2011年新疆地区猪繁殖与呼吸综合征免疫抗体分析

彭晓铃，邵剑挺，盛卓君

（新疆维吾尔自治区动物卫生监督所，新疆 乌鲁木齐 830063）

猪繁殖与呼吸综合征（又称蓝耳病）（PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的猪的一种高度接触性传染病，以母猪流产、死胎、弱胎、木乃伊胎以及仔猪呼吸困难、败血症、高死亡率等为主要特征[1]。2006年，我国爆发了猪“无名高热病”的疫情，其死亡率高并且呈多发态势，故而造成了一定程度的恐慌，最终确定了变异猪蓝耳病病毒是猪“无高热病”主要病原，并定名为高致病性蓝耳病[2]。为了解新疆地区高致病性PRRS疫苗免疫情况，本试验应用ELISA方法对2011年全年来自新疆地区送检的猪血清进行了PRRSV抗体检测，现报告如下。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 检测样品

2011 年通过对不同饲养类型猪场各个阶段猪群随机采集15个地州80个县的510个猪场（户）的PRRS免疫猪的血清样品3932份，置于冰箱4 ℃保存，备检。

1.1.2 主要仪器与试剂

猪繁殖与呼吸综合征病毒ELISA抗体检测试剂盒，购置西班牙雅雷萨公司；酶标仪（TECAN）购置于澳大利亚公司；洗涤器，50 µL，100 µL微量移液器，一次性移液器吸头，稀释样品的U型96孔稀释板。

1.2 方法

1.2.1 操作步骤

将待检血清用稀释液100倍稀释，在用酶稀释液以1:100稀释浓缩酶，同时做2份阳性对照和2份阴性对照，均添加到酶标板上，37 ℃孵育1 h；弃去酶标板中的溶液 ，酶标板每孔加300 µL洗涤液洗涤5次，最后一次用吸水纸拍干；再向洗涤好的酶标板每孔加100 µL酶标记物，封板，20 ℃～25 ℃孵育45 min；弃去酶标板中的溶液 ，酶标板每孔加300 µL洗涤液再洗涤5次，向洗涤好的酶标板每孔加100 µL底物溶液，室温孵育15 min；最后再向温育好的酶标板每孔加终止液100 µL终止反应，用酶标仪测定OD405值。

1.2.2 结果判定 阳性对照的OD值要高于1.5，阴性对照的OD值要低于0.25。

1.2.3 CUT OFF值计算方法

CUT OFF值：阳性对照的OD值×0.15。样品的OD值高于CUT OFF值，PRRS抗体阳性。样品的OD值低于CUT OFF值，PRRS抗体阴性。

S/P计算：S/P=样品OD值/阳性对照的OD值。

2 结果

2.1 不同养殖类型猪场抗体检测

对来自510个散养户、商品代饲养场（户）、种猪场的PRRS弱毒疫苗免疫猪场的3932份血清样品进行PRRS免疫抗体检测，结果表明，不同类型的猪场PRRS免疫抗体整体水平较好，散养户免疫抗体水平合格率为78.05%，商品代饲养场户免疫抗体水平合格率为84%，种猪场免疫抗体水平合格率78.54%（表1）。

表1 不同类型猪场PRRS免疫抗体检测结果

2.2 不同日龄猪PRRS免疫抗体检测

将血清样品按照不同日龄和生长发育期分为母猪、育肥猪和仔猪，抗体检测结果显示，母猪群的PRRS免疫抗体合格率高于仔猪群与育肥猪群，达到90.24%；育肥猪群的免疫抗体合格率稍高于仔猪群，达到80.97%；仔猪最低群，为77.6%（表2）。

将生产母猪与后备母猪进行比较显示：后备母猪的PRRS免疫抗体合格率（92.93%）高于生产母猪（77.93%）（表2）。

表2 不同日龄PRRS血清免疫抗体检测结果

2.3 不同月份样品猪 PRRS 免疫抗体检测

将血清样品按照采集样品的不同月份进行分组统计和分析，结果表明，第一季度免疫抗体合格率比起其它三个季度较低，为65.95%；第二季度、第三季度、第四季度则分别为84.24%、79.24%、81.94%（表3）。

表3 不同季度PRRS血清免疫抗体检测结果

3 讨论

免疫抗体水平是反映猪群免疫状态的重要指标[3]，猪群中 PRRSV免疫状态，对于本病的防治具有重要意义。

目前，国内外诊断PRRS常用的血清学方法较多[4]。本试验选用西班牙雅雷萨公司的ELISA试剂盒进行检测，该方法用PRRSV ORF7基因在大肠杆菌中的表达产物纯化重组蛋白，作为包被抗原，从而保证了整个试剂盒中不存在感染性物质，降低了试验误差，提高了准确度，所测结果稳定，重复性好，操作简单快速，可用于大规模血样检测。

本研究对不同饲养养殖模式类型的猪场PRRS免疫抗体进行监测，结果显示合格率差距不大，说明新疆地区猪群PRRS疫苗免疫情况比较好，免疫密度达到较高水平，PRRS综合防疫措施基本到位。生产母猪群的血清阳性率高于仔猪，低于后备母猪。生产母猪PRRS抗体合格率低于后备母猪，可能是由于生产母猪分泌乳汁时，造成大量的抗体通过乳汁转给了仔猪，导致体内的抗体含量降低。断奶仔猪的免疫合格率最低，这是断奶后乳汁的母源抗体来源被终断，体内原有的母源抗体逐渐消耗下降，而疫苗免疫的抗体尚未大量产生的缘故。因此，检测母源抗体的消长规律，科学确定仔猪初次免疫的日龄时非常必要的。

加强PRRS疫情监测，将常规抗体监测和动态分析，纳入日常防疫工作中去，确定PRRSV最易发生循环传播的水平和机体抗感染最薄弱的的时间，采取措施实施有效控制。当PRRS抗体水平处于临界值之下时，应该及时进行有效控制（如紧急疫苗注射或补注疫苗）。通过猪群的综合系统检测，综合防控技术措施的实施，逐步净化才能有效地控制PRRS的发生，并建立与国际接轨的猪健康养殖生物技术体系[5]。

[1]殷 震，刘景华. 动物病毒学[M].2 版.北京：科学出版社，1997： 619-625.

[2]Zhou Y J，Hao X F，Tian Z J，et al. Highly virulent porcine reproductive and respiratory syndrome virus emerged in China[J].Transbound Emerg Dis，2008，55（3-4）：52-64.

[3]Albina E，Madec F，Cariolet R，et al. Immune response and persistence of the porcine reproductive and respiratory syndrome virus in infected pigs and farm units[J].Vet Rec，1994（134）：567-573.

[4]蔡宝祥，姜平. 我国PRRS诊断技术与疫苗研究进展[J].畜牧与兽医，2007（8）：1-4.

[5]郑杰，宁宜宝，赵启祖，等.高致病性变异株引起的猪繁殖与呼吸综合征在我国的发生与流行[J].中国兽医杂志，2007，43（6）：48-50.