正交试验优选安脉口服液醇提工艺报告

袁丽娟 滕步洋



正交试验优选安脉口服液醇提工艺报告

袁丽娟 滕步洋

（江苏省连云港中医药高等职业技术学校，连云港 222007）

优选安脉口服液的最佳醇提工艺。采用正交试验法，以绿原酸和肉桂酸为指标，对安脉口服液的醇提工艺进行优选。最佳醇提工艺为：加饮片总量8倍量的70%乙醇分3次回流提取，每次1.5h。该工艺稳定，可行。

绿原酸；肉桂酸；正交试验

安脉口服液系临床经验效方，该药由金银花、玄参、牛膝、石斛等活血化淤、养阴通络的中药制成，其疗效确切，副作用小，临床上主要用于血管闭塞性脉管炎、静脉血栓形成、动脉硬化性闭塞症、脑血栓形成及后遗症等病，随着临床经验的积累，其应用范围日渐扩大，在临床上得到广泛应用。本实验在原方剂基础上，以方中主要活性成分为指标，研究其提取工艺，将其制成口服液。

本文以乙醇浓度、乙醇用量、提取时间、提取次数等工艺条件为考察因素，以绿原酸、肉桂酸的含量为考察指标，采用L9（34）正交试验，结果进行方差分析，以确定各因素的显著性水平，从而得到该复方的最佳醇提工艺参数。

1 仪器、试剂与试药

1.1 仪器 Agilent 1100液相色谱仪（美国安捷伦科技有限公司）；VWD检测器；HKromasil®-C18（4.6mm×250mm，5μm）（大连依利特科技公司）；电子天平（Mettler Toledo AG285）；KQ-500E型医用超声清洗器（昆山超声仪器有限公司）；数显恒温水浴锅HH-4（巩义市英峪予华仪器厂）；自动双重纯水蒸馏器。

1.2 对照品 肉桂酸照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：110786-200403）、绿原酸照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：110753－200212）。

1.3 试剂 乙腈、甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。均购于上海化学试剂有限公司。

2 方法与结果

2.1 正交试验优选最佳乙醇回流提取工艺 在回流提取过程中，乙醇浓度、乙醇用量、提取次数以及回流提取时间等因素直接影响到提取效果，故选用乙醇浓度、乙醇用量、提取次数以及回流提取时间作为考察因素，每因素各选3个水平，见表1，进行L9（34）正交试验。

各正交样品液选用绿原酸和肉桂酸的含量为主要考察指标，所得结果进行方差分析。试验方法及结果如下。

表1 提取因素水平表

2.2 样品制备方法 称取9份处方药材饮片金银花、玄参、石斛、牛膝各20g，按正交表安排提取试验，分别浓缩定容到200ml容量瓶中，即得样品溶液。

2.3 HPLC测定不同提取方法样品液中绿原酸、肉桂酸的含量测定 照高效液相色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ D）测定。

2.3.1 绿原酸的含量测定[1]

2.3.1.1 色谱条件与系统适应性试验 色谱柱为Kromasil®-C18（4.6mm×250mm，5μm）；以乙腈-0.4%的磷酸水溶液（11∶89）；流速：1.0mL/min；检测波长327nm；理论塔板数不低于1500。

2.3.1.2 对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品适量，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每1ml含40µg的溶液，即得。

2.3.1.3 供试品溶液的制备 精密吸取醇提样品液2mL，加50%甲醇稀释至25ml，离心，取上清液，供测定用。其余70%、80%乙醇回流提取液，分别精密吸取2ml，加50%甲醇稀释至25ml，离心，取上清液，供测定用。

精密量取上述对照品和各供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，测定结果见表2。

2.3.2 肉桂酸含量测定[2]

2.3.2.1 色谱条件与系统适应性试验 色谱柱为Kromasil®-C18（4.6mm×250mm，5μm）；甲醇∶0.1%磷酸溶液（56∶44）为流动相；流速：1.0ml/min；检测波长为278nm；理论塔板数不低于1500。

