ胶原，主要功能是降解破坏细胞外基质成分〔1〕。本研究显示，随着肿瘤恶性程度增加，MMP-9表达量明显增加。因为在侵袭和转移过程中，肿瘤细胞依靠自身分泌或诱导其他细胞分泌的MMP-9，使基底膜和细胞外基质结构被降解破坏，从而为肿瘤细胞的转移开辟了道路，导致肿瘤转移〔2，3〕，分化程度较低的肿瘤细胞分泌MMP-9的能力较强，从而能够更加有效地破坏细胞外基质，为肿瘤的浸润和转移提供条件。

Ki-67抗原是与增殖细胞相关的核抗原，分布于核内，其表达量随细胞周期的不同而发生改变，在G1中期到后期出现表达，S期和G2期逐渐增加，有丝分裂期达到高峰。它在细胞周期中起“计时器”分子的作用，或在细胞增殖的调控中发挥着重要的作用〔4，5〕。在正常人体组织，Ki-67蛋白表达可发生在甲状腺皮质细胞、胸腺皮质细胞及未分化细胞，而其他组织的细胞几乎无表达〔5〕。Tzanakis等〔6〕研究表明，Ki-67 表达可反映肿瘤细胞的增殖活性，与恶性肿瘤的发展、转移和预后高度相关，随恶性肿瘤临床分期增加和分化程度的降低，Ki-67表达强度增加;胃癌分化程度越低，Ki-67表达越强。本研究结果也显示，随着肿瘤恶性程度的增加，Ki-67表达也会增多。Ki-67表达率随着胃黏膜不典型增生程度的加重呈上升趋势，由于Ki-67抗体标记了增生细胞核，因此它可以反映肿瘤的增殖程度。恶性肿瘤组织增殖迅速，Ki-67表达的阳性细胞增多，并且随临床分期增高，分化程度降低，肿瘤细胞增殖更迅速，Ki-67的表达相应增强;Ki-67表达与胃不典型增生程度、胃癌不同分化程度及胃癌组织学分型密切相关。检测Ki-67的表达水平，有助于胃癌恶性程度的判断〔7〕，对指导临床治疗有一定意义。

1 Lukaszewicz-Zajac M，Mroczko B，Szmitkowski M.The significance of metalloproteinases and their inhibitors in gastric cancer〔J〕.Postepy Hig Med Dosw(Online)，2009;63:258-65.

2 Kim JH，Pyun JA，Lee KJ，et al.Study on association between single nucleotide polymorphisms of MMP7，MMP8，MMP9 genes and development of gastric cancer and lymph node metastasis〔J〕.Korean J Gastroenterol，2011;58(5):245-51.

3 王 俊，袁志诚，施 洋.p53，Ki67，VEGF和MMP-9在胶质瘤中的表达及意义〔J〕.江苏大学学报(医学版)，2007;17(3):228-31.

4 Yerushalmi R，Woods R，Ravdin PM，et al.Ki67 in breast cancer:prognostic and predictive potential〔J〕.Lancet Oncol，2010;11(2):174-83.

5 Heatley MK.Ki67 protein:the immaculate deception〔J〕.Histopathology，2002;40(5):483.

6 Tzanakis NE，Peros G，Karakitsos P，et al.Prognostic significance of p53 and Ki67 proteins expression in Greek gastric cancer patients〔J〕.Acta Chir Belg，2009;109(5):606-11.

7 Antonini C，Forgiarini O，Chiara A，et al.Hepatoid adenocarcinoma of the stomach.Case report and review of the literature〔J〕.Pathologica，1997;89(3):310-6.