桑叶消渴胶囊对Ⅱ型糖尿病大鼠的影响

李 超，潘建明，罗新根，张相年，吴新荣

(广州军区广州总医院药剂科，广东 广州 510010)

桑叶为桑科植物桑(Morus alba L)的干燥叶，现代研究具有降血糖、降血压等多种生物活性[1]。桑叶消渴胶囊是本单位新研究的尚未上市的新药，主要成份为桑叶提取物，用于高血糖、高血脂症。桑叶在我国拥有很大的资源优势，古代医方中就用于清热、消炎、润燥、明目、治疗消渴病的记载。这些作用与人体许多慢性疾病密切相关，因此研究桑叶的药理作用意义深远。本文将对以桑叶提取物为主要原料的桑叶消渴胶囊给予Ⅱ型糖尿病大鼠，观察受试物其对胰岛素抵抗型动物的糖耐量，并通过长期给药观察动物血糖变化和对血脂影响。初步探讨桑叶消渴胶囊的降糖作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物 选用由南方医科大学动物中心提供的体重200～250 g Wistar大鼠，雄性，90只。许可证号：SCXK粤2006-0015，编号0056299。

1.2 试验药物

1.2.1 受试物 桑叶消渴胶囊，批号：060912，广州军区广州总医院制剂中心提供。

1.2.2 阳性物 阿卡波糖(拜糖平)50 mg。由德国拜耳公司生产，批号：117951。盐酸二甲双胍肠溶片250 mg，由河北天成药业有限公司，批号：09100902。造模剂，链尿佐菌素(STZ)每瓶50 g，批号：10122281，由Sigma公司提供。

1.2.3 淀粉 由黑龙江玉米淀粉厂提供，批号：20090918。

1.2.4 柠檬酸 广州化学试剂厂提供，批号20070502。

1.3 高糖高酯饲料 猪油15%、蔗糖20%、胆固醇5%、蛋黄粉5%、胆酸钠0.5%、基础饲料54.5%由广东省实验动物监测所制备，许可证号：SCXK(粤)2008-0002粤监证字2008D007。

1.4 仪器 血糖仪与配套试纸：罗康全活力型血糖检测仪，由德国罗氏公司生产(上海)。

2 方法

2.1 Ⅱ型糖尿病造模 取上述动物，按体重随机抽取10只作为正常对照组，其余80只作模型组，正常对照组给予普通饲料，模型组给予高糖高酯饲料，常规饲养，每周记录一次体重及24 h进食量，饲养5周，禁食24 h(不禁水)，模型组动物腹腔注射(ip)1%STZ(新鲜配制)剂量为28 mg/kg。ip后密切观察动物，如状态很差并开始死亡，马上注射中效胰岛素3 U/100 g。正常对照组动物ip同体积的柠檬酸缓冲液(调pH至4.5)0.28 ml/100 g。继续按原法饲养。1周后全部动物禁食4 h，由尾静脉取血用罗氏血糖仪检测血糖值，并尾静脉取血测定给药前的血清甘油三酯。

2.2 糖耐量(GTT)、降糖实验 取空腹血糖在＞16.0 mmol/L的Ⅱ型糖尿病动物40只，按血糖值随机分为四组，即空白对照组、受试物低、高剂量组、阳性对照组，每组10只，正常对照组12只。低、高剂量组分别灌胃(ig)受试物粉末250 mg/kg、1 000 mg/kg，阳性对照组ig盐酸二甲双胍肠溶片200 mg/kg，空白对照组与正常对照组均ig相同体积生理盐水，ig容量均为10 ml/kg，连续给药29 d，每天给药一次。期间，模型组动物继续喂养高糖高酯饲料，每周记录24 h进食量、体重。第26天进行GTT实验，试验当天阳性对照组改为拜糖平20 mg/kg，禁食过夜，测定空腹血糖(T0)给药时同时ig给予30%淀粉3 g/kg，分别于30 min、60 min、120 min后尾静脉取血用血糖仪测各组动物的血糖，并计算各组各时间点较给药前血糖升高值，与空白对照组进行组间均值比较。降糖实验于第29天先禁食4 h后给药测空腹血糖，给药后2 h尾静脉取血用测定餐后血糖。计算各组给药后较给药前血糖下降值并按下面公式计算血糖下降百分率，并尾静脉取血分离血清测定给药后的血清甘油三酯，用SPSS系统软件进行与空白对照组均值的比较。公式：血糖下降百分率(%)＝血糖下降值/给药前空腹血糖值×100%。

2.3 统计学方法 所有数据处理采用SPSS17.0软件进行统计分析。若各组方差齐采用单因素方差分析，用Dunnett-t检验法进行各剂量组与空白对照组之间的均数比较，P＜0.05为差异有统计学意义。

3 结 果

3.1 口服淀粉GTT血糖值 分别ig 250 mg/kg、1 000 mg/kg受试物对Ⅱ型糖尿病大鼠GTT各时间点血糖值的影响见表1。

表1 口服淀粉GTT血糖值(±s，n=10)

表1 口服淀粉GTT血糖值(±s，n=10)

空白对照组低剂量组高剂量组阳性对照组生理盐水250 1000 20 16.86±4.11 17.00±5.97 19.40±5.19 20.01±4.89 20.32±4.82 19.50±6.34 23.04±4.47 24.70±5.29 31.60±2.09 26.26±4.51 27.84±5.88 22.93±4.68 30.28±2.63 27.49±5.20 26.66±2.45 23.66±4.23

3.2 口服淀粉GTT血糖升高值 分别ig给予250 mg/kg、1 000 mg/kg受试物各组各时间点血糖升高值与空白对照组血糖升高值比较见表2。

表2 口服淀粉GTT血糖升高值结果(±s，n=10)

