痰液、血清、支气管肺泡灌洗液联合检测细胞角蛋白19片段对肺癌诊断的临床价值

刘大鹰 胡灼君 农天雷 林 敏

(柳州市柳铁中心医院呼吸科，广西 柳州 545007)

肺癌的疗效与其早诊断密切相关，传统的检查方法如影像学、纤维支气管镜、细胞学等对肺癌的早期诊断存在困难，大多数患者发现病变就已经是肺癌晚期。近年来研究发现肿瘤标志物细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)对肺癌的诊断具有一定的意义〔1，2〕，但研究对象多为单一标本，针对不同标本联合检测CYFRA21-1对肺癌诊断的意义少有报道。本文对临床上容易获得的痰液、血清和支气管肺泡灌洗液(BALF)标本进行CYFRA21-1检测，探讨这些标本联合检测对肺癌的诊断价值。

1 材料与方法

1.1 临床资料 本研究98例患者均是2009年1月至2011年2月在我院住院的患者。试验组为52例未经治疗的肺癌患者，男30例，女22例，年龄28～91〔平均(63±32)〕岁;其中鳞癌19例，腺癌22例，小细胞癌9例，大细胞癌2例;TNM分期:Ⅰ期+Ⅱ期17例，Ⅲ期+Ⅳ期35例。对照组为肺良性病变46例，男25例，女21例，年龄19～87〔平均(52±35)〕岁;其中肺炎28例，肺结核15例，其他3例。两组患者均无同时合并其他系统恶性肿瘤证据。

1.2 方法

1.2.1 痰标本的收集和处理

1.2.1.1 选择清洁干燥和灭菌处理后的带盖样本盒收集痰标本 患者晨起后用清水漱口，深咳出1～2口痰入样本盒，或纤支镜检查后留痰，加盖并在0.5 h内送检，无痰患者用3%NaCl溶液超声雾化留痰送检。痰标本涂片镜检应有大量上皮细胞及尘细胞，否则重留。

1.2.1.2 痰标本消化处理 估计痰标本量，加入等量混匀的胰酶悬液，用消毒棉签搅动痰液，使两者充分接触，静置30 min至液化无痰丝，吸取消化后痰液于试管中，3 000 r/min离心5 min，取上层清液待测。

1.2.1.3 胰酶消化液配制 称取12 g胰蛋白酶溶于200 ml蒸馏水配成6%浓度，再用2%NaOH调至pH=8，混匀后成悬液，4℃保存备用，有效期2 w，如消化液内出现沉淀物不能再使用，必须重新配制。临用前在37℃水箱温育10 min。

1.2.2 血液标本 所有入选患者均在入院3 d内抽取外周空腹静脉血5 ml，3 000 r/min离心分离血清，至-20℃保存待测。1.2.3 BALF BALF在刷检及活检之前进行，以避免血液的污染。将纤支镜前端嵌入病灶所在肺段中，灌注生理盐水20 ml后立即负压回收BALF，反复3次，所有回收的灌洗液立即经过尼龙网过滤，3 000 r/min离心5 min，收集上层清液至-20℃保存待检。

1.2.4 试剂及仪器 采用微粒子化学发光技术检测CYFRA21-1水平。仪器为Access 2全自动化学发光仪(美国贝克曼公司);试剂使用配套原装试剂。胰蛋白酶购自上海国药集团化学试剂有限公司;2%NaOH:自配。

1.2.5 判断标准 根据试剂盒给出的正常临界值为:CYFRA21-1＜3.5 ng/ml。高于临界值判定为阳性病例。联合检测时，如有任何一个标本CYFRA21-1检测结果大于正常范围，即定为阳性病例。

1.3 统计学方法 应用SPSS12.0统计软件进行分析，数据资料以x±s表示，组间比较χ2检验和t检验。

2 结果

2.1 不同标本CYFRA21-1的检测结果 与良性病变组相比，肺癌组三种标本肿瘤标志物CYFRA21-1检测的浓度均明显升高，两组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。如果以高于临界值即为阳性病例，肺癌组阳性率最高为BALF(33/52，63.5%)，最低为血清(20/52，38.5%);但良性病变组也有一些假阳性(6.5%～17.4%)。经统计学检验发现两组阳性率差异有统计学意义(P＜0.05)，肺癌组三种标本CYFRA21-1检测的阳性率明显高于良性病变组。肺癌组痰液、BALF和血液标本之间的阳性率差异有统计学意义(χ2=6.52，P=0.04)，进一步两两比较发现血液和BALF标本之间的阳性率差异有统计学意义(χ2=6.50，P=0.01)，表明 BALF标本检测 CYFRA21-1对肺癌的诊断意义更大。经统计学检验肺良性病变组不同标本之间CYFRA21-1检测的阳性率差异无统计学意义(χ2=2.55，P=0.28)。见表1。

表1 不同标本CYFRA21-1的检测结果(μg/L)

2.2 联合不同标本检测CYFRA21-1的准确性、敏感性、特异性 不同标本联合检测CYFRA21-1可以提高阳性率。总的来说，与单个标本检测相比，不管是两个标本联合，还是三个标本联合，其敏感性均逐渐增加，但特异性也有所下降，但下降幅度不大。同时，联合检测3个标本敏感性最高(80.8%)，且特异性下降不明显(78.3%)，与单个标本比较差异有统计学意义(χ2＞3.87，P ＜0.05)。见表2。

