贝飞达联合美沙拉嗪对溃疡性结肠炎大鼠 IL-10表达的影响

刘卓勋,颜 玉,薛 宇,鲍秀琦,姜 威

(佳木斯大学第一附属医院消化一科,黑龙江 佳木斯 154003)

溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)与克罗恩病(Crohn′s disease CD)合称为炎症性肠病 (inflammatory bowel IBD),UC是一种非特异性慢性直肠和结肠炎性疾病,病变主要位于结肠的黏膜及黏膜下层,以溃疡为主,多累及直肠和远端结肠,也可遍及整个结肠。UC作为一种癌前病变,其病因及发病机制尚不明确,遗传易感性、感染、免疫反应异常、肠道菌群等因素都可能与其相关。其中免疫机制日益受到人们的重视,促炎性细胞因子与抗炎性细胞因子之间的平衡被破坏引起的免疫异常被证明与 UC密切相关[1]。目前UC的药物治疗效果不十分理想,美沙拉嗪是被证实的对UC有确切治疗效果的药物 ,贝飞达为长型双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、粪肠球菌经适当配合而成的活菌制剂。本文通过检测美沙拉嗪与贝飞达联合治疗 UC大鼠后大鼠血清细胞因子IL-10的表达水平,研究益生菌治疗 UC的机制,为治疗 UC及益生菌的利用提供一些参考。

1 材料与方法

1.1 实验材料

大鼠 IL-10 ELISA试剂盒、美沙拉嗪肠溶片、贝飞达、36%乙酸、石蜡油、乙醚、离心机、酶标仪、大鼠灌胃针、乙醚罐。

1.2 药物配制

将36%乙酸用生理盐水稀释为5%乙酸溶液;1粒贝飞达胶囊去壳后溶于16mL蒸馏水;1片美沙拉嗪肠溶片溶于8mL蒸馏水;1粒贝飞达和两片美沙拉嗪肠溶片同时溶于16mL蒸馏水,制成混合药液后备用。

1.3 模型的建立及处理

健康 Wistar大鼠 32只,雌雄各半,体质量 180～ 220g,清洁级,由大连医科大学实验动物中心提供,随机分成四组(n=8):正常对照组 (G1)、模型对照组(G2)、美沙拉嗪治疗组 (G3)、贝飞达和美沙拉嗪联合治疗组(G4)。参考文献,大鼠禁食不禁水24h并用乙醚麻醉后,G1组采用生理盐水灌肠,其他组用5%乙酸溶液按0.25mL/100g缓慢注入肛门内约8cm处,将大鼠倒置20s后用大量生理盐水冲洗。24h后给药,G1、G2组:每天生理盐水 2mL/只灌胃;G3组:每天美沙拉嗪溶液2mL/只灌胃;G4组:每天贝飞达和美沙拉嗪混合药液2mL/只灌胃,每天各组大鼠用药时间相同。

1.4 IL-10测定

大鼠连续用药7d,禁食24h后乙醚麻醉下经腹主动脉采血4mL,4℃冰箱中静置3h,然后3000rpm离心15min,留取血清待检,采血后处死大鼠。采用 ELISA法测定大鼠血清 IL-10水平,严格按照试剂盒说明书进行操作。

1.5 统计学处理

统计学资料应用 SPSS17.0软件处理,各组资料以均数±标准差± s)表示 ,用 t检验,P ＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

G2组 IL-10表达低于 G1组,差异有统计学意义(P ＜ 0.05);G4组与 G3组 IL-10表达均高于 G2组,差异有统计学意义 (P＜0.05),其中 G4组 IL-10表达增高较 G3组明显,差异有统计学意义 (P ＜0.05)。见表1。

表1 大鼠血清 IL-10测定结果(pg/mL,±s)

表1 大鼠血清 IL-10测定结果(pg/mL,±s)

注:与正常组比较#P＜0.05;与模型组比较※P＜0.05;与美沙拉嗪组比较△P＜0.05,模型组大鼠治疗过程中死亡一只。

分组 n IL-10正常组(G1) 840.89±5.06模型组(G2) 79.11±1.79#美沙拉嗪治疗组(G3) 824.22±5.13※贝飞达美沙拉嗪联合治疗组(G4) 832.61±2.79※△

3 讨论

溃疡性结肠炎(UC)是一种病因及发病机制尚不十分清楚的慢性非特异性肠道炎症性疾病,人类为研究其病因、发病机制及治疗途径探索了多种建立实验动物模型的方法:化学刺激法、免疫学方法、复合法、中医学方法等,本文采用乙酸复制出类似人溃疡性结肠炎的大鼠模型,该模型操作简单、经济实用,成功率较高、制备周期较短,病理过程与人类活动期的 UC类似[2],故本文使用这种模型探索治疗 UC的药物。白介素细胞-10(IL-10)又称为细胞因子合成抑制因子,是在1989年由 Mdsmann等首先发现的一种有 Th1、Th2、Th17等多种细胞分泌的具有广泛免疫抑制活性的负向调节细胞因子。人 IL-10基因位于染色体1q21-32,长约 4.7kb,鼠 IL-10基因位于染色体 1E4,长约 5.1kb。有实验发现 UC患者结肠黏膜内 IL-10含量减少[3]。研究发现敲除 IL-10基因的小鼠可患自发性结肠炎[4],IL-10可能分泌相对不足,证明 UC时 IL-10在肠道免疫功能调节中发挥重要作用。本实验结果显示,模型组大鼠血清 IL-10表达低于正常组。美沙拉嗪治疗组与联合治疗组 IL-10表达均高于模型组,提示美沙拉嗪的治疗作用与增强 IL-10的表达相关。研究表明正常肠道菌群的改变对 UC的发生发展有直接作用。有临床实验显示 UC患者肠道内乳酸杆菌与双歧杆菌减少。补充益生菌可使原籍菌重新成为优势菌群,提高肠黏膜对致病菌的免疫应答,稳定肠黏膜屏障[5]。贝飞达是一种微生态制剂,由长型双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、粪肠球菌三种对人体有益的肠道固有菌群组成,本实验结果显示美沙拉嗪治疗组与联合治疗组 IL-10表达均高于模型组,其中联合治疗组 IL-10表达增高更为明显,提示贝飞达的治疗途径之一是通过调控 IL-10的表达达到的 ,但其治疗作用机制有待进一步研究与探索。

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