2.3.2.2 对照品溶液的制备 精密称取肉桂酸对照品适量，置量瓶中，甲醇∶水（54∶46）制成每1ml含5μg的溶液，即得。

2.3.2.3 供试品溶液的制备 精密吸取醇提样品液2mL，加甲醇∶水（54∶46）稀释至25ml，离心，取上清液，供测定用。其余70%、80%乙醇回流提取液，分别精密吸取10ml，加甲醇∶水（54∶46）稀释至25ml，离心，取上清液，供测定用。

精密量取上述对照品和各供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，测定结果见表2。

2.4 测定方法与结果

表2 提取正交试验结果

表3 绿原酸提取含量方差分析表

表4 肉桂酸提取含量方差分析表

表5 综合得分方差分析表

根据表3，以绿原酸得率为考察指标，方差分析结果表明：B、C因素不同水平之间见有显著性差异，结合Ki值，其最佳的因素水平为A3B3C2D2。根据表4，以肉桂酸得率为考察指标，方差分析结果表明：B因素不同水平之间见有显著性差异，结合Ki值，其最佳的因素水平为A2B3C3D1。根据表6，以综合得分为考察指标，方差分析结果表明：A、B、C因素不同水平之间见有显著性差异，结合Ki值，其最佳的因素水平为A3B3C2D1。综合以上结果，综合考虑成本等因素，确定最佳的工艺参数为为A2B3C2D1，即以各饮片投料，加70%乙醇，回流提取3次，每次8倍量，每次1.5h。

2.5 最佳醇提工艺的验证 分别称取3份金银花、玄参、石斛、牛膝各20g，按上述最佳醇提工艺即以药材饮片投料，70%乙醇，回流提取3次，每次8倍量，每次1.5h进行最佳醇提工艺验证。验证结果见表6。

表6 最佳醇提工艺研究的验证表（n=3）

上述最佳乙醇提取工艺研究结果说明：优化提取的结果与正交表中的最优水平相似，说明本研究所确定的工艺合理可行，可操作性强。

3 讨论

3.1 本方采用正交试验法，优选安脉口服液醇提工艺，以绿原酸和肉桂酸含量为指标，分别用HPLC法进行含量测定，结果进行方差分析，最终优选出A2B3C2D1的制备工艺。通过最佳醇提工艺验证，所得结果与选定的工艺结果相似。通过最佳醇提工艺验证实验也可证明该工艺的合理性。

3.2 绿原酸的含量测定，药典采用乙腈∶0.4%磷酸溶液（13∶87）为流动相，最终确定以以乙腈∶0.4%的磷酸水溶液（11∶89）为流动相，分离效果较好。同时，肉桂酸采用的方法以流动相甲醇∶0.1%磷酸溶液（56∶44）分离效果较好。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].2005年版.北京:化学工业出版社,2005:153.

[2] 李文莉. HPLC测定脉络宁注射液及玄参药材中肉桂酸的含量[J].华西药学杂志,2007,22(1):091-09.

Study on Extracting Techniques of AnMai Orally Liquid

Yuan Lijuan Teng Buyang

Lianyungang Higher Vocational and Technical School of TCM, Lianyungang, 222007, China

Aim To optimize the alcohol extraction process of AnMai Orally liquid．Methods The alcohol extraction process of gongxueyin granules was optimized by the orthogonal design，with Caffeotannic acid，Cinnamic acid and the extraetum ag the indicators．Results The optimal process was adding 8 times 70%Mcohol into herbal pieeeq．then reflux extracting 3 times and 1.5 hours each time．Conclusion The optimal extraction process is stable and reasonable．

Caffeotannic acid; Cinnamic acid; Orthogonal experiment

10.3969/j.issn.1672-2779.2012.02.109

1672-2779（2012）-02-0156-02

2011-12-11

（本文校对：刘刚 ）