表2 口服淀粉GTT血糖升高值结果(±s，n=10)

注：与空白对照组比较，▲P＜0.01；▲▲P＜0.05，▲▲▲P＜0.01。

空白对照组低剂量组高剂量组阳性对照组生理盐水250 1000 20 3.46±3.58 2.50±3.49 3.64±3.56 4.69±5.29 14.74±2.88 9.26±4.60 8.44±4.12▲▲2.91±2.98▲▲▲13.41±2.34 10.49±5.53 7.26±4.04▲3.64±3.09▲▲▲

3.3 血糖影响结果 连续29 d分别ig给予250 mg/kg、1 000 mg/kg受试物对Ⅱ型糖尿病大鼠血糖值的影响见表3。

表3 血糖影响结果(±s，n=10)

表3 血糖影响结果(±s，n=10)

注：与正常对照组和空白对照组比较，▲P＜0.01；▲▲▲P＜0.01。

组别 血糖值(mmol/L)正常对照组空白对照组低剂量组高剂量组二甲双胍组剂量(mg/kg)生理盐水生理盐水250 1000 200给药前6.14±0.59 32.64±1.06 32.21±1.67 32.99±0.73 31.88±3.33给药后5.94±0.41 27.50±4.53 24.08±2.13 22.60±3.66 14.88±3.68血糖下降值0.20±0.67 5.14±3.90 8.14±2.83 10.39±3.72▲17.00±1.94▲▲▲下降率(%)3.3 15.7 25.3 31.5 53.3

3.3 甘油三酯影响结果 连续29 d分别ig给予250 mg/kg、1 000 mg/kg给予受试物对Ⅱ型糖尿病大鼠甘油三酯的影响见表4。

表4 甘油三酯影响结果(±s，n=10)

表4 甘油三酯影响结果(±s，n=10)

注：与正常对照组和空白对照组比较，▲P＜0.01；▲▲P＜0.05，

组别 甘油三酯(mmol/L)正常对照组空白对照组低剂量组高剂量组二甲双胍组剂量(mg/kg)生理盐水生理盐水250 1000 200给药前2.47±0.67 1.43±0.77 1.81±0.48 1.85±0.58 1.57±0.32给药后2.74±0.87 1.57±0.44 1.11±0.28 1.04±0.16 0.98±0.34下降值-0.27±0.06-0.15±0.08 0.69±0.16▲0.81±0.14▲▲0.58±0.11▲

4 结论

Ⅱ型糖尿病大鼠ig受试物分别250 mg/kg和1 000 mg/kg，低剂量组60 min后能显著抑制血糖吸收，与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)；高剂量组60 min、120 min均能显著抑制血糖吸收,与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01，P＜0.05)；对Ⅱ型糖尿病大鼠连续29 d给予受试物250mg/kg、1 000 mg/kg BW，低剂量组的血糖略有下降，差异无统计学意义(P＞0.05)，高剂量组动物的血糖显著下降(P＜0.05)。Ⅱ型糖尿病大鼠连续给药ig桑叶提取物250 mg/kg、1 000 mg/kg 29 d，低、高剂量组均能显著降低其甘油三酯，与空白组比较差异有统计学意义(P＜0.05，P＜0.01)。

5 讨论

糖尿病的病情发展与血糖浓度的变化密切相关，在调节血糖浓度中，缓解小肠对多糖与葡萄糖的吸收是一个重要机制[2]。本文的糖耐量实验结果显示桑叶消渴胶囊能显著缓解小肠对多糖吸收的作用。早在20世纪90年代日本学者对桑叶提取物做了大量的实验研究，他们发现桑叶对二糖类分解酶(Sucrase)活性有抑制作用[3]，桑叶消渴胶囊降糖的主要作用于淀粉消化的最后阶段，对二糖酶(麦芽糖和乳糖酶)有显著的抑制作用[4]，还有一些国外学者发现桑叶消渴胶囊对四氧嘧啶高血糖动物也具有显著降糖作用，认为主要作用机制是抑制了α-葡萄糖水解酶的催化作用[5]。有学者认为主要是桑叶中含有的DNJ(1-deoxynojirimycin)阻碍了α-糖苷酶的活性[2，6]。在我国也有报道糖尿病大鼠的ig给予桑叶消渴胶囊中的总黄酮，观察动物给药前后血糖的变化，并剥离小肠刷状缘模，匀浆后加入桑叶总黄酮，测定对双糖酶活性的抑制率，结果显示，桑叶总黄酮使糖尿病大鼠血糖降低，对蔗糖酶、麦芽糖酶、乳糖酶活性均有抑制作用，其降血糖的作用机制可能减缓小肠对碳水化合物的消化和吸收，从而使外周血糖变化稳定[6]。本文通过糖耐量实验显示出桑叶消渴胶囊在一定剂量下对胰岛素抵抗型的Ⅱ型糖尿病大鼠多糖的吸收有显著的抑制作用，糖耐量实验也能够表明受试物能够抑制胰腺兰格尔罕氏岛的病变进展，同时可以维持胰岛素的分泌，抑制血糖的升高，延缓糖耐病的发作。综上所述桑叶消渴胶囊可能是控制餐后血糖的有效手段。本实验对Ⅱ型糖尿病大鼠连续29 d给予桑叶提取物高剂量组动物的血糖显著下降，受试物组均能显著降低其甘油三酯，因此长期给药在控制餐后高血糖的同时，也能抑制血清脂质增加，为桑叶的新药开发提供可靠的实验数据。

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