表2 不同标本单个和联合检测的准确性、敏感性、特异性(%)

3 讨论

肿瘤标志物是反映肿瘤存在的化学类物质。它们或不存在于正常成人组织而仅见于胚胎组织，或在肿瘤组织中的含量大大超过在正常组织的含量，它们的存在或量变可以反映出肿瘤组织的发生、性质、细胞的分化及其功能，也可以对肿瘤的诊断、分类、治疗、评价疗效、预后判断提供指导。CYFRA21-1是细胞角蛋白19(CK-19)的片段，是对肺癌诊断有价值的肿瘤标志物。CK-19是上皮细胞中间丝的特征性蛋白组分，为上皮细胞内细胞骨架的组分之一〔3〕。当上皮细胞恶变时，角蛋白含量增加。肺癌以上皮细胞恶性增生为特征，当细胞分裂增生时激活的蛋白酶加速了细胞角蛋白的降解，CK-19的可溶性片段CYFRA21-1释放，使其局部含量增加，并可进入血液循环，临床上就可以检测到其含量增高〔4〕。因其经常出现于肺部组织，且特别易出现在与肺部恶性肿瘤的结合处，是用于非小细胞肺癌检测的新一代肿瘤标志物。

本文进一步比较不同标本检测CYFRA21-1的阳性率差异时发现，肺癌组阳性率最高，最低为血清。比较肺癌组痰液、BALF和血液标本之间的阳性率差异有统计学意义(P＜0.05)，进一步两两比较发现血液和BALF标本之间的阳性率差异有统计学意义(P＜0.05)，表明BALF标本检测CYFRA21-1对肺癌的诊断意义更大。当肺部发生癌变时，癌细胞分泌或代谢产生的肿瘤标志物首先排泄到肿瘤细胞表面进入局部支气管肺泡内，然后再吸收进入血液循环中，再被血液稀释，浓度进一步下降。当疾病早期肿瘤标志物产生量较少时，在血清中含量低，难以检出，所以BALF中肿瘤标志物比血清中出现早、浓度更高。在本实验中肺癌组BALF标本肿瘤标志物CYFRA21-1浓度明显高于血液标本(P=0.01)，也说明了这一点。BALF作为研究肺部疾病的一种方法，其关键作用是能在活体状态下获得病变部位的细胞释放液，因而BALF作为肺癌标志物的标本来源对肺癌病变的研究有一定的意义。

由于各种免疫标记技术的快速发展，所检肿瘤标志物越来越多，对肿瘤的早期诊断、观察评价治疗效果及判断预后具有极大意义〔5，6〕。由于目前尚未发现肺癌特异性抗原，用于检测的肺癌标志物均为肿瘤相关物质，单一的血清肿瘤标志物检测对肺癌诊断的敏感性、特异性均难以达到理想水平，其原因是一些良性病变也能出现程度不同的阳性反应，即便是肿瘤本身也常可由于在发生发展过程中的各种因素而呈一过性或阶段性阴性反应。所以多数学者主张多指标联合检测以提高肺癌诊断的阳性率〔7，8〕。本项目针对不同标本联合检测CYFRA21-1的研究发现，不同标本联合检测CYFRA21-1可以提高灵敏度。总的来说，与单个标本检测相比，不管是两个标本，还是三个标本联合，其敏感性均逐渐增加，但特异性也有所下降，不过下降幅度不大。同时联合检测3个标本敏感性最高，且特异性下降不明显，与单个标本比较差异有统计学意义。

总之，本研究选择的痰液、血清、BALF均是临床上常见且容易获得的标本，在临床中对怀疑肺癌的患者进行CYFRA21-l检测时，以血清为标本的检测日益成熟，而以BALF和痰液为标本的检测亦有重要的意义，同时联合三个标本检测CYFRA具有较高的灵敏度和特异度，值得临床上重视。

1 Herbst RS，Heymach JY，Lippman SM.Molecular origins of cancer:lung cancer〔J〕.N Engl JMed，2008;359(13):1367-80.

2 吴键民.对肿瘤标志物的再认识〔J〕.中华检验医学杂志，2005;28(1):11-3.

3 Pujol JL，Molinier O，Ebert W，et al.CYFRA21-1 is a prognostic determinant in non-small-cell lung cancer:results of a meta-analysis in 2063 patients〔J〕.Br J Cancer，2004;90(11):2097-105.

4 秦 娥.支气管肺泡灌洗液CEA、CYFRA21-1测定在肺癌诊断中的应用价值〔J〕.中国老年学杂志，2008;28(19):1956-7.

5 张湘瑜，王艳姣.C-12多肿瘤标志物蛋白芯片对老年肺癌的诊断价值〔J〕.中国老年学杂志，2009;29(9):1108-10.

6 Jin B，Huang AM，Zhong RB，et al.The value of tumor markers in evaluating chemotherapy response and prognosis in Chinese patients with advanced nonsmall cell lung cancer〔J〕.Chemotherapy，2010;56(6):417-23.

7 Schneider J.Tumor markers in detection of lung cancer〔J〕.Adv Clin Chem，2006;42(1):1-41.

8 Tomita M，Shimizu T，Ayabe T，et al.Prognostic significance of the combined use of preoperative platelet count and serum carcinoembryonic antigen level in non-small-cell lung cancer〔J〕.Gen Thorac Cardiovasc Surg，2010;58(11):573-6.